ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ДЕПРЕССИЙ "ФЛУОГЛИЗИН" Российский патент 2004 года по МПК A61K31/138 A61K31/704 A61P25/24 

Изобретение относится к области медицины, а именно к разработке новых лекарственных препаратов, обладающих антидепрессивным действием.

Депрессией страдает 3-5% населения, примерно 200 миллионов человек в мире. В настоящее время в мировой медицинской практике при лечении различных форм депрессий или депрессивных состояний широкое применение находят препараты избирательного типа действия, в частности ингибиторы нейронального захвата серотонина, такие как флуоксетин, норфлуоксетин, тразодон. Однако указанные средства характеризуются рядом существенных недостатков: достаточно большие дозы препаратов с малой широтой терапевтического индекса, долгий период элиминации, приводящий к повреждению клеток печени и неблагоприятному воздействию на функцию почек.

Наиболее близким к заявленному агенту является профлузак (международное непатентованное название - флуоксетин в виде гидрохлорида) с химической формулой -N-метил-3-(4¹-трифторметилфенокси)-3-фенилпропиламин гидрохлорид, клиническое изучение которого показало, что проявление антидепрессивного эффекта связано с ингибированием им нейронального захвата серотонина в ЦНС. Профлузак является более мощным ингибитором захвата серотонина, чем норэпинефрин. У профлузака намного слабее, чем у трициклических антидепрессантов проявляется антагонизм к мускариновым, гистаминовым и α-адренергическим рецепторам. Слабее выражены антихолинергические, седативные и кардиоваскулярные свойства. Профлузак эффективен для устранения депрессивного состояния, расстройства сна и субфактора беспокойства в лечении возрастных пациентов с депрессией [PU 3312DPP].

Профлузак имеет достаточно высокую токсичность (248 мг/кг при внутрижелудочном введении мышам и 452 мг/кг - крысам) при терапевтической суточной дозе от 20 до 60 мг.

Его токсичность и малая величина терапевтического действия может стать серьезным недостатком.

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, заключается в создании эффективного, низкотоксичного лекарственного средства для лечения различных форм депрессий, а также в расширении ассортимента антидепрессивных средств.

Поставленная задача решается путем использования в качестве антидепрессантов новых соединений, являющихся молекулярными комплексами метил-3-(4¹-трифторметилфенокси)-3-фенилпропиламина (свободное основание флуоксетина - СОФ) с глицирризиновой кислотой (ГК) в соотношении 1:(1-4).

Структура комплекса представлена на схеме 1.

Предварительное тестирование комплекса на антидепрессивную активность позволило отобрать в качестве наиболее перспективного лекарственного средства - комплекс СОФ:ГК - 1:4 (молярные доли). Одна весовая часть лекарственного средства - комплекса 1:4 содержит в этом случае 0,0722 части СОФ.

Острая токсичность лекарственного средства - комплекса СОФ:ГК - 1:4 определялась на белых беспородных мышах массой 20-22 г при однократном внутрижелудочном способе введения по методу Кербера.

Показано, что лекарственное средство - комплекс СОФ:ГК - 1:4 является малотоксичным веществом: ЛД₅₀ больше 5000 мг/кг, т.е. в 20 раз ниже, чем у профлузака (ЛД₅₀=248 мг/кг) при аналогичном способе введения.

Для исследования антидепрессивной активности лекарственного средства - комплекса СОФ:ГК - 1:(1-4) был использован набор стандартных методов: двигательная активность, принудительное плавание, взаимодействие со снотворным препаратом хлоралгидратом, взаимодействие с предшественником серотонином - 5-окситриптофаном; М-холиномиметиком - ареколином.

Изучаемое лекарственное средство - комплекс 1:1 и 1:4 вводились мышам в дозах 5, 10, 15 и 25 мг/кг внутрижелудочно. Указанные дозы лекарственного средства - комплекс 1:4 содержат соответственно 0,36, 0,72, 1,08 и 1,42 мг/кг СОФ. Эталон сравнения - профлузак вводился в суточной терапевтической дозе 25 мг/кг.

