RGD-СОДЕРЖАЩИЕ ПЕПТИДЫ Российский патент 2003 года по МПК C07K5/09 C07K5/103 C07K7/06 A61K38/06 A61K38/08 A61P37/00 

Изобретение относится к области химии пептидов, а именно:
1. К пептидам общей формулы
R³-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR²,
где R¹ есть бензил или трет-бутил;
R² не равен R¹ и выбирается из группы: трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 4-нитробензил; дифенилметил; 2,2,2-трихлорэтил; 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил; аллил; 9-флуоренилметил; карбоксамидометил; замещенный 2-сульфонилэтил вида A-SO₂-CH₂-CH₂-, где А представляет собой замещенный либо незамещенный фенил или бензил; R³ представляет собой атом водорода либо уретановую защитную группу вида В¹O-СО-, где В¹ не равен R¹ и может принимать значения: трет-бутил, бензил, 4-метоксибензил, 9-флуоренилметил, 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил; либо представляет собой пептидил, содержащий от одного до трех аминокислотных остатков.

2. К пептидам указанной формулы, где R³ представляет собой пептидил структуры E-Z-Y-X-, в котором
E есть атом водорода либо уретановая защитная группа вида В²O-СО-, где
В² не равен R¹ и может принимать значения: трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 9-флуоренилметил; 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил; Х отсутствует либо равен Gly;
Y есть Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Lys(G) или Orn(G), где G есть уретановая защитная группа вида В³O-СО-, в которой В³=R¹, присоединенная к омега-аминогруппе;
Z может принимать значения: Phe или D-Phe.

Аминокислотная последовательность Arg-Gly-Asp, или RGD в однобуквенной кодировке, является универсальным структурным мотивом большинства белков межклеточного матрикса, опосредующих адгезию различных типов клеток in vivo. Установлено, что RGD-мотив является основным структурным элементом белков матрикса, принимающим непосредственное участие в связывании с клеточными рецепторами. Различные RGD-связывающие клеточные рецепторы имеют между собой значительное структурное сходство и относятся к суперсемейству интегринов - мембранных белков, имеющих субъединичную структуру αβ. Интегрины, в свою очередь, делятся на несколько групп (семейств) в зависимости от типа входящей в их состав β-субъединицы. Каждый интегрин может связывать один лиганд (например, рецептор фибронектина) или несколько различных белков-лигандов (например, гликопротеин gpIIb/IIIa тромбоцитов), и специфичность связывания лигандов для интегринов разных семейств и даже видов может существенно различаться, несмотря на то, что все эти лиганды содержат один и тот же сайт связывания RGD. Это, по-видимому, связано с высокой чувствительностью рецепторов к конформации сайта связывания в белке-лиганде (Е. Ruoslahti, Ann. Rev. Biochem., 1988, 57, 375; R. Hynes, Cell, 1992, 69, ll).

Синтетические пептиды, содержащие RGD-мотив, открывают возможность селективной модуляции клеточно-матриксных и межклеточных взаимодействий и поэтому рассматриваются в настоящее время как перспективный новый класс лекарственных средств для исследования, диагностики, лечения и профилактики заболеваний, связанных с подобными взаимодействиями, в частности сердечно-сосудистых заболеваний, тромбозов, воспалений и аутоиммунных расстройств, некоторых видов опухолей.

Направленного изменения рецепторной специфичности RGD-содержащих пептидов можно добиться путем изменения предпочтительных конформаций либо ограничения конформационной подвижности RGD-сайта в конструируемом пептиде. Эффективным способом для этого является циклизация пептида, которая может быть осуществлена различными методами. Известны способы циклизации RGD-пептидов через образование дисульфидной связи между специально введенными в пептид остатками цистеина или его аналогов (например, Европейский патент ЕР 0275748; патент США 5643872; патент США 5648330). Описано несколько вариантов циклизации путем образования карбоксамидной связи между амино- и карбоксигруппами в боковых цепях аминокислот (например, патент США 521210). Ряд пяти- и шестичленных RGD-содержащих циклопептидов получен циклизацией основной пептидной цепи "голова к хвосту" - внутримолекулярной конденсацией α-аминогруппы с α-карбоксильной группой линейного предшественника (патенты США 5849692, 5866540, 6127335), причем некоторые из таких пептидов проявили высокую селективность по отношению к определенным типам интегриновых рецепторов. В частности, пептид цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val) (R. Haubner, et al. , J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 7461; патент США 5866540) оказался активным и высокоселективным антагонистом интегриновых рецепторов α_Vβ₃/α_Vβ₅, играющих важную роль в ангиогенезе, индуцированном злокачественными опухолями, и рассматривается как перспективное противораковое лекарственное средство.

Очевидно, что имеется насущная необходимость в эффективных и универсальных методах химического синтеза RGD-содержащих циклопептидов, позволяющих получать разнообразные пептиды указанного типа для лабораторного изучения и клинических испытаний.

В патенте США 5849692 описан синтез пяти- и шестичленных циклопептидов циклизацией в растворе линейных предшественников вида H-Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aaa¹-Aaa²-(Aaa³)-OH (Ааа¹, Ааа², Ааа³ - аминокислотные остатки). Линейные пептиды, в свою очередь, получали твердофазным синтезом на 4-гидроксиметилфеноксиметилполистирольной смоле и снимали с полимера действием трифторуксусной кислоты. В патенте США 5866540 для циклизации использовались линейные пептиды вида H-Arg-Gly-Asp-Aaa¹-Aaa²-(Aaa³)-OH, полученные, очевидно, синтезом в растворе. Практическая осуществимость данных методов представляется сомнительной, так как исходные пептиды, помимо концевой α-карбоксильной группы, содержат также свободную β-карбоксильную группу остатка Asp, и попытка их циклизации под действием конденсирующих агентов неизбежно должна привести к сложной смеси продуктов.

