СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА Российский патент 2004 года по МПК G01N33/569 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано для ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Проблема воспалительных заболеваний ЖКТ является актуальной для практического здравоохранения в связи со значительным ростом патологии желудочно-кишечного тракта у детей, подростков и взрослого населения [1], а своевременное их распознавание становится одной из важных задач диагностической службы.

Известна диагностика воспалительных заболеваний ЖКТ путем использования рентгенографического, гастроскопического, радиотермометрического способов [2], а также путем типирования HLA-антигенов тканевой гистосовместимости [3].

Известные способы используются при наличии клинических симптомов заболевания и не могут широко использоваться в целях ранней диагностики в связи их инвазивностью.

Известен способ выявления кишечного дисбиоза и кишечной инфекции, заключающийся в том, что определяют “антиинтерфероновую” активность одномоментно у всех колоний энтеробактерий в посеве фекалий на питательном агаре с препаратом человеческого лейкоцитарного интерферона в концентрации 2 МБК для тест-культуры Corynebacterium xerosis ГИСК 181, и при инактивации интерферона колониями исследуемых бактерий делают заключение о состоянии кишечного микробиоценоза: обнаружение признака у 1-50% колоний указывает на кишечный дисбиоз, а наличие признака у более 50% колоний - на кишечную инфекцию [4].

Так как кишечный дисбиоз способствует развитию, формированию и прогрессированию хронических воспалительных процессов в различных органах, в том числе воспалительных заболеваний ЖКТ [2], данный способ можно рассматривать в качестве аналога, но использовать для эффективной ранней диагностики воспалительных заболеваний ЖКТ не представляется возможным.

Заявляемый способ решает задачу эффективной ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта из исследуемой пробы фекалий готовят их разведения в изотоническом растворе хлорида натрия, проводят посев полученной суспензии на питательный агар, инкубируют, проводят подсчет колоний выросших бактерий, обрабатывают хлороформом, заливают вторым слоем питательного агара с тест-культурой Escherichia coli К-12 ГИСК 240367, вновь инкубируют, по зонам отсутствия роста тест-культуры определяют колонии бактерий, обладающих колициногенной активностью, проводят их подсчет и, при процентном соотношении числа колоний, обладающих колициногенной активностью, ко всем выросшим колониям более 45%, диагностируют воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта.

Достигаемый при осуществлении способа технический результат состоит в том, что новый способ ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта позволяет повысить эффективность выявления воспалительных заболеваний ЖКТ, а именно, на ранней стадии их проявления, когда клинические симптомы еще отсутствуют, что позволяет поставить верный диагноз, начать адекватное лечение и предотвратить возможные осложнения. Предлагаемый способ не требует приобретения дорогостоящей аппаратуры и прост в осуществлении.

Известно определение бактериоциногенной активности у различных представителей энтеробактерий [5]. Явление колициногении используется как стабильная генетическая метка в эпидемиологической практике, а также для отбора эффективных производственных штаммов пробиотиков в лечении дисбактериоза кишечника [6].

В источниках патентной и научно-технической информации сведений об использовании такого свойства микроорганизмов, как колициногенная активность для диагностики воспалительных заболеваний не обнаружено.

Авторами экспериментально установлена возможность использования колициногенных свойств кишечных палочек для ранней диагностики воспалительных заболеваний ЖКТ.

В результате проведенных клинических исследований выявлено, что у больных с воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта количество колициногенных штаммов бактерий составляет более 45% по отношению ко всем выделенным бактериям.

Были проведены бактериологические исследования проб фекалий, взятых у 36 больных с воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта (хронический гастрит, хронический гастродуоденит, хронический панкреатит и др.) и у 14 условно здоровых пациентов. Результаты исследования представлены в таблице.

Как видно из таблицы, у 34 из 36 пациентов с воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта доля колоний бактерий, обладающих колициногенной активностью, составляла от 45 до 100% по отношению ко всем выделенным при бактериологическом исследовании проб фекалий бактериям (в среднем 80,8±6,5%). В группе условно здоровых пациентов (14 человек) колонии бактерий, обладающих колициногенной активностью, не обнаружены вовсе или их доля по отношению ко всем выделенным при бактериологическом исследовании проб фекалий бактериям составляла от 1 до 45% (в среднем 14,5±9,4%).

Способ осуществляется следующим образом.

Из взятых на бактериологическое исследование проб фекалий готовят их разведение 10^-5 в изотоническом растворе хлорида натрия, проводят посев 0,1 мл полученной суспензии данной концентрации на 1,5% питательный агар, инкубируют 24 ч при температуре 37°С, проводят подсчет выросших колоний бактерий, обрабатывают хлороформом в течение 40-60 мин, заливают вторым слоем 0,7% питательного агара, смешанного с 0,1 мл взвеси суточной тест-культуры Escherichia coli К-12 ГИСК 240367 (плотность 10 ед. по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасовича), вновь инкубируют в течение 24 ч при температуре 37°С, по зонам отсутствия роста тест-культуры над колониями и вокруг последних определяют колонии бактерий, обладающих колициногенной активностью, проводят их подсчет и, при процентном соотношении числа колоний, обладающих колициногенной активностью, ко всем выросшим колониям более 45%, диагностируют воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Пациент Г., 29 лет. Профилактический осмотр. Диагноз: хронический поверхностный гастрит с сохранной кислотообразующей способностью. Из анамнеза известно, что страдает хроническим гастритом в течение 3 лет, дважды лечился в стационаре. За последние 6 месяцев обострении заболевания не отмечалось. Изредка беспокоили боли в животе в области эпигастрия, связанные с приемом обильной, жареной или жирной пищи, которые были кратковременными и купировались самостоятельно. В момент проведения осмотра жалоб не предъявляет, болевой синдром не определяется, однако при опросе выявляется склонность к запорам. Общий анализ крови и общий анализ мочи без особенностей. При ультразвуковом исследовании органов брюшной полости патологии не выявлено.

