ПРЕПАРАТ ИНТЕРФЕРОНА Российский патент 2003 года по МПК A61K38/21 A61P31/00 A61P35/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам интерферона, которые могут использоваться для лечения вирусных и онкологических заболеваний.

В настоящее время одной из сложнейших проблем белоксодержащих медицинских препаратов, в частности, препаратов интерферона, является их стабильность.

Подобно другим протеинам интерферон подвергается, особенно в водных растворах, модификации и химическому разложению за счет протекания процессов протеолиза, окисления, дисульфидного обмена и т.д. Кроме того на его биологическую активность негативно воздействуют такие факторы, как агрегация, осаждение и адсорбция.

Для уменьшении потерь активности интерферона в состав лекарственной формы вводят различные стабилизирующие добавки.

Известно использование в качестве стабилизаторов биологической активности интерферона человеческого альбумина (ЕР 133767, А 61 К 45/02, 1984), сахаров - глюкозы, маннозы, галактозы, фруктозы, сахарозы и др. (ЕР 0133767, А 61 К 45/02, 1984), декстранов и гидроксиэтилкрахмала (ЕР 0150067, А 61 К 45/02, 1985), полиэтиленгликоля и гидроксиэтилцеллюлозы (ЕР 0152345, А 61 К 45/02, 1985), поликарбоновых кислот сополимеров метилметакрилата и малеиновой кислоты, Na-соли карбоксиметилцеллюлозы и ксилита (DE 3642223, А 61 К 45/02, 1988).

Однако использование известных добавок вызывает в свою очередь определенные проблемы. Так, применение человеческого альбумина, как стабилизатора лекарственных форм интерферонов, связано с дополнительным контролем полученных лекарственных форм на отсутствие антигена гепатита В, вируса СПИДа. Использование этого компонента ограничено также недостаточностью сырья донорской крови.

При использовании в качестве стабилизирующих веществ аминокислот или их производных в смеси с человеческим альбумином (ЕР 0082481, А 61 К 45/02, 1982 или US 4496537, А 61 К 45/02, 1983) биологическая стабильность этой композиции сохранялась в достаточной степени только 6 месяцев. Кроме того данной композиции свойственны недостатки, связанные с применением человеческого альбумина.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому решению является интерферонсодержащая композиция, содержащая наряду с интерфероном частично гидролизованный декстран (полиглюкин), хлорид натрия и фосфатную смесь (компоненты фосфатного буферного раствора) (RU 2095081, А 61 К 38/21, 1997).

Однако данная смесь успешно хранится только в сухом виде и малопригодна для использования в жидких формах, что затрудняет его использование в клинической практике.

Задачей, стоявшей перед авторами, являлось создание композиции препарата интерферона, стабильного для хранения как в сухом, так и в жидком виде, в том числе после приготовления раствора для инъекций, глазных капель жидких аэрозолей и т.п.

Указанная задача решается созданием композиции, содержащей на 1-100 млн ME интерферона α-2 0,05-0,1 мг ацетата α-токоферола, 0,02-10 мг органической кислоты и буферобразующие соли, обеспечивающие в водном растворе рН 7,4.

Технический результат достигается за счет способности ацетата α-токоферола образовывать с интерфероном-α-2 комплекс, предотвращающий разрушение молекулярной структуры интерферона-α-2 в сухом виде, которая наблюдается при приготовлении препарата. Комплекс распадается при растворении препарата с высвобождением активного интерферона. Одновременно в присутствии даже небольших количеств воды (влаги воздуха) ацетат α-токоферола с органическими кислотами образует динамическую систему, одним из компонентов которой становится α-токоферол, ингибирующий протекание радикальных процессов и тем самым стабилизирующий жидкую лекарственную форму препарата.

В качестве органической кислоты используют органические кислоты, способные кристаллизоваться без разложения, такие как аскорбиновая, лимонная, глициновая, мочевая, янтарная и т.п.

В качестве буферного раствора используют 1 М фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис буферные растворы.

Препарат готовится следующим образом.