В упомянутой работе (R. Haubner, et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 7461) пятичленные циклопептиды синтезировали циклизацией в растворе линейных пептидов вида H-Asp(OtBu)-Aaa¹-Aaa²-Arg(Mtr)-Gly-OH, которые получали твердофазным синтезом на 2-хлортритильном полимере. В дальнейшем этот подход был усовершенствован в основном за счет замены Mtr-защиты Arg на более кислотолабильные группы Рmc или Pbf и оптимизации реагентов и условий циклизации (X. Dai, et аl., Tetrahedron Lett., 41, 6295; D. Boturyn, P. Dumy, 2001, Tetrahedron Lett., 42, 2787). Данный метод пригоден для масштабирования, однако такое масштабирование предполагает использование дорогостоящих исходных материалов - защищенных аминокислот, специальных полимеров и конденсирующих реагентов для твердофазного синтеза.

Таким образом, существует необходимость в эффективных, универсальных и масштабируемых способах получения RGD-содержащих циклопептидов.

Целью предлагаемого изобретения является изыскание новых линейных пептидов, которые можно было бы использовать в качестве исходных соединений для синтеза RGD-содержащих циклопептидов.

В соответствии с указанной целью предметом изобретения являются новые трипептиды общей формулы
R³-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR², (Ia,b)
которые имеют С-концевой остаток аспарагиновой кислоты в виде α,β-диэфира. α-Аминогруппа данных пептидов может быть свободной (Ib; R³=Н) или блокированной уретановой защитной группой вида В¹O-СО- (Ia; R³=B¹O-CO-). Заместитель R¹ представляет собой защитную группу для β-карбоксила остатка Asp из числа обычно применяемых для этой цели в пептидном синтезе - бензильную или трет-бутильную. Защитная группа R² для α-карбоксила Asp отлична от R¹ и выбирается таким образом, чтобы ее можно было селективно удалить, не затрагивая группы R¹.

Для R¹=бензил R² выбирается из числа групп, удаляемых ацидолизом в мягких условиях (трет-бутил; 4-метоксибензил; дифенилметил), химическим восстановлением (2,2,2-трихлорэтил; 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил; 4-нитробензил), катализируемым основаниями β-элиминированием (9-флуоренилметил; замещенный 2-сульфонилэтил вида A-SO₂-CH₂-CH₂-, где А представляет собой замещенный либо незамещенный фенил или бензил), либо при действии комплексов Pd(0) (аллил).

Если R¹= трет-бутил, то R² может быть выбрана из числа групп, удаляемых каталитическим гидрогенолизом (бензил, 4-метоксибензил; дифенилметил, 4-нитробензил), химическим восстановлением (2,2,2-трихлорэтил; 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил; 4-нитробензил), катализируемым основаниями β-элиминированием (9-флуоренилметил; замещенный 2-сульфонилэтил вида A-SO₂-CH₂-CH₂-, где А представляет собой замещенный либо незамещенный фенил или бензил), щелочным гидролизом в мягких условиях (карбоксамидометил), либо при действии комплексов Pd(0) (аллил).

Группа R³ в пептидах Iа подбирается таким образом, чтобы ее можно было удалить либо селективно, не затрагивая групп R¹ и R², либо одновременно с группой R². В зависимости от сочетания групп R¹ и R² защитную группу R³ можно выбрать из числа известных уретановых защитных групп, таких как трет-бутоксикарбонильная, бензилоксикарбонильная, 4-метоксибензилоксикарбонильная, 9-флуоренилметоксикарбонильная, 2-(4-нитрофенилсульфонил)этоксикарбонильная.

Трипептиды формулы Iа,b являются универсальными исходными соединениями для получения линейных предшественников циклических RGD-пептидов произвольной структуры: во-первых, они содержат целиком всю инвариантную аминокислотную последовательность RGD; во-вторых, они могут быть надстроены с N-конца добавлением аминокислотных остатков или пептидных сегментов до линейного предшественника желаемой структуры; в-третьих, α-амино- и α-карбоксильные группы синтезированных линейных предшественников могут быть селективно деблокированы для последующего проведения направленной циклизации.

Другим предметом настоящего изобретения являются линейные пептиды, которые могут быть получены наращиванием описанных выше трипептидов формулы Iа, b с N-конца на 1-3 аминокислотных остатка и далее использованы для получения физиологически активных циклических RGD-пептидов путем циклизации и последующего деблокирования. Такое наращивание может быть осуществлено с использованием методов и приемов, известных в химии пептидов. Предметом изобретения, в частности, являются пептиды общей формулы
E-Z-Y-X-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR², (II)
в которых Е есть атом водорода либо уретановая защитная группа вида B²O-CO-, где В² не равен R¹ и может принимать значения: трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 9-флуоренилметил; 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил;
X отсутствует либо равен Gly;
Y есть Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Lys(G) или Orn(G), где G есть уретановая защитная группа вида B³O-CO-, где В³=R¹, присоединенная к омега-аминогруппе;
Z может принимать значения: Phe или D-Phe.

Синтез трипептидов формулы Iа можно осуществить, начиная с α,β-диэфира аспарагиновой кислоты формулы H-Asp(OR¹)-OR² (III), где R¹ и R² принимают указанные выше значения. Многие диэфиры III являются известными соединениями, описанными в литературе, некоторые диэфиры являются новыми веществами, однако их можно получить, используя известные методы и приемы. В частности, диэфиры III могут быть получены путем этерификации α-карбоксильной группы β-бензилового или β-трет-бутилового эфира N_α-защищенной аспарагиновой кислоты с последующим удалением N_α-защиты. Этерификацию можно провести, конденсируя β-эфир N_α-защищенной аспарагиновой кислоты с соответствующим спиртом под действием конденсирующего реагента, либо путем алкилирования соли β-эфира N_α-защищенной аспарагиновой кислоты соответствующим алкилгалогенидом или иным алкилирующим производным. Методы, реагенты и условия для проведения указанных реакций описаны в литературе (например, Р. Kocienski, Protecting Groups, Corrected Edition, Thieme, Stuttgart-N.-Y., 2000). N_α-Защитная группа для исходного β-эфира аспарагиновой кислоты подбирается таким образом, чтобы ее можно было удалить селективно, не затрагивая групп R¹ и R². В зависимости от сочетания групп R¹ и R² N_α-защитную группу можно выбрать из числа известных уретановых защитных групп, таких как трет-бутоксикарбонильная, бензилоксикарбонильная, 4-метоксибензилоксикарбонильная, 9-флуоренилметокси-карбонильная, 2-(4-нитрофенилсульфонил)этоксикарбонильная.

