СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/66 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в животноводстве.

В животноводстве одной из наиболее сложных проблем являются желудочно-кишечные заболевания молодняка сельскохозяйственных животных. Одним из средств предотвращения и лечения этих заболеваний считаются пробиотические препараты и кормовые добавки, содержащие живые клетки полезных микроорганизмов, в частности бифидобактерии, включение которых в рационы способствует повышению естественной резистентности молодняка к желудочно-кишечным заболеваниям, а также стимулирует их рост и развитие, позволяет сократить и уменьшить применение антибиотиков /1,2/.

Известны бактериальные препараты, в состав микрофлоры которых входят бифидобактерии: "бифидумбактерин", "бифацидобактерин", "бифимол", "пробиовет" и другие, а также биологически активные кормовые добавки и средства /1,2,3,4,5/, обладающие лечебно-профилактическими свойствами.

Перспективно обогащение микробиоценоза кишечника не только одной культурой, но и комплексом специально подобранных штаммов. Для усиления лечебно-профилактических свойств бифидосодержащих препаратов целесообразно совместное использование бифидобактерий с другими представителями нормальной кишечной микрофлоры, поскольку более высокая эффективность в отношении профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний установлена от применения комплексных препаратов, содержащих микроорганизмы с разносторонней биологической активностью /2,4,5/. Это обусловлено тем, что микроорганизмы способны локализоваться в разных отделах пищеварительного канала, имеют отличия в механизме антагонистического действия на вредную кишечную микрофлору и тем самым оказывают различное взаимодополняющее положительное влияние на состав микрофлоры кишечника, иммунный статус макроорганизма и его устойчивость к желудочно-кишечным инфекциям.

Известны пробиотические препараты, содержащие Bacillus subtilis, используемые в ветеринарии, например бациллярный препарат субтилис "БПС-44", пробиотический препарат "бактоцеллолактин", в состав микрофлоры которого входят Bacillus subtilis, Lactobacillus plantarum, Ruminococcus albus.

Дополнительное введение в состав микрофлоры пробиотических препаратов Bacillus subtilis способствует усилению их лечебно-профилактических свойств. В отличие от других микроорганизмов бактерии вида Bacillus subtilis способны обеспечивать более тесный контакт с тканями организма, поскольку образуют споры, сохраняющие в течение определенного времени жизнеспособность в макроорганизме. Поступая в пищеварительный тракт даже в более низких количествах, они могут, оставаясь жизнеспособными, проходить в дистальные отделы кишечника и адаптироваться в пищеварительном канале.

Технология получения бактериальных препаратов и биологически активных кормовых добавок включает предварительное выращивание микроорганизмов в различных питательных средах с целью накопления биомассы, концентрацию биомассы, а также ее консервирование, предполагающее в большинстве случаев использование сушки различными способами.

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является способ получения бактериального препарата для кормового средства, содержащего бифидобактерий и молочнокислые бактерии, предусматривающий накопление биомассы бифидобактерий совместно с ацидофильной палочкой и молочнокислыми стрептококками (Пат. 2035184 Россия, МКИ⁶A 61 К 35/66, С 12 N 1/20) /3/.

Недостатком известного способа является использование в составе заквасочной микрофлоры только культур бифидобактерий (одного вида) и молочнокислых бактерий, что снижает профилактические свойства препарата.

Целью предлагаемого изобретения является повышение лечебно-профилактической эффективности пробиотических препаратов и биологически активных кормовых добавок.

Сущность изобретения заключается в комплексном использовании в составе микрофлоры пробиотической добавки бифидобактерий, ацидофильной палочки и Bacillus subtilis. С этой целью ферментацию питательной среды предлагается осуществлять следующими культурами микроорганизмов: Bifidobacterium longum T-89, Bifidobacterium thermophiluin ТП-8, Lactobacillus acidophilus 97 и Bacillus subtilis Б-26.

Эффективность пробиотической добавки, получаемой по предлагаемому способу, обуславливается одновременным действием всех используемых культур. Дополнительное введение в состав микрофлоры пробиотической добавки, получаемой по предлагаемой нами технологии, микроорганизмов вида Bacillus subtilis, позволяет повысить лечебно-профилактические свойства добавки в сравнении с известными биологически активными препаратами и добавками.

Пример. При реализации предлагаемого способа используются штаммы бактерий, являющиеся собственностью Музея чистых культур микроорганизмов кафедры эпизоотологии и микробиологии ВГМХА им. Н.В. Верещагина и поддерживающиеся в рабочем состоянии.