Все полученные экспериментальные данные обрабатывали с использованием t-критерия Стьюдента.

Взаимодействие лекарственного средства - комплекса (в молекулярных соотношениях 1:1 и 1:4) со снотворным препаратом - хлоралгидратом изучали при их однократном внутрижелудочном введении в вышеуказанных дозах. О способности изменения длительности хлоралгидратового сна судили по времени утраты и восстановления рефлекса переворачивания мышей. Результаты, представленные в табл. 1 и 2, свидетельствуют о том, что по сравнению с профлузаком лекарственное средство - комплекс 1:1 и 1:4 почти во всех дозах уменьшали продолжительность сна у мышей.

Для выяснения проявления степени антагонизма лекарственного средства - комплекса 1:4 к мускариновым рецепторам был выбран стандартный тест ареколинового тремора. Лекарственное средство - комплекс 1:4 вводился по упомянутой схеме. Эффект оценивался по 5-бальной шкале. Критерием эффекта считались сила и продолжительность тремора.

Результаты опытов представлены в табл. 3. В этом тесте лекарственное средство - комплекс 1:4 по сравнению с контрольными животными снижал продолжительность и интенсивность ареколинового тремора. Эталон сравнения - профлузак проявил антагонизм.

В тесте “принудительного плавания” схема введения лекарственного средства - комплекса 1:1; 1:4 и профлузака была аналогична. Учитывали среднюю продолжительность стресс-состояния иммобилизации (неподвижности) мышей в течение 20 минут.

Статистически обработанные результаты представлены в табл. 4 и 5. Был установлен дозозависимый эффект. Лекарственное средство - комплекс 1:4 способствовало повышению активности мышей в дозах 10 мг/кг на 30%, в дозе 25 мг/ кг - на 25% и 15 мг/кг - на 16%. В дозе 5 мг/кг снижал уровень активности мышей и увеличивал время иммобилизации на 29%.

Одним из важным тестов, выясняющим воздействие лекарственного средства - комплекса 1:4 на серотониновую структуру, является взаимодействие его с предшественником серотонина - 5-окситриптофаном. Лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5, 10, 15, 25 мг/кг и эталон сравнения - профлузак в дозе 25 мг/кг вводились однократно внутрижелудочно.

Критерием эффективности служило изменение количества актов встряхивания головой в течение одного часа. Этот эффект, как известно, вызывал 5-окситриптофан. Данные опыта представлены на фиг. 2. В ходе исследований установлен дозазависимый эффект. Наиболее выраженное ингибирующее действие на серотониновые структуры лекарственное средство - комплекс 1:4 оказало в дозе 25 мг/кг, снимая полностью феномен встряхивания головой к 52 минуте опыта. В группе животных, которым вводили лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозе 5 мг/кг, наблюдался активирующий эффект на протяжении всего эксперимента.

Влияние лекарственного средства - комплекса 1:4 на поведенческие реакции мышей изучали при однократном внутрижелудочном введении агента в дозе 25 мг/кг на модели “открытого поля”. Результаты, представленные в табл. 6, свидетельствуют о том, что лекарственное средство - комплекс 1:4 снижает активность мышей (по количеству общих движений и прыжков) по сравнению с профлузаком.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение лекарственного средства - комплекса N-метил-3-(4¹-трифторметилфенокси)-3-фенилпропиламина (СОФ) с 3-O-(2¹-O-β-D-глюкуронопиранозил)-β-D-глюкуронопиранозидом 3β-гидрокси-11-оксо-18βН-20-олеан-12-ен-30-овой кислотой (18 β-глицирризиновой кислотой, β-ГК) состава 1:1

К раствору 0,86 г (1 ммоль) β-ГК (чистота не ниже 98%) в 10 мл 70% водного этанола добавили 0,31 г СОФ в 1 мл ацетона и нагревали на кипящей водяной бане 2 ч, упарили досуха в вакууме, получили 1,17 г (100%) комплекса в виде желтовато-серого порошка. УФ-спектр λminmax