Трипептиды Iа далее синтезируют путем последовательного присоединения по α-аминогруппе полученного диэфира III остатков Gly и Arg в виде N_α-защищенных производных. N_α-Защитные группы для этой цели подбирают, как описано выше для получения диэфиров III. Альтернативно трипептиды Iа получают путем конденсации диэфиров III с дипептидами формулы R³-Arg-Gly-OH (IV), где R³ может принимать значения, приведенные выше для трипептидов Iа. Дипептиды IV, в свою очередь, могут быть получены конденсацией N_α-защищенных производных аргинина R³-Arg-OH со сложными эфирами глицина с последующим расщеплением сложноэфирной группы в полученном эфире дипептида.

Трипептиды Ib со свободной α-аминогруппой получают селективным удалением N_α-защитной группы из соединений Iа.

Пептиды II можно синтезировать путем последовательного присоединения по α-аминогруппе трипептида Ib желаемых аминокислотных остатков в виде N_α-защищенных производных. N_α-Защитные группы для этой цели подбирают, как описано выше для получения диэфиров III и трипептидов Iа. Пептиды II могут быть также получены конденсацией трипептидов Ib с предварительно синтезированными пептидными сегментами вида E-Z-Y-X-OH. Группа Е подбирается таким образом, чтобы ее можно было удалить либо селективно, не затрагивая групп R¹ и R², либо одновременно с группой R². В зависимости от сочетания групп R¹ и R² защитную группу Е можно выбрать из числа известных уретановых защитных групп, таких как трет-бутоксикарбонильная, бензилоксикарбонильная, 4-метоксибензилоксикарбонильная, 9-флуоренилметоксикарбонильная, 2-(4-нитрофенилсульфонил)этоксикарбонильная.

Если в боковых радикалах присоединяемых аминокислотных остатков или пептидных сегментов содержатся функциональные группы, нуждающиеся в блокировании, например аминогруппы, карбоксильные группы, тиольные группы, то защитные группы для их блокирования выбирают таким образом, чтобы эти защитные группы были устойчивы в условиях удаления N_α-защитных групп при последовательном (ступенчатом) наращивании пептидной цепи, а также в условиях удаления групп Е и R². На практике целесообразно, чтобы эти боковые защитные группы можно было удалить после циклизации линейного пептида одновременно с группой R¹. Боковые защитные группы подбирают из числа известных защитных групп, применяющихся в синтезе пептидов. Например, если R¹=бензил, то боковые аминогруппы можно блокировать бензилоксикарбонильными защитами, карбоксильные - в виде бензиловых эфиров, тиольные - 4-метоксибензильными, дифенил-метильными или тритильными защитами; при R¹=трет-бутил можно использовать, соответственно, N-трет-бутоксикарбонильные, трет-бутильные и S-тритильные защитные группы. Адекватный выбор группы R¹ и других боковых защитных групп для конкретного сочетания групп Е и R², или, наоборот, необходимого сочетания групп Е и R² для конкретного значения группы R¹ и типа боковой защиты может быть осуществлен специалистом в области химии пептидов без дополнительного изобретательства, на основе правил, изложенных в настоящем описании, и известной информации об устойчивости защитных групп и способах их удаления.

Путем селективного удаления групп Е и R² из пептидов II получают линейные пептиды со свободными α-амино- и α-карбоксильными группами, пригодные для последующей циклизации с целью получения циклических RGD-пептидов. Циклизацию целесообразно проводить в разбавленном растворе при исходной концентрации линейного пептида от 0.1 до 10 мМ, предпочтительно от 0.4 до 2 мМ. В качестве растворителя используются апротонные растворители, способные растворять исходные реагенты и продукты реакции, например диметилформамид, диметилацетамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил, тетрагидрофуран, дихлорметан и иные растворители. Циклизация осуществляется при действии известных конденсирующих реагентов, например дициклогексилкарбодиимида, дифенилфосфорилазида, гексафторфосфата бензотриазолил-1-окси-трис(диметиламино)фосфония (ВОР-реагент), гексафторфосфата или тетрафторбората бензотриазолил-1-окси-тетраметилурония, или иных реагентов. Разнообразные варианты приемов, условий и реагентов для проведения циклизации пептидов описаны в литературе.

По завершении реакции циклизации из реакционной смеси удаляют растворитель, например, отгонкой при пониженном давлении, выделяют защищенный циклопептид и подвергают его деблокированию, после чего очищают целевой циклический RGD-пептид известными способами, например адсорбционной, обращенно-фазовой или ионообменной хроматографией, либо комбинацией хроматографических методов. Альтернативно защищенный циклопептид может быть очищен хроматографически до проведения стадии деблокирования. Реагенты и условия для деблокирования выбирают в зависимости от природы группы R¹ и других имеющихся защитных групп. В частности, если R¹=бензил, то деблокирование можно осуществить путем каталитического гидрогенолиза либо при действии сильных кислот, например жидкого фтористого водорода; метансульфокислоты, трифторметансульфокислоты или их растворов в трифторуксусной кислоте; растворов бромистого водорода в уксусной или трифторуксусной кислоте. Если R¹=трет-бутил, то для деблокирования используется ацидолиз, например, при действии трифторуксусной кислоты или ее растворов в метиленхлориде, растворов хлористого водорода в уксусной кислоте, диоксане, тетрагидрофуране или этилацетате. Для деблокирования могут также применяться иные известные реагенты, предназначенные для удаления защитных групп бензильного или трет-бутильного типа.

