СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСТОТЫ ФТИВАЗИДА И МЕТАЗИДА Российский патент 2004 года по МПК A61K31/4409 A61K31/455 A61P31/06 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в Центрах контроля качества лекарств, контрольно-аналитических и заводских лабораториях для стандартизации и анализа лекарственных средств.

Одной из актуальных проблем фармацевтического анализа является разработка новых и усовершенствование существующих способов контроля качества лекарственных средств. Объектами настоящего исследования были выбраны фтивазид и метазид. Одним из требований нормативно-технической документации для оценки чистоты фтивазида и метазида является обнаружение специфических примесей. Фтивазид и метазид в качестве возможных специфических примесей могут содержать исходные продукты синтеза: гидразид изоникотиновой кислоты (ГИНК) и ванилин.

Нормативно-техническая документация рекомендует определение специфических примесей в фтивазиде и метазиде проводить химическим методом.

Известен способ оценки чистоты фтивазида и метазида, принятый нами за прототип, который заключается в приготовлении водных растворов испытуемых веществ с последующим образованием ГИНК на основе йодкрахмальной пробы, используя его способность окисляться под действием нитрита натрия в кислой среде, а ванилина - реакцией с фенолфталеином и щелочью (ФС 42-2468-96 "Метазид", ФС 42-3266-96 "Фтивазид"). Рекомендованный нормативно-технической документацией химический метод, применяемый для контроля чистоты фтивазида и метазида, не является селективным, так как на результаты реакции могут оказывать влияние окислители и восстановители, в то же время эти методики не дают количественной оценки содержания примесей.

Техническим результатом является повышение селективности, объективности и чувствительности анализа. Технический результат достигается путем приготовления cпиртовых растворов определяемых веществ, их хроматографированием и обнаружением с помощью УФ-света.

Применение метода хроматографии в тонком слое сорбента позволяет повысить селективность, объективность и чувствительность анализа.

Использование предлагаемой системы растворителей для хроматографирования позволяет четко разделить пятна определяемых веществ и примесей, что повышает селективность и объективность анализа.

Обнаружение пятен определяемых веществ и примесей на хроматограмме с помощью УФ-света позволяет повысить чувствительность анализа, которая составила 0,5 мкг.

Новым в достижении технического результата является то, что готовят спиртовой раствор испытуемого вещества и возможных примесей и используют хроматографию в тонком слое сорбента, причем в качестве сорбента используют силикагель.

Новым является также то, что в качестве подвижной фазы используют систему растворителей хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:1:1:0,5 и обнаруживают зоны веществ на хроматограмме в УФ-свете.

В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов и растворов возможных примесей использовали спирт 95% как более летучий растворитель, позволяющий обеспечить экспрессность определения.

Исследуемые лекарственные вещества и возможные примеси характеризуются наличием в молекулах различных функциональных групп и поэтому отличаются по физико-химическим свойствам. Исходя из этого оптимальным методом их разделения следует считать метод хроматографии в тонком слое сорбента, который характеризуется экспрессностью, селективностью и высокой чувствительностью (Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. - М.: Мир, 1965. - 542 с.).

На основании изучения особенностей строения фтивазида, метазида и их возможных примесей было установлено, что оптимальное разделение исследуемых веществ может быть достигнуто при использовании в качестве сорбента силикагеля. Он является кислым сорбентом и позволяет разделить вещества, учитывая различия в их кислотно-основных свойствах.

Для обнаружения исследуемых объектов на хроматограммах использовали облучение УФ-светом (длина волны 254 нм). Чувствительность обнаружения исследуемых веществ указанным методом составила 0,5 мкг. Детектирование фтивазида, метазида, ГИНК и ванилина на хроматограммах осуществляли с помощью ультрафиолетового осветителя типа "ВИО-1" (светофильтры УФС-1, УФС-2) длина волны 254 нм.

Для выбора оптимальной подвижной фазы изучили хроматографическое поведение фтивазида, метазида, ГИНК и ванилина в ряде растворителей. Авторы установили, что хроматографическая подвижность исследуемых веществ увеличивается с возрастанием полярности растворителей. В связи с этим основными компонентами подвижной фазы были выбраны растворители, существенно отличающиеся друг от друга по полярности: хлороформ и спирт 95%. Путем варьирования количеством спирта в подвижной фазе была подобрана хроматографическая система состава хлороформ - спирт 95% (9:1), позволяющая разделить фтивазид, ванилин, ГИНК и метазид. Значение R_f фтивазида, ванилина, ГИНК и метазида составило соответственно 0,3; 0,79; 0,14 и 0,08. Однако зона фтивазида в данном случае не имела правильной формы.