Спектр ЯМР¹³ С (δ mg 22.63 МГц СОС1₃, ТМС-внутренний стандарт): фрагмент глицирризиновой кислоты) 39.0 (С¹), 27.2 (С²), 78.3 (С³), 39.0 (С⁴), 54.8 (С⁵), 17.5 (С⁶), 32.7 (С⁷), 43.1 (С⁸), 61.6 (С⁹), 37.0 (С¹⁰), 199.2 (С¹¹), 128.1 (С¹²), 168.3 (С¹³), 45.2 (С¹⁴), 26.4 (С¹⁵), 26.4 (С¹⁶), 31.7 (С¹⁷), 48.2 (С¹⁸), 41.0 (С¹⁹), 43.9 (С²⁰), 31.1 (С ²¹), 37.7 (С ²²), 28.1(C²³), 15.6 (С²⁴), 16.2 (С²⁵), 18.6 (С²⁶), 23.2 (С²⁷), 28.1 (С²⁸), 28.4 (С²⁹), 176.1 (С³⁰), 106.0 (C^1'), 83.8 (С^2'), 77.75 (С^3'), 72.8 (С^4'), 76.1 (С^5'), 172.3 (С^6'), 105.1 (С^1''), 76.1 (С^2''), 77.4 (С^3''), 72.7 (С^4''), 77.1 (С^5''), 172.3 (С^6''); (сигналы фрагмента_N-метил-3-(4¹-трифторметилфенокси)-3-фенилпропиламина, СОФ) 160.10 (С^4''), 139.5 (С^1''), 46.32 (С³), 34.77, 33.15

Найдено %: С 62.58, Н 48.56, N 1.28; F 5,20

Вычислено %: С 62.60, Н 8.66, N 1,23; F 5,04; C₅₉H₈₀NO₁₇F₃

Пример 2. Получение лекарственного средства - комплекса N-метил-3-(4'-трифторметилфенокси)-3-фенилпропиламина (СОФ) с 3-O-(2¹-O-β-D-глюкуронопиранозил)-β-D-глюкуронопиранозидом 3β-гидрокси-11-оксо-18βН-20-олеан-12-ен-30-овой кислотой (18 β-глицирризиновой кислотой, β-ГК) состава 1:4.

К раствору 3,40 г (4 ммоль) β-ГК (чистота не ниже 98%) в 30 мл 70% водного этанола добавили раствор 0,31 г (1 ммоль) СОФ в 1 мл ацетона и нагревали на кипящей водяной бане 2 ч, упаривали в вакууме (0,1 мм Hg) при 40°С досуха в течение 5 ч, получили 3,71 г (100%) комплекса СОФ: β-ГК состава 1:4

УФ-спектр λminmax

Спектр ЯМР¹³ С идентичен в основном спектру ЯМР¹³ С, приведенному для комплекса СОФ: β-ГК состава 1:1 (см. пример 1).

Молекулярная масса, измеренная методом ИТЭК, 3450±200

Найдено %: С 61.76, Н 7.42, N 0.36; F 1,56

Вычислено %: С 61.72, Н 7.39, N 0,39; F 1,58; С₁₈₅Н₃₃₈ NO₆₅F₃

Пример 3. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекса 1:4 на тесте “хлоралгидратовый сон”

Бодроствующим беспородным мышам массой 20-22 г вводили внутрижелудочно снотворный препарат - хлоралгидрат в дозе 325 мг/кг [1].

Лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5, 25 мг/кг и профлузак в дозе 25 мг/кг вводили внутрижелудочно за час до воспроизведения экспериментальной модели.

Критерием эффекта служили время утраты и восстановления рефлекса переворачивания мышей с бокового положения.

Установлено, что лекарственное средство - комплекс 1:4 потенцирует действие снотворного препарата в большей степени в дозе 5 мг/кг, чем в дозе 25 мг/кг по сравнению с контрольной группой. Тогда как профлузак увеличивает время снотворного эффекта хлоралгидрата в 4 раза. Результаты представлены в табл. 1.