Сущность предлагаемого изобретения иллюстрируется примерами. При описании примеров используются следующие сокращения и условные обозначения:
ДИЕА - N,N-диизопропилэтиламин
ДМФА - диметилформамид
ДЦГК - дициклогексилкарбодиимид
ОБТ- 1-гидроксибензотриазол
ТГФ - тетрагидрофуран
ТФУ - трифторуксусная кислота
ТЭА - триэтиламин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
4-DMAP - 4-диметиламинопиридин
Аll -аллил
Воc - трет-бутоксикарбонил
Bzl - бензил
Cam - карбоксамидометил
Cbz - бензилоксикарбонил
Cpse - 2-(4-хлорфенилсульфонил)этил
Dpm - дифенилметил
Fm - 9-флуоренилметил
Fmoc - 9-флуоренилметоксикарбонил
Mbzl - 4-метоксибензил
Mcbz - 4-метоксибензилоксикарбонил
Nb - 4-нитробензил
Nse - 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил
Nsc - 2-(4-нитрофенилсульфонил)этоксикарбонил
Pfp - пентафторфенил
Phse - 2-фенилсульфонилэтил
Pse - 2-(4-фенилазобензилсульфонил)этил
tBu - трет-бутил
Tce - 2,2,2-трихлорэтил
Tctbu - 2,2,2-трихлор-трет-бутил
Сокращенные обозначения аминокислот и защитных групп используются в соответствии с рекомендациями Комиссии по биохимической номенклатуре при IUPAC-IUB, опубликованными в Eur. J. Biochem., 1984, 138, 1, pp. 9-37. Оптически активные аминокислоты и их производные, приведенные в описаниях примеров, по умолчанию имеют L-конфигурацию.

Значения хроматографических подвижностей R_f приведены для пластинок для тонкослойной хроматографии Alufolien Kieselgel 60 F254 (Merck, ФРГ) в системах хлороформ-метанол-уксусная кислота, 95:5:3 (А) или 90:10:3 (Б); этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода, 60:5:15:10 (В). Обнаружение пятен на пластинках проводили в УФ-свете и нингидриновым реактивом после прогревания. Массы молекулярных ионов (М +H)⁺ измерены на масс-спектрометре MALDI-TOF VISION 2000 (Thermo Bioanalysis, Англия). Анализ аминокислотного состава проводили на анализаторе Biotronik LC5001 после кислотного гидролиза образцов пептидного материала в запаянных ампулах (3 М метансульфокислота, 1% фенол, 24 ч, 110^oС).

Пример 1. Получение α,β-диэфиров аспарагиновой кислоты (III)
а. α-(2-Фенилсулъфонил)этиловый эфир β-бензиласпарагиновой кислоты (Н-Asp(OBzl)-OPhse, III-1). К раствору 3.24 г Boc-Asp(OBzl)-OH, 2.2 г 2-(фенилсульфонил)этанола и 0.12 г 4-ДМАП в 30 мл этилацетата при охлаждении до 0^oС и перемешивании добавляют 2.4 г ДЦГК. Продолжают перемешивание 3 ч при охлаждении и еще 2 ч при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом, фильтрат экстрагируют последовательно 5%-ным водным раствором NаНСО₃, 0.5 М раствором KHSO₄ и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 30 мл 2 н. раствора НС1 в диоксане, выдерживают 40 мин при комнатной температуре, затем упаривают досуха. Остаток обрабатывают эфиром и получают 3.65 г целевого диэфира III-1 в виде гидрохлорида. R_f 0.25 (Б); m/z=391.8, М+Н⁺ (вычислено 392.5).

Аналогичным образом получены гидрохлориды диэфиров:
H-Asp(OBzl)-OPse, III-2; R_f 0.30 (Б); m/z=510.2, M+H⁺ (вычислено 510.6).

H-Asp(OBzl)-ONse, III-3; R_f 0.15 (Б); m/z=436.9, M+H⁺ (вычислено 437.5).

H-Asp(OBzl)-OTce, III-4; R_f 0.25 (Б); m/z=355.3, M+H⁺ (вычислено 355.6).

H-Asp(OBzl)-OTctbu, III-5; R_f 0.28 (Б); m/z= 383.5, M+H⁺ (вычислено 383.7).

H-Asp(OBzl)-OFm, III-6; R_f 0.35 (Б); m/z=401.8, М+H⁺ (вычислено 402.5).

б. α-4-Нитробензиловый эфир β-бензиласпарагиновой кислоты (H-Asp(OBzl)-ONb, III-7). К раствору 3.24 г Boc-Asp(OBzl)-OH и 2.20 г 4-нитробензилбромида в 30 мл ДМФА добавляют 2.0 мл ДИЕА. Смесь перемешивают 12 ч при комнатной температуре, затем добавляют 100 мл воды и 80 мл этилацетата. Органическую фазу отделяют и экстрагируют последовательно водой, 5%-ным водным раствором NаНСО₃, 0.5 М раствором KHSO₄ и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 30 мл 2 н. раствора НСl в диоксане, выдерживают 40 мин при комнатной температуре, затем упаривают досуха. Остаток обрабатывают эфиром и получают 3.32 г целевого диэфира III-7 в виде гидрохлорида. R_f 0.20 (Б); m/z=359.1, М+Н⁺ (вычислено 359.4).

в. α-4-Метоксибензиловый эфир β-бензиласпарагиновой кислоты (H-Asp(OBzl)-OMbzl, III-8). К раствору 4.81 г Nsc-Asp(OBzl)-OH, 1.5 г 4-метоксибензилового спирта и 0.12 г 4-ДМАП в 30 мл ТГФ при охлаждении до 0^oС и перемешивании добавляют 2.4 г ДЦГК. Продолжают перемешивание 3 ч при охлаждении и еще 4 ч при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ТГФ, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в 100 мл этилацетата, экстрагируют последовательно 5%-ным водным раствором NaHCO₃, 0.5 М раствором KHSO₄ и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 30 мл смеси ТГФ и диэтиламина (1:1 по объему) и выдерживают 60 мин при комнатной температуре, затем упаривают досуха. Остаток переупаривают с толуолом и получают в виде масла 5.1 г эквимолекулярной смеси целевого диэфира III-8 и N, N-диэтил-N-2-(4-нитрофенилсульфонил)этиламина, которую используют далее без разделения. R_f 0.30 (Б); m/z=344.2, M+H⁺ (вычислено 344.4).

Аналогичным образом получены диэфиры:
H-Asp(OBzl)-ODpm, III-9; R_f 0.35 (Б); m/z=390.2, М+Н⁺ (вычислено 390.5).

H-Asp(OtBu)-OTce, III-10; R_f 0.25 (Б); m/z= 321.0, M+H⁺ (вычислено 321.6).

