СПОСОБ ПАРАКЛИНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ЭНДОТОКСИКОЗА ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКОМ ТЕЧЕНИИ БЕРЕМЕННОСТИ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/49 

Описание изобретения
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике. Может быть использовано врачами других специальностей - акушерами-гинекологами, анестезиологами, хирургами.

Уровень техники
Аналогом данного изобретения являются описанные в отечественной литературе методы параклинической оценки тяжести эндотоксикоза.

Унифицированным маркером эндотоксикоза является уровень среднемолекулярных (СМ) соединений плазмы крови, определяемых экспресс-методом Н.И. Габриэлян (1981) Однако следует отметить, что при начальных доклинических проявлениях эндотоксикоза этот показатель, как правило, остается в пределах нормы. Анализ современной литературы, проведенный за период 1980-2000 гг., позволяет выделить две группы методов диагностики данной патологии:
1) большую часть представляют методы, в основе которых сделана попытка установления количественной зависимости между тяжестью эндотоксикоза и результатами параклинических исследований (Кальф-Калиф Я.Я., 1941 г.; Пафомов Г. А., 1980 г.; Габриелян И.И., 1981 г.; Абрамченко В.В., 1988 г.; Лаберко Л.А. , Родоман Г. В., Луканин Д.В., Оболенский В.Н., 2000 г.). Недостатком этих методов является констатация уже возникших нарушений на основе анализа деятельности лишь одной из систем жизнеобеспечения;
2) ряд авторов предлагают математические модели для параклинической оценки эндотоксинемии (Тарелкина М. Н. , 1991 г.; Малахова М.Я., 1995 г.; Кузнецов Н. Н. , 1996 г.; Жилина Н.М., 1999 г.). В этих работах углубленно анализируются возникающие в организме метаболические нарушения и, исходя из взаимоотношений эндогенной интоксикации и возможностей функциональной системы детоксикации, выделяются основные стадии развития эндотоксикоза. Разработаны нормативные показатели, показана их динамика при шокогенной механической травме, нефрологических заболеваниях, сепсисе, ожогах, а также у населения, проживающего в неблагоприятных экологических условиях. Перечисленные выше методы объединяет использование в основе системного подхода с последующей математической обработкой методами распознавания образов. Однако существенным недостатком является возможность диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при манифестации имеющейся уже фоновой нозологической патологии. Малахова М.Я. разработала способ прогноза данного осложнения с ранних сроков, но на основе деятельности одной системы - детоксикации. Кроме того, рассмотренные аналоги не могут использоваться в акушерской практике, так как не учитывают при клинической интерпретации параклинических показателей особенности физиологии беременного организма.

Прототипом данного изобретения является "Способ доклинической диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при гестации" (Пестряева Л.А., Панасенко О. М., Юрченко Л.Н., Царегородцева Н.А., Мазуров А.Д.), заявка 2001104844/14 от 20.02.2001.

Недостающим звеном описанного выше прототипа является невозможность диагностики степени тяжести эндотоксикоза у пациенток с патологическим течением беременности.

Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа параклинической оценки тяжести аутоиммунного эндотоксикоза при осложненном течении беременности на модели гестоза в III триместре беременности. Данный метод дает объективную информацию о функциональном состоянии ключевых систем гомеостаза. Способ основан на биохимическом и гемостазиологическом исследовании крови у беременных женщин с параклиническими признаками эндотоксикоза, выявленными ранее предложенным способом (заявка 2001104844/14 от 20.02.2001).

Исследование крови проводят натощак, в утреннее время. Для выполнения анализов берут 3 мл венозной крови путем пункции вены на верхней конечности в гепаринизированный шприц (25 ЕД на 1 мл крови) Для исследования газового гомеостаза кровь берут из пальца в специальный гепаринизированный капилляр в объеме 200 мкл, тщательно перемешивают и немедленно определяют содержание кислорода в капиллярной и венозной крови (из шприца) на газоанализаторе типа "АВL-505" (фирмы "Radiometer", Дания). Оставшуюся кровь осторожно выдавливают в пробирку, центрифугируют при 3000 об/мин 30 минут. Далее эритроцитарную массу и плазму разделяют и используют для определения веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ). К 1 мл плазмы и 0,5 мл эритроцитов прибавляют по 0,5 мл 15% раствора ТХУ, пробы перемешивают и через 5-7 минут центрифугируют при 6000 об/мин 15 минут, oтбирают надосадочную жидкость (супернатант) из всех пробирок в количестве 0,5 мл, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:9 и фотометрируют против контроля в кюветах с длиной оптического пути 1 см. Регистрацию спектра поглощения проводят в ультрафиолетовой области спектра (225-300 нм). В качестве контроля используют 15% раствор ТХУ в разведении водой 1:60.