Пример 4. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекс 1:1 на тесте “хлоралгидратовый сон”

Бодроствующим беспородным мышам массой 20-22 г вводили внутрижелудочно снотворный препарат - хлоралгидрат в дозе 325 мг/кг [1].

Лекарственное средство - комплекс 1:1 в дозах 5, 25 мг/кг и профлузак в дозе 25 мг/кг вводили внутрижелудочно за час до воспроизведения экспериментальной модели.

Критерием эффекта служили время утраты и восстановления рефлекса переворачивания мышей с бокового положения.

Результаты, представленные в табл. 2, указывают на то, что лекарственное средство - комплекс 1:1 во всех дозах потенцирует действие снотворного препарата по сравнению с контрольной группой в 2 раза, тогда как профлузак увеличивает время снотворного эффекта хлоралгидрата в 4 раза.

Пример 5. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства-комплекса 1:4 на модели ареколинового тремора

Для воспроизведения модели возбуждения центральных М-холинорецепторов ареколин вводили внутрибрюшинно в дозе 15 мг/кг за час до введения комплекса 1:4 [2]. Лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5, 25 мг/кг и эталон сравнения - профлузак в дозе 25 мг/кг вводили однократно внутрижелудочно.

В результате исследований показано, что лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5 и 25 мг/кг повышал интенсивность тремора у мышей без увеличения продолжительности. Профлузак проявлял выраженный антагонизм в дозе 25 мг/кг. Результаты в табл. 3.

Пример 6. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекса 1:4 на модели “принудительного плавания”

Лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5, 10, 15, 25 мг/кг и профлузак в дозе 25 мг/кг вводили однократно внутрижелудочно за час до воспроизведения теста “принудительного плавания” [3]. Антидепрессивное действие оценивали по времени иммобилизации мышей.

Был установлен дозозависимый эффект. Лекарственное средство - комплекс 1:4 способствовал повышению активности мышей в дозах 10 мг/кг на 30%, в дозе 25 мг/ кг - на 25% и 15 мг/кг - на 16%. В дозе 5 мг/кг снижал уровень активности мышей и увеличивал время иммобилизации на 29%. Результаты исследований представлены в табл. 3.

Пример 7. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекса 1:1 на модели “принудительного плавания”

Лекарственное средство - комплекс 1:1 в дозах 5, 10, 15, 25 мг/кг и профлузак в дозе 25 мг/кг вводили однократно внутрижелудочно за час до воспроизведения теста “принудительного плавания” [3]. Антидепрессивное действие оценивали по времени иммобилизации мышей.

Был установлен дозозависимый эффект. Лекарственное средство - комплекс 1:1 способствовал повышению активности мышей в дозах 10 мг/кг на 30%, в дозе 25 мг/кг - на 25% и 15 мг/кг - на 16%. В дозе 5 мг/кг снижал уровень активности мышей и увеличивал время иммобилизации на 29%. Результаты исследований представлены в табл. 4.

Пример 8. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекса 1:4 на модели 5-окситриптофанового феномена встряхивания головой (“тест встряхивания мокрой собаки”) у мышей

Введение предшественника серотонина 5-окситриптофана (субстанция фирмы ICN) проводили мышам внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг [8]. Лекарственное средство - комплекс 1:4 вводили однократно внутрижелудочно в дозах 5, 10, 15, 25 мг/кг, а эталон сравнения - профлузак в дозе 25 мг/кг. Количество актов встряхивания головой подсчитывалось каждые 6,5 минут в течение 60 минут. В ходе исследований установлен дозазависимый эффект. Наиболее выраженное ингибирующее действие на серотониновые структуры лекарственное средство - комплекс 1:4 оказало в дозе 25 мг/кг, снимая полностью феномен встряхивания головой к 52 минуте опыта. В группе животных, которым вводили лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозе 5 мг/кг, наблюдался активирующий эффект на протяжении всего эксперимента. Результаты исследований представлены на фиг. 2.

Пример 9. Исследование антидепрессивного действия лекарственного средства - комплекса 1:4 на модели “открытое поле”

Лекарственное средство - комплекс 1:4 в дозах 5, 10, 15, 25 мг/кг и эталон сравнения - профлузак в дозе 25 мг/кг вводили однократно внутрижелудочно за час до помещения животных в “отрытое поле”.