H-Asp(OtBu)-ODpm, III-11; R_f 0.25 (Б); m/z= 356.6, М+Н⁺ (вычислено 356.5).

H-Asp(OtBu)-OMbzl, III-12; R_f 0.25 (Б); m/z= 310.1, M+H⁺ (вычислено 310.4).

г. α-4-Нитробензиловый эфир β-трет-бутил-аспарагиновой кислоты (Н-Asp(OtBu)-ONb, III-13). К раствору 4.46 г Nsc-Asp(OtBu)-OH и 2.20 г 4-нитробензилбромида в 30 мл ДМФА добавляют 2.0 мл ДИЕА. Смесь перемешивают 12 ч при комнатной температуре, затем добавляют 100 мл воды и 80 мл этилацетата. Органическую фазу отделяют и экстрагируют последовательно водой, 5%-ным водным раствором NaHCO₃, 0.5 М раствором KHSO₄ и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 30 мл смеси ТГФ и диэтиламина (1:1 по объему) и выдерживают 60 мин при комнатной температуре, затем упаривают досуха. Остаток переупаривают с толуолом и получают в виде масла 4.7 г эквимолекулярной смеси целевого диэфира III-13 и N,N-диэтил-N-2-(4-нитрофенилсульфонил)этиламина, которую используют далее без разделения. R_f 0.20 (Б); m/z=325.2, М+Н⁺ (вычислено 325.4).

Аналогичным образом получены диэфиры:
H-Asp(OBzl)-OAll, III-14; R_f 0.25 (Б); m/z= 263.0, M+H⁺ (вычислено 263.3).

H-Asp(OtBu)-OAll, III-15; R_f 0.25 (Б); m/z= 230.1, M+H⁺ (вычислено 230.3).

H-Asp(OtBu)-OCam, III-16; R_f 0.15 (Б); m/z= 247.6, М+Н⁺ (вычислено 247.3).

д. α-(2-Фенилсульфонил)этиловый эфир β-трет-бутиласпарагиновой кислоты (H-Asp(OtBu)-OPhse. III-17). К раствору 3.24 г Cbz-Asp(OtBu)-OH, 2.2 г 2-(фенилсульфонил)этанола и 0.12 г 4-ДМАП в 30 мл ТГФ при охлаждении до 0^oС и перемешивании добавляют 2.4 г ДЦГК. Продолжают перемешивание 3 ч при охлаждении и еще 4 ч при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ТГФ, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в 100 мл этилацетата, экстрагируют последовательно 5%-ным водным раствором NаНСО₃, 0.5 М раствором KHSO₄ и насыщенным раствором NaCl, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 100 мл этанола и гидрируют водородом при атмосферном давлении над 0.3 г 10% Pd/C в течение 2 ч. Катализатор отделяют фильтрованием, фильтрат упаривают досуха и получают 3.1 г целевого диэфира III-17 в виде масла. R_f 0.20 (Б); m/z=358.2, М+Н⁺ (вычислено 358.5).

Аналогичным образом получен диэфир
H-Asp(OtBu)-OCpse, III-18; R_f 0.20 (Б); m/z= 392.7, М+Н⁺ (вычислено 393.0).

Пример 2. Получение дипептидов R³Arg-Gly-OH (IV)
a. Boc-Arg-Gly-OH, (IV-1). К раствору 2.9 г Boc-Arg-OH и 3.37 г H-Gly-OBzl x TsOH в 30 мл ДМФА добавляют 2.7 г ОБТ, затем, при перемешивании и охлаждении до 0^oС, 2.4 г ДЦГК. Смесь перемешивают 18 ч при 0^oС, выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 100 мл хлороформа, раствор экстрагируют водой (4 х 50 мл), сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 100 мл этанола и гидрируют водородом при атмосферном давлении над 0.3 г 10% Pd/C в течение 3 ч. Катализатор отделяют фильтрованием, фильтрат упаривают досуха и обрабатывают остаток эфиром. Получают 4.2 г целевого дипептида IV-1 в виде п-толуолсульфоната. R_f 0.35 (В); m/z=331.8, М+Н⁺ (вычислено 332.4).

б. Nsc-Arg-Gly-OH, (IV-2). К раствору 4.32 г Nsc-Arg-OH и 1.9 г H-Gly-OtBu x НС1 в 30 мл ДМФА добавляют 2.7 г ОБТ, затем, при перемешивании и охлаждении до 0^oС, 2.4 г ДЦГК. Смесь перемешивают 18 ч при 0^oС, выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток обрабатывают этилацетатом, образовавшийся осадок отделяют, промывают эфиром, сушат и растворяют в 30 мл 2 н. раствора НСl в уксусной кислоте, выдерживают 40 мин при комнатной температуре, затем упаривают досуха. Остаток обрабатывают эфиром и получают 4.65 г целевого дипептида IV-2 в виде гидрохлорида. R_f 0.25 (В); m/z=489.1, M+H⁺ (вычислено 489.5).

Аналогичным образом получены гидрохлориды дипептидов:
Cbz-Arg-Gly-OH, IV-3; R_f 0.35 (В); m/z=365.8, М+Н⁺ (вычислено 366.4).

Fmoc-Arg-Gly-OH, IV-4; R_f 0.40 (В); m/z=454.1, М+Н⁺ (вычислено 454.5).

Пример 3. Получение трипептидов R³-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR² (Ia)
a. Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse. (Ia-1). К раствору 5.04 г Boc-Arg-Gly-OH x TsOH (IV-1, пример 2a) и 3.60 г H-Asp(OBzl)-OPhse x HCl (III-l, пример la) в 50 мл ДМФА при перемешивании и охлаждении до 0^oС добавляют 1.6 мл ТЭА, 1.35 г ОБТ и 2.4 г ДЦГК. Смесь перемешивают 18 ч при 0^oС, выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 150 мл хлороформа, раствор экстрагируют водой (4 х 50 мл), сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают при пониженном давлении. Остаток обрабатывают эфиром и получают 7.42 г целевого трипептида Ia-1 в виде п-толуолсульфоната. R_f 0.55-0.60 (В); m/z=705.3, М+Н⁺ (вычислено 705.8); аминокислотный состав: Asp 0.87, Gly 1.00, Arg 1.04.