Для расчетов используют значения оптической плотности растворов на следующих длинах волн:
- максимальное значение в интервале 226-228 нм;
- максимальное значение в интервале 229-232 нм;
- 254 нм;
- 280 нм.

Количество тромбоцитов в крови определяют фазово-контрастным методом (G. Brecher еt а1., 1953).

В работе использованы методы кластерного и пошагового дискриминантного анализа. Расчеты производились с помощью пакета прикладных программ "Квазар-Плюс",
На основании математической обработки полученных результатов методом дискриминантного анализа выведены решающие правила диагностики степени тяжести аутоиммунного эндотоксикоза при беременности.

Проводят анализ расширенного диапазона показателей спектрограммы плазмы крови и эритроцитов и определяют функцию Д₁ по формуле
Д₁ = К₁•(Р₁ + Р₂) + К₂•P₄ + К₃•Р₅ + K₄•Е₄ + К₅•Е₅ + К₆•Тr + const.

где Р₁, Р₂ - максимальные значения экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови в диапазоне λ₁ 226-228 и λ₂ 229-232 нм соответственно (ед. опт. пл.);
P₄, Р₅, E₄, Е₅ - значения экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови и эритроцитов при λ₄ 254 и λ₅ 280 (ед. опт. пл.);
Тr - число тромбоцитов (•10⁹/л),
К₁, К₂ ... К₆ - коэффициенты:
К₁= - 0,219,
К₂ = 10,754,
К₃ = 9,139,
К₄ = - 0,886,
К₅ = - 0,026,
К₆ = - 0,021;
const = 0,0349.

При Д₁ менее -0,5 диагностируют компенсированную фазу эндотоксикоза.

При Д₁ более -0,5 делают достоверное заключение о манифестации эндотоксикоза.

Чувствительность метода 96,9%, специфичность 96,8%, эффективность 96,2%.

Для дифференциальной диагностики степени тяжести эндотоксикоза (при Д₁ более -0,5) определяют значение дискриминантной функции Д₂:
Д₂ = К₁•Р₄ + К₂•Р₅ + К₃•O₂(а-v) - const,
где P₄, Р₅ - экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови (ед.опт.пл.) при λ₄ 254 нм и λ₅ 280 нм соответственно;
O₂(а-v) - артерио-венозная разница по кислороду, мл/дл;
K₁, К₂, К₃ - коэффициенты:
К₁ = - 7,228,
K₂ = - 2,523,
К₃ = 0,428;
const = 0,76.

При Д₂ менее 0 диагностируют декомпенсированную фазу эндотоксикоза.

При Д₂ более 0 делают достоверное заключение о субкомпенсированной фазе эндотоксикоза.

Чувствительность метода 96,7%, специфичность 96,8%, эффективность 96,7%.

Пример 1. Морозова Л.А., беременность 38-39 недель, поступила на лечение в отделение патологии беременности по поводу отечной формы гестоза ( 565). Исследование крови на определение тяжести эндотоксикоза показало следующее:
Д₁ = - 1,83 (т.е. Д₁ менее - 0,5), что с высокой вероятностью указывает на легкую степень эндотоксикоза (компенсированная фаза).

Пример 2. Деева Ю.А., беременность 30-31 неделя, гестоз средней степени тяжести, госпитализирована в отделение реанимации и интенсивной терапии (история родов 537). При обследовании гестоз подсчитывался на 11 баллов по шкале Г.М. Савельевой.

По результатам анализа крови на тяжесть эндотоксикоза получили следующие значения функций:
Д₁ = 0,63, Д₂ = 3,46 (Д₁ более -0,5, Д₂ более 0), что соответствует среднетяжелой степени (субкомпенсированной фазе) эндотоксикоза.

Пример 3. Бучнева Е.А., беременность 32-33 недели, гестоз тяжелой степени тяжести (14 баллов), хроническая фетоплацентарная недостаточность (декомпенсированная форма), госпитализирована в отделение реанимации и интенсивной терапии (история родов 536).

Проведено скрининговое исследование крови на тяжесть эндотоксикоза.

Получено: Д = - 0,81, Д₁ = 2,89, Д₂ = - 1,61, что соответствует декомпенсированной фазе эндотоксикоза (Д₁ более -0,5, Д₂ менее 0).

Таким образом, предлагаемый способ верификации тяжести эндотоксикоза позволяет объективно оценить состояние беременной женщины и своевременно решить вопрос о необходимости проведения углубленного параклинического обследования.

Учитывая все вышесказанное, представляется возможным предложить для широкого применения данный способ верификации тяжести эндотоксикоза при обследовании беременных женщин в III триместре беременности, удобный в исполнении, не требующий больших материальных затрат и обеспечивающий получение необходимой информации в течение часа.

Источники информации
1. Абрамченко В.В., Костюшов Е.В., Щербина Л.А. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. - СПб., 1995.

