СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2001 года по МПК A61K31/513 A61P31/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фтизиатрии.

В настоящее время основным способом лечения туберкулеза является химиотерапия, для проведения которой используют ряд основных препаратов: производные изоникотиновой и парааминосалициловой кислот и антибиотики (стрептомицин, рифампицин). Однако химиотерапия туберкулеза осложняется первичной и вторичной лекарственной устойчивостью микобактерий туберкулеза (МБТ) к известным препаратам. Поэтому постоянно идет поиск новых противотуберкулезных средств и новых способов лечения туберкулеза (патенты РФ: NN 2008902 A 61 K 31/21, 31/66; 2033159 A 61 K 31/47; 2080114 A 61 K 31/15, 31/295, 31/455).

Самым эффективным и наиболее широко применяемым в терапии туберкулеза и при экспериментальном туберкулезе средством является изониазид - гидразид изоникотиновой кислоты. Поэтому за прототип принят способ лечения экспериментального туберкулеза, включающий введение противотуберкулезного лекарственного препарата (М. Д. Машковский. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988. - Т. 2. - С. 315-316). В этом способе в качестве лекарственного препарата используют изониазид в дозах 6-15 мг/кг или 0,3-0,9 г в сутки, обычно 10 мг/кг в сутки.

Основные недостатки способа: быстрое развитие устойчивых к изониазиду форм МБТ, что снижает эффективность лечения, а также высокая токсичность изониазида.

Задача заявляемого изобретения - обеспечение эффективного лечения при расширении ассортимента используемых препаратов.

Для решения этой задачи в способе лечения экспериментального туберкулеза, включающем введение противотуберкулезного лекарственного препарата, авторы предлагают использовать в качестве противотуберкулезного препарата 2,4-Диоксо-5- фторпиримидин (фторурацил) в суточной дозе 1-2 мг/кг ежедневно.

Фторурацил относится к антиметаболической группе цитостатических средств и применяется при лечении рака в суточных дозах 10-15 мг/кг короткими курсами до 10 дней (М. Д. Машковский. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988. - Т. 2. - С. 455). Туберкулостатическая активность фторурацила была обнаружена авторами в эксперименте "invitro". Было установлено, что при концентрации 600 мкг/мл и более фторурацил подавляет рост МВТ и является туберкулостатическим средством. Однако этих данных недостаточно для использования фторурацила в лечении туберкулеза, так как неизвестно, будет ли фторурацил оказывать такое же действие на МВТ в живом организме.

Противотуберкулезную активность фторурацила изучали при длительном лечении экспериментального туберкулеза у морских свинок. Было установлено, что фторурацил в дозах 1-2 мг/кг по противотуберкулезному действию не уступает изониазиду и может использоваться для лечения экспериментального туберкулеза. Известно, что противотуберкулезные препараты должны применяться длительное время (2-3 месяца и более) вследствие продолжительного цикла деления МБТ. Проведенные авторами исследования показали, что фторурацил в суточной дозе 1-2 мг/кг можно применять ежедневно длительное время в качестве противотуберкулезного препарата, и эта доза не приводит к токсическому поражению организма.

Использование фторурацила в дозах менее 1 мг/кг приводит при лечении к результатам, менее эффективным, чем использование изониазида. Применение фторурацила в дозах, превышающих 2 мг/кг, сопровождается токсическими поражениями организма животных.

Исследования проводили на морских свинках, самцах и самках, массой 300-400 г. Было сформировано шесть групп животных: 4 опытные для изучения действия фторурацила, вводимого ежедневно внутримышечно в дозах 0,5; 1; 2; 2,5 мг/кг; одна сравнительная, получавшая ежедневно внутримышечно изониазид в дозе 10 мг/кг; и одна контрольная, не получавшая лечения. Каждая группа состояла из 7 животных. Продолжительность эксперимента составила 3 месяца. Моделирование заболевания у всех животных всех групп производили путем подкожной инъекции культуры МБТ, лабораторный штамм H37Rv, в дозе 0,025 мг в объеме 0,5 мл в правую паховую область. Контрольную группу оставляли без лечения. В ходе эксперимента проводили исследования и изучали параметры:
- гистологическое исследование тканей легких, селезенки, печени, интраторакальных и периферических (область заражения) лимфатических узлов;
- индекс поражения легких (ИПЛ) - рассчитывали по отношению веса легких к массе тела животного;
- индекс эффективности химиотерапии (ИЭХ) исследуемыми препаратами - рассчитывали по формуле: 100 - (ИПЛх100/ИПК), где ИПК - индекс поражения легких в контрольной группе;
- микробиологическое исследование гомогенатов внутренних органов на наличие МБТ;
- гемограммы - гемоглобин крови, состав форменных элементов крови;
- уровень белка сыворотки крови и его фракции.

Полученные параметры представлены в Табл. 1-3, куда включены и данные лабораторной нормы этих показателей.