Аналогичным образом получены п-толуолсульфонаты трипептидов:
Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPse, Ia-2; R_f 0.65 (В); m/z=824.1, M+H⁺ (вычислено 824.0).

Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-ONb, Ia-3; R_f 0.55 (В); m/z=672.3, М+Н⁺ (вычислено 672.8).

Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OFm, Ia-4; R_f 0.65 (В); m/z=716.3, М+H⁺ (вычислено 715.9).

Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-ONse, Ia-5; R_f 0.55 (В); m/z=751.5, M+H⁺ (вычислено 750.8).

Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OTctbu, Ia-6; R_f 0.60 (В); m/z= 697.7, M+H⁺ (вычислено 697.0).

Boc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OTce, Ia-7; R_f 0.55 (В); m/z=669.4, M+H⁺ (вычислено 669.0).

б. Nsc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OMbzl, (Ia-8). К раствору 5.0 г смеси диэфира III-8 и N,N-диэтил-N-2-(4-нитрофенилсульфонил)этиламина (пример 1в), 4.15 г Nsc-Arg-Gly-OH x HCl (IV-2, пример 2б) и 2.7 г ОБТ в 50 мл ДМФА при перемешивании и охлаждении до 0^oС добавляют 2.0 г ДЦГК. Смесь перемешивают 18 ч при 0^oС, выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток обрабатывают этилацетатом, образовавшийся осадок отделяют, промывают этилацетатом и эфиром. После переосаждения из этанола эфиром получают 5.4 г трипептида Ia-8 в виде гидрохлорида. R_f 0.50-0.55 (В); m/z=815.3, М+Н⁺ (вычислено 814.9); аминокислотный состав: Asp 0.92, Gly 1.00, Arg 0.93.

Аналогичным образом получены гидрохлориды трипептидов:
Nsc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OtBu, Ia-9; R_f 0.55 (В); m/z=751.3, М+Н⁺ (вычислено 750.8).

Nsc-Arg-Gly-Asp(OBzl)-ODpm, Ia-10; R_f 0.60 (В); m/z= 861.3, M+H⁺ (вычислено 860.9).

Nsc-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OBzl, Ia-11; R_f 0.55 (B); m/z= 750.8, M+H⁺ (вычислено 750.8).

Nsc-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OAll, Ia-12; R_f 0.45 (В); m/z= 702.0, M+H⁺ (вычислено 700.8).

Nsc-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OCam, Ia-13; R_f 0.40 (В); m/z= 727.5, M+H⁺ (вычислено 727.8).

Nsc-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OTce, Ia-14; R_f 0.50 (B); m/z= 791.6, M+H⁺ (вычислено 792.1).

Fmoc-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OMbzl, Ia-15; R_f 0.65 (B); m/z=745.3, M+H⁺ (вычислено 745.9).

в. Cbz-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OPhse, (Ia-16). К раствору 3.0 г диэфира III-17 (пример 1д), 3.22 г Cbz-Arg-Gly-OH x HCl (IV-3, пример 2б) и 1.2 г ОБТ в 30 мл ДМФА при перемешивании и охлаждении до 0^oС добавляют 2.0 г ДЦГК. Смесь перемешивают 18 ч при 0^oС, выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток обрабатывают эфиром, образовавшийся осадок отделяют и промывают эфиром. После переосаждения из уксусной кислоты эфиром получают 5.1 г трипептида Ia-16 в виде гидрохлорида. R_f 0.50-0.55 (В); m/z= 706.6, М+Н⁺ (вычислено 705.8); аминокислотный состав: Asp 1.02, Gly 1.00, Arg 0.93.

Аналогичным образом получен гидрохлорид трипептида
Cbz-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OCpse, Ia-17; R_f 0.55 (В); m/z= 740.0. М+Н⁺ (вычислено 740.3).

Пример 4. Получение трипептидов R³-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR² (R³=H, Ib)
a. Удаление Вос-защиты с пептидов Ia-1 - Ia-7 (R³=Воc). п-Толуолсульфонат трипептида растворяют в 2 н. растворе HCl в уксусной кислоте (3 мл/ммол) и выдерживают 40 мин при комнатной температуре. К раствору добавляют 1 экв. моногидрата п-толуосульфокислоты и упаривают в вакууме, остаток обрабатывают эфиром. Получают пептиды 1b-1 - 1b-7 в виде ди-п-толуолсульфонатов.

б. Удаление Nsc- или Fmoc-защиты с пептидов 1а-8 - Ia-15 (R³=Nsc или Fmoc). Гидрохлорид трипептида растворяют в смеси ДМФА-пиперидин (2:1 по объему, 3 мл/ммол) и выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Раствор упаривают в вакууме, остаток обрабатывают эфиром. Получают пептиды 1b-8 - Ib-15 в виде гидрохлоридов.

в. Удаление Cbz-защиты с пептидов Ia-16 - Ia-17 (R³=Cbz). Гидрохлорид трипептида растворяют в этаноле (10 мл/ммол) и гидрируют водородом при атмосферном давлении над 10% Pd/C (30-60 мг/ммол) в течение 2-4 ч. Катализатор отделяют фильтрованием, фильтрат упаривают досуха, остаток обрабатывают эфиром. Получают пептиды 1b-16 - 1b-17 в виде гидрохлоридов.

Пример 5. Получение пептидов E-Z-Y-X-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR² (II)
a. Boc-D-Phe-Val-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse, (II-1). К раствору 0.95 г Н-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse х 2 TsOH (Ib-1) и 0.5 г Boc-D-Phe-Val-Gly-OH в 10 мл ДМФА при охлаждении и перемешивании добавляют 0.15 г ОБТ, 0.22 мл ДИЕА и 0.25 г ДЦГК. Смесь перемешивают 2 ч при охлаждении и 5 ч при комнатной температуре, осадок отфильтровывают. Фильтрат упаривают в вакууме, остаток обрабатывают смесью этилацетата и эфира, полученный осадок промывают эфиром. Получают 1.05 г гексапептида II-1 в виде п-толуолсульфоната; m/z=1009.8, M+H⁺ (вычислено 1009.2); аминокислотный состав: Asp 0.90, Gly 1.87, Phe 1.06, Val 1.00, Arg 1.07.