2. Владыка А.С., Левицкий Э.Р., Поддубная Л.П., Габриэлян Н.И. // Анестезиология и реаниматология. - 1987. - 2. - С. 37-42.

3. Ершов А.Л. // Эндогенные интоксикации. - СПб., 1994. - С. 70-71.

4. Жилина Н.М. Оптимизация диагностики эндогенной интоксикации; Дис.... канд. биол. наук. - Тула, 1999.

5. Золотокрылина Е. С. Диагностика гипоксических состояний в отделении реанимации и интенсивной терапии // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - 6. - С. 3-6.

6. Колемаев В.А., Староверов О.В., Турундаевский В.Б. Теория вероятности и математическая статистика. - М., 1991.

7. Лаберко Л. А., Родоман Г.В., Луканин Д.В., Оболенский В.Н. Фракционирование среднемолекулярных соединений сыворотки крови в ранней диагностике гнойно-септических осложнений у больных с распространенным перитонитом. Материалы Всероссийской конференции "Новые направления в клинической медицине". - Ленинск-Кузнецкий, 2000. - С. 41-42.

8. Левченко В.Г.// Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - 11. - С. 36.

9. Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. В 2-х т. Т. 2: Медицинские лабораторные технологии. /Под ред. Карпищенко А.И. - СПб., 1999.

10. Оболенский С.В., Малахова М.Я., Ершов А.Л. // Экстремальные состояния и постреанимационная патология. - Новосибирск. - 1989. - С. 79-86.

11. Романов Ю.А., Маркина В.В., Антохин А.И. и др. Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. - М., 1996.

12. Малахова М. Я. // Экстремальные состояния и постреанимационная патология: Сб. трудов Новосибирского мед. ин-та. - Новосибирск. - 1989. - С. 89-91.

13. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. Под ред. Тица Н.У: Пер. с англ. - М.: Лабинформ, 1997.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, к способу параклинической оценки тяжести эндотоксикоза при патологическом течении беременности. Изобретение заключается в исследовании спектрограммы плазмы и эритроцитов крови, подсчете числа тромбоцитов и определении артерио-венозной разницы по кислороду с последующим вычислением диагностического индекса Д₁ по формуле Д₁= К₁•(Р₁+Р₂)+К₂•Р₄+К₃•P₅+K₄•E₄+К₅•E₅+К₆•Тг+const при определенных значениях приведенных величин. При Д₁ менее -0,5 диагностируют компенсированную фазу эндотоксикоза, а если Д₁ более -0,5, делают достоверное заключение о манифестации эндотоксикоза и определяют степень тяжести по формуле Д₂=К₁•Р₄+К₂•Р₅+К₃•O₂(а-у)-const. При Д₂ менее 0 диагностируют декомпенсированную фазу. При Д₂ более 0 делают достоверное заключение о субкомпенсированной фазе эндотоксикоза. Изобретение обеспечивает возможность диагностики степени тяжести эндотоксикоза у пациенток с патологическим течением беременности.

Способ параклинической оценки тяжести эндотоксикоза при патологическом течении беременности путем биохимического и гемостазиологического исследования крови, отличающийся тем, что исследуют спектрограммы плазмы и эритроцитов крови, подсчитывают число тромбоцитов и определяют диагностический индекс Д₁ по формуле

Д₁=К₁×(Р₁+Р₂)+К₂×Р₄+К₃×Р₅+К₄×Е₄+К₅×E₅+К₆×Тг+const,

где Р₁, Р₂ - максимальные значения экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови в диапазоне λ₁ 226-228 и λ₂ 229-232 нм соответственно (ед. опт. пл.);

P₄, P₅, E₄, E₅ - значения экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови и эритроцитов при λ₄ 254 и λ₅ 280 (ед. опт. пл.);

Тг - число тромбоцитов (×109%), К₁, К₂,…, К₆ - коэффициенты: К₁=-0,219, К₂=10,754, К₃=9,139, К₄=-0,886, К₅=-0,026, К₆=-0,021; const = 0,0349,

и если Д₁ менее -0,5, диагностируют компенсированную фазу эндотоксикоза, а если Д₁ более -0,5, делают достоверное заключение о манифестации эндотоксикоза и определяют степень тяжести по формуле:

Д₂=К₁×Р₄+К₂×Р₅+К₃×O₂(а-v) -const,

где Р₄, P₅ - экстинкции безбелковых экстрактов плазмы крови (ед. опт. пл.) при λ₄ 254 нм и λ₅ 280 нм соответственно;

O₂(а-v) - артериовенозная разница по кислороду, мл/дл;

К_1, К₂, К₃ - коэффициенты: К₁=-7,228, К₂=-2,523, К₃=0,428; const=0,76,

получив Д₂ менее 0, диагностируют декомпенсированную фазу эндотоксикоза, а при Д₂ более 0 делают достоверное заключение о субкомпенсированной фазе эндотоксикоза.