Выращивание бактерий осуществляется на питательной среде следующего состава (г/л): лактоза - 5, пептон - 5, молочная сыворотка - 200, дрожжевой экстракт - 5, кукурузный экстракт - 1, гидролизованное молоко - 100, вода - до 1 л, рН - 6,7. Питательную среду стерилизуют при 121^oС в течение 15 мин, затем охлаждают до температуры 37^oС и заквашивают чистыми культурами Bifidobacterium longum T-89, Bifidobacterium thermophilum ТП-8 и Lactobacillus acidophilus 97 при начальном соотношении культур 5:5:1, которые вносят в количестве 6-8% к объему среды. Совместное выращивание бифидобактерий и ацидофильной палочки проводят при 37^oС в течение 12-14 ч до достижения рН 5,0. После этого среду нейтрализуют до рН 6,0 и дополнительно вносят 1% чистой культуры Bacillus subtilis Б-26 и продолжают совместное выращивание бифидобактерий, ацидофильной палочки и Bacillus subtilis Б-26 при 37^oС в течение 6-8 ч до достижения рН 4,6. В конце роста культуральную среду охлаждают до 14^oС и проводят отделение биомассы от культуральной среды центрифугированием. Полученную биомассу смешивают с глюкозой в соотношении 1:15 и высушивают.

Предлагаемый способ получения пробиотической добавки позволит:
- осуществить комплексное использование культур бифидобактерий, ацидофильной палочки и Bacillus subtilis;
- получить в 1 г добавки содержание жизнеспособных клеток бифидобактерий до 10¹², ацидофильной палочки до 10⁹, Bacillus subtilis - до 10⁹;
- использовать добавку в качестве профилактического средства при желудочно-кишечных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных и стимулирования его роста и развития.

Источники информации
1. Платонов А. В. Производство препаратов для животноводства на основе микроорганизмов-симбионтов желудочно-кишечного тракта. М.: 1985. - 44 с.

2. Грунская В.А., Эрвольдер Т.М., Гудков С.А. Использование бифидобактерий в рационах молодняка сельскохозяйственных животных. - М.: АгроНИИТЭИММП. 1991. - 24 с.

3. Пат. 2035184 Россия, МКИ⁶ А 61 К 35/66. С 12 N 1/20 Способ получения бактериального препарата для производства кормового средства /Гудков А.В., Эрвольдер Т.М., Грунская В.А., Душенин Н.В., Таткина Л.Д.; ВНИИ маслоделия и сыроделия. 4919189/13; Заявл. 02.01.90; опубл. 20.05.95. - Бюл. 14.

4. Тараканов Б.В. Использование микробных препаратов и продуктов микробного синтеза в животноводстве. - М.: 1987. - 48 с.

5. Гудков А.В., Гудков С.А., Козловская М.Л., Перфильев ГД. Бифидобактерии: Биология, роль в жизнедеятельности человека и животных. Производство бифидосодержащих продуктов. - Углич. - 1999. - 64 с.

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в животноводстве. Способ предусматривает совместное выращивание микроорганизмов в питательной среде, отделение бактериальной массы от культурной среды, смешивание ее с защитной средой и сушку. Заквашивание осуществляют чистыми культурами Bifidobacterium longum T-89, Bifidobacterium thermophilum ТП-8, Lactobacillus acidophilus 97, которые вносят в количестве 6-8% к объему среды при начальном соотношении культур 5:5:1. Бифидобактерии и ацидофильную палочку выращивают совместно в течение 12-14 ч, при температуре 37-38^oС, после достижения pH 5,0-5,2 и нейтрализации среды до рН 6,0 дополнительно вводят чистую культуру Bacillus sibtilis Б-26 и продолжают совместное выращивание всех микроорганизмов до достижения рН среды 4,5-4,6. Предлагаемый способ позволяет повысить содержание жизнеспособных клеток полезной микрофлоры.

Способ производства пробиотической добавки, предусматривающий приготовление питательной среды, внесение чистых культур бифидобактерий и ацидофильной палочки, совместное выращивание, отделение накопленной биомассы, смешивание с защитной средой и высушивание, отличающийся тем, что заквашивание осуществляют чистыми культурами бифидобактерий Bifidobacterium longum T-89, Bifidobacterium thermophilum ТП-8, Lactobacillus acidophilus 97, взятым в соотношении 5: 5: 1, которые вносят в количестве 6-8% к объему среды, выращивание ведут совместно при 37-38^oС до достижения рН 5,0-5,2, после чего среду нейтрализуют до рН 6,0, дополнительно вносят чистую культуру Bacillus subtilis Б-26 и продолжают совместное выращивание до достижения рН готового продукта 4,5-4,6.