Аналогично получены:
Boc-Phe-Val-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OtBu (II-2), гидрохлорид, из 1b-9 и Boc-Phe-Val-Gly-OH; m/z=897.8, M+H⁺ (вычислено 897.1).

Boc-D-Phe-Lys(Cbz)-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPse(II-3), п-тoлyoлcyльфoнaт, из Ib-2 и Boc-Phe-Lys(Cbz)-Gly-OH; m/z=1291.5, M+H⁺ (вычислено 1290.6).

Cbz-D-Phe-Pro-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OBzl (II-4), гидрохлорид, из Ib-11 и Boc-D-Phe-Pro-OH; m/z=871.6, M+H⁺ (вычислено 872.1).

Boc-D-Phe-Orn(Cbz)-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OMbzl (II-5), гидрохлорид, из 1b-8 и Boc-D-Phe-Orn(Cbz)-Gly-OH; m/z=1010.0, M+H⁺ (вычислено 1010.3).

Boc-Phe-Ala-Arg-Gly-Asp(OBzl)-ODpm (II-6), гидрохлорид, из Ib-10 и Boc-Phe-Ala-OH; m/z=923.0, M+H⁺ (вычислено 922.1).

Boc-D-Phe-Ile-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OTce(II-7), п-тoлyoлcyльфoнaт, из 1b-7 и Boc-D-Phe-Ile-Gly-OH; m/z=987.1, M+H⁺ (вычислено 986.4).

Boc-Phe-Gly-Arg-Gly-Asp(OBzl)-ONse (II-8), п-толуолсульфонат, из Ib-5 и Boc-Phe-Gly-OH; m/z=954.0, M+H⁺ (вычислено 955.1).

б. Nsc-D-Phe-Val-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse, (II-9). К раствору 0.95 г H-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse x 2 TsOH (Ib-1) 0.22 мл ДИЕА в 5 мл ДМФА добавляют 0.45 г Boc-Val-OPfp. Смесь перемешивают 2 ч и упаривают в вакууме, остаток обрабатывают этилацетатом и эфиром и получают Boc-Val-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OPhse х TsOH. С него удаляют Вос-защиту, как описано в примере 4а, и конденсируют аналогичным образом с 0.75 г Nsc-D-Phe-OPfp. Получают 1.11 г п-толуолсульфоната пентапептида II-9; m/z=1108.6, М+Н⁺ (вычислено 1109.3); аминокислотный состав: Asp 0.90, Gly 0.89, Phe 1.03, Val 1.00, Arg 1.10.

Аналогично получены:
Fmoc-Phe-Val-Arg-Gly-Asp(OBzl)-OFm (II-10), п-толуолсульфонат, из Ib-9; m/z=1085.1, М+Н⁺ (вычислено 1084.3).

Mcbz-D-Phe-Lys(Boc)-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OBzl (II-11), п-толуолсульфонат, из Ib-11; m/z=1032.0, M+H⁺ (вычислено 1032.3).

Nsc-Phe-Ile-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OPhse (II-12), гидрохлорид, из Ib-16, Cbz-Ile-OPfp и Nsc-Phe-OPfp; m/z=1089.5, M+H⁺ (вычислено 1089.3).

Nsc-D-Phe-Ile-Arg-Gly-Asp(OtBu)-OCam (II-13), гидрохлорид, из Ib-13, Nsc-Ile-OPfp и Nsc-Phe-OPfp; m/z=979.1, М+Н⁺ (вычислено 978.1).

Пример 6. Удаление групп R² и Е с пептидов E-Z-Y-X-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR² (II)
Группы R² и Е удаляют одновременно либо последовательно; при последовательном удалении предпочтительно удалять группу R² перед отщеплением Е. Ацидолизом в условиях Примера 4а удаляются следующие группы: R²=tBu, Mbzl, Dpm; Е=Воc, Mcbz. Элиминированием основаниями в условиях Примера 4б удаляются следующие группы: R²=Fm, Nse, Phse, Cpse, Pse (для последних трех групп время реакции 1.5 ч); Е=Fmoc, Nsc. Каталитическим гидрогенолизом в условиях Примера 4в удаляются следующие группы: R²=Bzl, Mbzl, Dpm, Nb; E=Cbz, Mcbz.

Удаление групп Tce и Tctbu восстановительным элиминированием. 1 ммол пептида с R²=Тсе или Tctbu растворяют в смеси 5 мл ДМФА, 10 мл ТГФ, 3 мл воды и 1 мл уксусной кислоты и при энергичном перемешивании добавляют 1 г активированного цинкового порошка. Перемешивание продолжают 30 мин, затем цинковый шлам отфильтровывают, фильтрат разбавляют 40 мл воды и наносят на колонку с 30 мл Lichroprep RP18 (Merck KG, Darmstadt, Germany), уравновешенную водой, содержащей 2% уксусной кислоты. Колонку промывают 60 мл 2% уксусной кислоты, затем элюируют пептид смесью ацетонитрил-вода-уксусная кислота (70: 30: 2). К элюату добавляют 1 ммол моногидрата п-толуолсульфокислоты и упаривают досуха. Остаток обрабатывают эфиром и получают целевой пептид с R²=Н.

Удаление группы Nb восстановительным элиминированием (патент США 5817758). 1 ммол пептида с R²=Nb растворяют в 10 мл ДМФА, добавляют 1 мл уксусной кислоты и 1 г SnCl₂ и перемешивают 5 ч. Смесь разбавляют 40 мл воды и выделяют хроматографией целевой пептид с R²=Н, как описано выше.

Удаление группы Cam. 1 ммол пептида с R²=Cam растворяют в 10 мл ДМФА и добавляют при энергичном перемешивании 10 мл 10% водного пиперидина. Через 10 мин смесь упаривают в вакууме досуха, обрабатывают остаток эфиром и получают целевой пептид с R²= Н (в этих условиях происходит одновременное удаление Nsc-группы).

Пример 7. Получение RGD-содержащих циклопептидов (при R¹=Bzl) [на примере цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val)].