Генно-инженерный интерферон в виде жидкой субстанции (от 2•10⁶ МЕ/мл до 4•10⁷ МЕ/мл) в количестве от 0,5 мл до 2,5 мл забуференный до рН 7,4 смешивают со слабой кислотой от 0,25 мл до 1,25 мл в концентрации от 0,08 мг/мл до 40 мг/мл и корректируют рН добавлением 10 М NaOH.

К полученной смеси добавляют ацетат α-токоферола, который готовят следующим образом. Растворяют в 96% спирте ацетат α-токоферола в концентрации от 5 мг/мл до 1 г/мл. Затем разводят в 25 раз полученный концентрат дистиллированной водой и готовый раствор в объеме от 0,25 мл до 1,25 мл добавляют к смеси. Полученную смесь переносят во флаконы или ампулы и завальцовывают или запаивают. При необходимости полученную жидкую смесь замораживают во флаконах или ампулах (незавальцованных и незапаянных) и затем лиофильно высушивают.

Сущность и преимущества заявляемого изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. К 2 мл раствора генно-инженерного интерферона-α-2 с активностью 3•10⁶ МЕ/мл добавляли фосфатный буферный раствор до рН 7,4, а затем 0,5 мл лимонной кислоты в концентрации 20 мг/мл и 10 М NaOН до рН 7,4.

К полученной смеси добавляли 1 мл водно-спиртового раствора ацетата α-токоферола с концентрацией ацетата α-токоферола 10 мг/мл. Полученную смесь переносили в ампулы. Часть ампул запаивали и ставили на хранение, часть замораживали, а затем лиофильно высушивали.

Стабильность сухих и жидких форм препарата интерферона-α-2 при хранении (температура 4^oС) приведена в таблице.

Пример 2. В условиях примера 1, варьируя состав и количество используемых ингредиентов, получали препараты интерферона различного состава.

Для экспериментальной проверки заявленного способа (смеси) стабилизации препарата были приготовлены сухие и жидкие смеси, содержащие указанные компоненты в соотношениях, приведенных в таблице, а также контрольные смеси, не содержащие ряд компонентов. До и после шестимесячного хранения было проведено определение биологической активности препарата на клетках диплоидной ткани опухоли легкого человека в присутствии (против) вируса везикулярного стоматита. При определении активности препарата сухие формы разводили в соответствующем количестве воды, а жидкие использовали без дальнейшей обработки.

Стабильность сухих и жидких форм препарата интерферона-α-2 при хранении (температура 4^oС) приведена в таблице.

Таким образом, было установлено, что смеси, приготовленные по указанным выше прописям и содержащие компоненты интерферона α-2, ацетата α-токоферола и органической кислоты в указанных диапазонах сохраняют активность в течение 6 месяцев. Количество ацетата α-токоферола, меньшее 0,005 мг/мл, и кислоты, меньшее 0,02 мг/мл, не предотвращает потери активности при хранении.

Изобретение относится к области медицины, а именно к препаратам интерферона, которые могут применяться для лечения вирусных и онкологических заболеваний. Препарат интерферона, содержащий интерферон α-2, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 и стабилизатор, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора он содержит смесь ацетата α-токоферола и органической кислоты при следующем соотношении ингредиентов: интерферон 1-100 млн ME, ацетата α-токоферола 0,05-0,1 мг, органическая кислота 0,02-10 мг, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 - остальное. В качестве органической кислоты он содержит аскорбиновую, лимонную, мочевую, янтарную кислоту или глицин, а в качестве буферобразующих солей он содержит соли, способные образовывать фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис-буферные растворы. Технический результат: создание композиции препарата интерферона стабильного при хранении как в сухом, так и в жидком виде, в том числе после приготовления раствора для инъекций, глазных капель, жидких аэрозолей в течение 6 месяцев. 3 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Препарат интерферона, содержащий интерферон α-2, буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 и стабилизатор, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора он содержит смесь ацетата α-токоферола и органической кислоты при следующем соотношении ингредиентов:

Интерферон α-2 1-100 млн ME

Ацетата α-токоферола 0,05-0,1 мг

Органическая кислота 0,02-10 мг

Буферобразующие соли, обеспечивающие рН 7,4 Остальное