Эффект оценивался по изменению количества различных видов движений и общего эмоционального состояния животных на приборе фирмы Tru Scan (США). Результаты представлены в табл. 6.

Таким образом, показано, что лекарственное средство - комплекс СОФ с ГК-1:4 проявляет антидепрессивное действие, аналогичное профлузаку, в дозе действующего фармакона примерно в 18 раз меньшей.

Это означает, что лекарственное средство - комплекс 1:4 по активности превосходит блокатор обратного захвата серотонина профлузак более чем на порядок.

Лекарственное средство - комплекс 1:4 в 20 раз менее токсично, чем профлузак. Применение лекарственного средства - комплекса СОФ: ГК-1:4 вместо профлузака позволит снизить дозу дорогостоящего СОФ примерно в 18 раз. Глицирризиновая кислота обладает противоязвенной, противовоспалительной, гепатотропной и иммуностимулирующей активностями, что также является важным дополняющим фактором для лекарственного препарата длительного применения [4-10].

Литература

1. Машковский М.Д., Андреева Н.И., Полежаева А.И. Фармакология антидепрессантов. - М.: Медицина, 1983, с.194.

2. Ускова Н.В., Антелова Н.А. Сопоставление ацеклидинового тремора с ареколиновым и никотиновым у крыс разного возраста // Фарм. и токсикол., 1977, т.40, № 5, с.517-521.

3. Porsolt D.R., Anton G., Blavet N. Comparison of antidepressants in swimming test // Nature, 1978, v.47, p.379-391.

4. Толстиков Г.А., Шульц Э.Э., Баптина Л.А., Толстикова Т.Г. Солодка. Неиспользуемые возможности здравоохранения России./Химия в интересах устойчивого развития, 1997, №5, с. 57-73.

5. Толстиков Г.А., Балтина Л.А., Шульц Э.Э., Покровский А.Г. Глицирризиновая кислота // Биорган. хим., 1997, т.23, №9, с.679.

6. Балтина Л.А., Давыдова В.А., Толстикова Т.Г. и др. Тризамещенные соли β-глицирризиновой кислоты, обладающие противовоспалительной и противоязвенной активностью // Хим.-фармацевт. ж., 1991, № 3, с.45-48.

7. Давыдова В.А., Толстикова Т.Г., Балтина Л.А. и др. Соли β-глицирризиновой кислоты - стимулирующие репаративную регенерацию кожи // Хим.-фармацевт. ж., 1991, № 5, с.39-43.

8. Толстиков Г.А., Балтиина Л.А., Толстикова Т.Г. и др. Комплексы β-глицирризиновой кислоты с нестероидными противовоспалительными средствами как новые транспортные формы // Хим.-фармацевт. ж., 1991, т.25, № 2, с.29-32.

9. Mizoguchi J., Ikemoto J., Arai T. Effect of glycyrrhizin on the antibody production of pokeweed mitogen stimulated lymphocytes in vitro // Arerugi, 1984, v.33, № 6, р.328-335.

10. Hirabayashi К., Ywaba S., Matsumoto H. Antiviral activities of glycyrrhizin and its modified compounds aganist human immunodeficiency virus type I (HIV-I) and herpes gimplex virus type I (HSV-I) in vitro // Chem. Pharm. Bull., 1991, v.39, № 1, p.112-115.

Изобретение относится к области медицины, а именно к новому лекарственному средству для лечения различных форм депрессий, представляющему собой молекулярный комплекс свободного основания флуоксетина с глицирризиновой кислотой при следующем соотношении компонентов: свободное основание флуоксетина: глицирризиновая кислота 1:(1-4). 6 табл., 2 ил.

Лекарственное средство для лечения различных форм депрессий, включающее молекулярный комплекс свободного основания флуоксетина с глицирризиновой кислотой при мольном соотношении свободное основание флуоксетина : глицирризиновая кислота 1:(1-4).