С 0.64 г п-толуолсульфоната пептида II-9 (Пример 5б) удаляют группы Nsc (E) и Phse (R²), как описано в Примере 6 (условия Примера 4б). Полученный пептид (0.41 г) растворяют в 300 мл ДМФА и добавляют при перемешивании 0.4 мл ДИЕА, 0.135 г ОБТ и 0.45 г гексафторфосфата бензотриазолил-1-окси-трис(диметиламино)фосфония. Смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл воды и упаривают досуха в вакууме. Остаток обрабатывают эфиром, полученный осадок растворяют в 10 мл 20% водной уксусной кислоты, добавляют 0.5 г ацетата натрия и хроматографируют на колонке 2 х 15 см с Lichroprep RP18 (25-40 мкм) в градиенте от 0 до 50% ацетонитрила с 2% уксусной кислоты. Фракции, содержащие чистый по ВЭЖХ пептид цикло[Arg-Gly-Asp(OBzl)-D-Phe-Val] , упаривают до минимального объема, растворяют в 20 мл смеси этанол-вода-уксусная кислота (70: 20:10) и гидрируют, как описано в примере 4в. Полученный раствор упаривают досуха, растворяют остаток в 10 мл воды и лиофилизуют. Получают 240 мг ацетата цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val) (67% на II-9); чистота по ВЭЖХ 96%; m/z=576.1, М+Н⁺ (вычислено 575.6); аминокислотный состав: Asp 0.93, Gly 1.91, Phe 1.03, Val 1.00, Arg 1.07 (весовое содержание пептидного материала 80%).

Пример 8. Получение RGD-содержащих циклопептидов (при R¹=tBu) [на примере цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)].

С 0.52 г гидрохлорида пептида II-11 (Пример 5б) удаляют группы Mcbz (E) и Bzl (R²), как описано в Примере 6б (условия Примера 4в). Полученный пептид (0.40 г) растворяют в 300 мл ДМФА и добавляют при перемешивании 0.4 мл ДИЕА, 0.135 г ОБТ и 0.45 г гексафторфосфата бензотриазолил-1-окси-трис(диметиламино)фосфония. Смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл воды и упаривают досуха в вакууме. Остаток обрабатывают эфиром, полученный осадок растворяют в 10 мл 20% водной уксусной кислоты, добавляют 0.5 г ацетата натрия и хроматографируют на колонке 2 х 15 см с Lichroprep RP18 (25-40 мкм) в градиенте от 0 до 50% ацетонитрила с 2% уксусной кислоты. Фракции, содержащие чистый по ВЭЖХ пептид цикло[Arg-Gly-Asp(OtBu)-D-Phe-Lys(Boc)] , упаривают досуха и растворяют в 10 мл 2 н. НСl в уксусной кислоте. Через 30 мин раствор упаривают досуха, растворяют остаток в 10 мл воды и лиофилизуют. Получают 228 мг цикло(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) х 2НСl (62% на II-11); чистота по ВЭЖХ 98%; m/z=605.0, M+H⁺ (вычислено 604.7); аминокислотный состав: Asp 0.96, Gly 1.90, Phe 1.00, Lys 1.03, Arg 1.07 (весовое содержание пептидного материала 82%).

Изобретение относится к группе новых защищенных линейных пептидов, содержащих аминокислотную последовательность, которые могут найти применение в качестве исходных соединений для получения RGD-содержащих циклопептидов, общей формулы
R³-Arg-Gly-Asp(OR¹)-OR²,
где R¹ - бензил или трет-бутил; R² не равен R¹ и выбирается из группы трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 4-нитробензил; дифенилметил; 2,2,2-трихлорэтил; 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил; аллил; 9-флуоренилметил; карбоксамидометил; замещенный 2-сульфонилэтил вида А-SO₂-СН₂-СН₂-, где А - замещенный либо незамещенный фенил или бензил; R³ - атом водорода, либо уретановая защитная группа вида B¹O-СО-, где В¹ не равен R¹ и может принимать значения трет-бутил, бензил, 4-метоксибензил, 9-флуоренилметил, 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил; либо представляет собой пептидил, содержащий от одного до трех аминокислотных остатков; а также пептиды, где R³ - пептидил структуры E-Z-Y-Х-, в котором Е - атом водорода либо уретановая защитная группа вида В²О-СО-, где В² не равен R¹ и может принимать значения трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 9-флуоренилметил; 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил; Х отсутствует либо равен Gly; Y - Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Lys(G) или Orn(G), где G - уретановая защитная группа вида В³О-СО-, в которой В³= R¹, присоединенная к омега-аминогруппе; Z может принимать значения Phe или D-Phe. 1 з.п. ф-лы.

1. Пептиды общей формулы
R³-Arg-Gly-Asp (OR¹)-OR²,
где R¹-бензил или трет-бутил;
R² не равен R¹ и выбирается из группы трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 4-нитробензил; дифенилметил; 2,2,2-трихлорэтил; 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил; аллил; 9-флуоренилметил; карбоксамидометил; замещенный 2-сульфонилэтил вида А-SO₂-СН₂-СН₂-, где А - замещенный либо незамещенный фенил или бензил;
R³ - атом водорода, либо уретановая защитная группа вида В¹О-СО-, где В¹ не равен R¹ и может принимать значения трет-бутил, бензил, 4-метоксибензил, 9-флуоренилметил, 2-(4-нитрофенил-сульфонил)этил, либо пептидил, содержащий от одного до трех аминокислотных остатков. 2. Пептиды по п.1, где R³ - пептидил структуры
E-Z-Y-Х-,
в которой Е - атом водорода либо уретановая защитная группа вида В²-О-СО-, где В² не равен R¹ и может принимать значения трет-бутил; бензил; 4-метоксибензил; 9-флуоренилметил; 2-(4-нитрофенилсульфонил)этил;
Х отсутствует либо равен Gly;
Y - Gly, Ala, Val, Ile, Pro, Lys(G) или Orn(G), где G - уретановая защитная группа вида В³О-СО-, в которой В³=R¹, присоединенная к омега-аминогруппе;
Z может принимать значения Phe или D-Phe.