Из контрольной группы животных 3 пали в ходе эксперимента в сроки от 1 до 3 месяцев. Причина - генерализованный туберкулез. Индекс поражения легких у всех выживших животных этой группы составил 0,0243 ± 0,0038 (Табл. 1). При вскрытии во всех случаях обнаружено множественное туберкулезное поражение внутренних органов с многочисленными очагами казеозного некроза. У всех выживших животных из гомогенатов внутренних органов были высеяны МБТ. Показатели крови в этой группе животных по сравнению с лабораторной нормой показали значительное снижение уровня гемоглобина, выраженный рост гранулоцитов и снижение количества лимфоцитов (Табл. 2). Протеинограммы свидетельствовали о развитии диспротеинемии за счет увеличения глобулиновых фракций b и y (Табл. 3). Все эти данные говорят о наличии выраженного специфического воспалительного процесса у животных.

Сравнительная группа животных ежедневно получала изониазид в стандартной дозе 10 мг/кг внутримышечно (прототип). Все животные в течение эксперимента оставались живы. При исследовании легких были обнаружены единичные субплеврально расположенные очаги лимфоидной инфильтрации, в двух случаях - пневмонические очаги. В ткани селезенки найдены лимфоидные гранулемы, в интраторакальных и периферических лимфоузлах - небольшие очаги склероза. В гомогенатах внутренних органов методом посева обнаружен рост МБТ. ИПЛ, равный 0,0111 ± 0,0008, и ИЭХ, составляющий 54%, говорят об эффективности применения изониазида в качестве противотуберкулезного средства для лечения экспериментального туберкулеза.

В первой опытной группе (0,5 мг/кг фторурацила) в ходе эксперимента погибло 4 животных. При исследовании внутренних органов были обнаружены признаки генерализованного туберкулеза, хотя степень поражения (количество туберкулезных очагов, участков казеоза) была менее выражена, чем у животных контрольной группы. Микробиологическое исследование методом посева внутренних органов у выживших животных подтвердило наличие МБТ. Лабораторные исследования в данной группе животных не проводились из-за явного отсутствия эффекта лечения.

Вторая опытная группа животных получала фторурацил в дозе 1 мг/кг. Все животные выжили. При исследовании легких у 3-х животных были выявлены ограниченные очаги пневмонии, в остальных случаях - фокусы лимфоидной инфильтрации. В интраторакальных и периферических лимфоузлах наблюдали обширные поля склероза, в двух случаях - с очагами казеозного некроза. В селезенке были обнаружены немногочисленные лимфоцитарные гранулемы, в печени - мелкие очаги цирроза. Во всех случаях выявлен рост МБТ внутренних органов. Величина ИПЛ примерно вдвое меньше, чем в контрольной группе и соответствует ИПЛ сравнительной группы, получавшей изониазид (Табл. 1). ИЭХ также находится на уровне сравнительной группы. При этом показатели крови соответствуют аналогичным показателям в группе сравнения и не содержат признаков токсического поражения организма животного фторурацилом.

Третья опытная группа животных получала фторурацил в дозе 2 мг/кг. Все животные в течение трехмесячного эксперимента оставались живы. При вскрытии у всех свинок были отмечены единичные мелкие плотные очаги в легких, в которых при гистологическом исследовании были обнаружены фокусы казеоза. Аналогичные изменения обнаружены в селезенке, внутригрудных и периферических лимфоузлах. В печени, в отличие от животных второй группы, обнаружены очаги цирроза. Данные посева показали наличие МБТ в гомогенатах внутренних органов. ИПЛ и ИЭХ соответствует этим индексам в группе сравнения, получавшей изониазид. Результаты исследования крови оказались сравнимыми с такими же исследованиями животных второй группы, что говорит об отсутствии выраженного токсического поражения организма фторурацилом.

Четвертая группа животных получала фторурацил в дозе 2,5 мг/кг. Четыре свинки в ходе эксперимента погибли в сроки от 5 до 12 недель. При вскрытии у всех свинок были отмечены единичные, мелкие плотные очаги в легких с очагами некроза и обширные пневмонические фокусы. В интраторакальных и периферических лимфоузлах и селезенке были обнаружены очаги склероза, в печени - обширные цирротические изменения. В гомогенатах внутренних органов обнаружен рост МБТ. Дополнительные исследования в этой группе животных не проводили из-за выраженности неспецифических поражений внутренних органов, вызванных токсическим воздействием фторурацила.

Проведенные опыты показали, что ежедневное длительное применение фторурацила в дозе 1 - 2 мг/кг для лечения экспериментального туберкулеза оказалось эффективным и по противотуберкулезному действию не уступает лечению изониазидом. Использование нового противотуберкулезного препарата (фторурацила) увеличивает эффективность лечения туберкулеза, так как к нему еще не появилась устойчивость МБТ.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фтизиатрии. Для этого предлагается в качестве противотуберкулезного препарата использовать 2,4-Диоксо-5-фторпиримидин (фторурацил) в суточной дозе 1-2 мг/кг ежедневно. В результате выявления туберкулостатических свойств фторурацила и изучения его противотуберкулезной активности "in vivo" в эксперименте на морских свинках установлено, что фторурацил в суточных дозах 1-2 мг/кг по противотуберкулезному действию не уступает изониазиду. Способ повышает эффективность лечения туберкулеза из-за отсутствия устойчивости микобактерий к заявленному веществу. 3 табл.

Способ лечения экспериментального туберкулеза, включающий введение противотуберкулезного лекарственного препарата, отличающийся тем, что в качестве противотуберкулезного препарата используют 2,4-Диоксо-5-фторпиримидин (фторурацил) в суточной дозе 1 - 2 мг/кг ежедневно.