Проведено бактериологическое исследование фекалий. При посеве 0,1 мл разведения фекалий 10^-5 на чашку Петри с 1,5% питательным агаром выросло 150 колоний бактерий. После обработки хлороформом в течение 45 мин выросшие колонии заливали слоем 0,7% мясопептонного агара, смешанного с 0,1 мл взвеси суточной культуры индикаторного штамма Escherichia coli К-12 ГИСК 240367 (плотность 10 ед. по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А.Тарасовича). При оценке результатов выявлено 126 колоний колициногенных штаммов бактерий, что составило 84% от общего числа выросших колоний, что позволило предположить наличие острого воспалительного процесса желудочно-кишечного тракта.

Проведенная позднее фиброэзофагогастродуоденоскопия выявила обострение хронического гастрита.

Пример 2. Пациентка К., 13 лет. Профилактический осмотр. Жалоб на момент осмотра не предъявляет. При опросе выявлена непереносимость жирной и жареной пищи. При осмотре отмечались бледность кожных покровов, синева под глазами. Девочка пониженного питания со слабо выраженным подкожно-жировым слоем. При пальпации живот мягкий, безболезненный, печень и селезенка не увеличены. Симптомы Ортнера, Мерфи, Кера - отрицательные. Общий анализ крови и общий анализ мочи без особенностей. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости выявило лабильный перегиб средней трети тела желчного пузыря и дуоденогастральный рефлюкс.

При посеве разведения фекалий 10^-5 на чашку Петри с питательным агаром количество колициногенных штаммов бактерий составило 100%.

При фиброэзофагогастродуоденоскопии получены данные: поверхностный гастрит, дуоденит, дуоденогастральный рефлюкс, что подтверждает наличие обострения хронического гастродуоденита, предполагаемого нами по результатам бактериологического исследования.

Пример 3. Пациент подросток Ч., 14 лет. При бактериологическом исследовании фекалий заявляемым способом обнаружено 6% колициногенных колоний кишечных палочек, что свидетельствует об отсутствии острого воспалительного процесса ЖКТ. Наше предположение было подтверждено в дальнейшем данными клинического и лабораторного обследования.

Пример 4. Пациент П., 43 лет. При исследовании фекалий заявляемым способом колициногенные колонии бактерий не выявлены, это позволило нам сделать вывод, что острый воспалительный процесс в желудочно-кишечном тракте данного пациента отсутствует.

Дополнительные клинико-лабораторные исследования подтвердили наши выводы.

Таким образом предлагаемый способ ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта позволяет выявить воспалительное заболевание ЖКТ на ранней стадии его проявления, когда клинические симптомы еще отсутствуют, своевременно провести целенаправленные дополнительные методы исследования для уточнения топической диагностики, начать адекватное лечение и предотвратить возможные осложнения. Заявляемый способ прост в осуществлении, так как не требует применения сложной и дорогостоящей аппаратуры.

Источники информации

1. Зелинская Д.И. Педиатрическая служба России: перспектива развития.//Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 1999.- № 2. - С. 4-7.

2. Григорьев П.Я., Яковенко А.В. Справочное руководство по гастроэнтерологии. - М., Медицинское информационное агентство, 1997. - 476 с. - С. 33-50.

3. Губергриц Н.Б., Линевский Ю.В., Загоренко Ю.А. и др. Способ прогнозирования развития хронического рецидивирующего панкреатита. - Официальный бюллетень Российского агентства по патентам и товарным знакам, 1998. - № 35. - Ч. II. - С. 343.

4. Патент РФ №2088938, кл. 6 G 01 N 33/569, 33/48, 1997.

5. Кохановская Т.М. Выявление колициногении у сочленов естественных кишечных биоценозов. //Антибиотики и химиотерапия. - 1971. - № 2. - С. 130-133.

6. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. - Л., 1966. - С. 172-184.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. Из исследуемой пробы фекалий готовят разведение в изотоническом растворе хлорида натрия. Проводят посев полученной суспензии на питательный агар. Инкубируют. Проводят подсчет выросших колоний бактерий. Обрабатывают хлороформом. Заливают вторым слоем питательного агара с тест-культурой Escherichia coli К-12 ГИСК 240367, вновь инкубируют. Определяют колонии бактерий, обладающих колициногенной активностью, по зонам отсутствия роста тест-культуры. Проводят их подсчет и, при процентном соотношении числа колоний, обладающих колициногенной активностью, ко всем выросшим колониям бактерий более 45%, диагностируют воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта. Способ позволяет повысить эффективность ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. 1 табл.

Способ ранней диагностики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, отличающийся тем, что из исследуемой пробы фекалий готовят разведение в изотоническом растворе хлорида натрия, проводят посев полученной суспензии на питательный агар, инкубируют, проводят подсчет выросших колоний бактерий, обрабатывают хлороформом, заливают вторым слоем питательного агара с тест-культурой Escherichia coli К-12 ГИСК 240367, вновь инкубируют, по зонам отсутствия роста тест-культуры определяют колонии бактерий, обладающих колициногенной активностью, проводят их подсчет и, при процентном соотношении числа колоний, обладающих колициногенной активностью, ко всем выросшим колониям бактерий более 45%, диагностируют воспалительное заболевание желудочно-кишечного тракта.