Для получения правильно очерченной зоны фтивазида в хроматографическую систему добавляли 25%-ный раствор аммиака. Добавление в хроматографическую систему 25%-ного раствора аммиака привело к получению четко очерченной зоны фтивазида, но зоны всех других веществ сблизились и перестали делиться. Значение R_f фтивазида, ванилина, ГИНК и метазида составило соответственно 0,19; 0,19; 0,28 и 0,18. Замена 25% раствора аммиака на ледяную уксусную кислоту позволила достичь разделения фтивазида, ванилина, ГИНК и метазида. Значение R_f в хроматографической системе состава хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота (9:1:1) составило соответственно 0,49; 0,92; 0,31 и 0,15. Однако зона ванилина приблизилась к линии фронта, что является нежелательным. Для снижения подвижности ванилина в подвижную фазу добавляли 25% раствор аммиака. В результате проведенных экспериментов найдена подвижная фаза хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака (9: 1:1:0,5), позволяющая разделить фтивазид, ванилин, ГИНК и получить зоны веществ правильной формы.

Сопоставительный анализ показывает, что заявляемый способ отличается от прототипа тем, что готовят спиртовые растворы определяемых веществ и возможных примесей и используют хроматографию в тонком слое сорбента, причем в качестве сорбента используют силикагель, а в качестве подвижной фазы используют систему растворителей хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:1:1:0,5 и обнаруживают зоны веществ на хроматограмме в УФ-свете, что соответствует критерию изобретения "новизна".

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение селективности, объективности и чувствительности анализа, исключает использование дорогостоящих реактивов, что соответствует критерию "промышленная применимость".

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Способ осуществляют следующим образом. Готовят раствор испытуемого лекарственного вещества. Для этого 0,5 г препарата встряхивают с 10 мл спирта 95% и фильтруют. 0,02 мл полученного раствора (1 мг) капилляром наносят на линию старта хроматографической пластинки "Армсорб" или "Сорбфил". Рядом наносят 0,01 мл (1 мкг) 0,01% раствора стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) ГИНК в спирте 95% и в случае анализа фтивазида дополнительно наносят 0,02 мл (2 мкг) 0,01% раствора СОВС ванилина в спирте 95%. После высушивания пластинку помещают в хроматографическую камеру с системой растворителей хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака (9: 1: 1: 0,5) и хроматографируют восходящим методом. После хроматографирования пластинку сушат на воздухе в течение 10 минут, а затем просматривают в УФ-свете (длина волны 254 нм). Пятна примесей ГИНК и ванилина на хроматограмме испытуемого раствора не должны превышать по совокупности величины и интенсивности окраски пятна СОВС (не более 0,1% и не более 0,2% соответственно) в препарате.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Готовят растворы испытуемого образца и растворы веществ свидетелей, которые могут выступать как специфические примеси описанным выше способом. Хроматографируют испытуемые растворы, используя оптимальные системы растворителей. Далее обнаруживают зоны веществ на хроматограмме УФ-светом.

При контроле чистоты фтивазида на хроматограмме обнаружена зона фтивазида, имеющая R_f 0,32, а также зоны специфических примесей: ГИНК, имеющая R_f 0,21 и ванилина, имеющая R_f 0,79. Пятна специфических примесей не превышают по совокупности величины и интенсивности окраски пятна свидетелей.

Испытуемый образец метазида имел на хроматограмме пятно, соответствующее метазиду с R_f 0,11, а также пятно, соответствующее ГИНК с R_f 0,21, которое по величине и интенсивности окраски не превышает пятно свидетеля ГИНК.

Данные примеры подтверждают, что предлагаемый способ может быть использован для контроля чистоты фтивазида и метазида и испытуемые образцы этих лекарственных веществ соответствуют требованиям нормативного документа.

Таким образом, предлагаемый способ контроля чистоты фтивазида и метазида с использованием тонкослойной хроматографии позволяет повысить чувствительность, селективность и объективность анализа.

Изобретение относится к области медицины. Готовят спиртовые растворы испытуемого лекарственного вещества и стандартного образца вещества свидетеля гидразида изоникотиновой кислоты (ГИНК) и ванилина и наносят на хроматографическую пластинку "Армсорб" или "Сорбфил". После высушивания пластинку помещают в хроматографическую камеру и хроматографируют восходящим методом в системе растворителей хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:1:1:0,5. После хроматографирования пластинку сушат и просматривают в УФ-свете. Изобретение позволяет повысить селективность анализа чистоты фтивазида и метазида.

Способ определения чистоты фтивазида и метазида путем приготовления раствора определяемого вещества и обнаружения примесей, отличающийся тем, что готовят спиртовые растворы определяемых веществ и возможных примесей и проводят хроматографию в тонком слое сорбента, причем в качестве сорбента используют силикагель, а в качестве подвижной фазы используют систему растворителей хлороформ - спирт 95% - ледяная уксусная кислота - 25%-ный раствор аммиака в соотношении 9:1:1:0,5 и обнаруживают зоны веществ на хроматограмме в УФ-свете.