ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИБУТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ Российский патент 1994 года по МПК C07J53/00 A61K31/705 

Описание патента на изобретение RU2024546C1

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, конкретно, к гликопептиду β -глицирризиновой кислоты с дибутиловым эфиром L-глутаминовой кислоты: 3-0-[2-0-(N- β-D-глюкопиранозируланоил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-N- β -D-глюкопираноизилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир]-(3 β, 20 β)-11,30-диоксо-30-(N-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-30-норолеан-12-ена формула (1)
Ylu(ОВи)2, проявляющему анти-СПИД активность.

Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.

В настоящее время в мире интенсивно проводятся исследования по поиску средств лечения СПИДа. Известно уже более 50 препаратов, подавляющих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro [1]. Одним из таких препаратов является глицирризиновая кислота (ГК). Японскими исследователями было установлено, что ГК эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ [2-6]. Показано также, что введение ГК в высоких дозах (800-1600 мг/день) больным СПИДом вызывает у них увеличение содержания лимфоцитов и снижение количества вирусного антигена [5]. Механизм антивирусного действия ГК до настоящего времени остается неустановленным. Однако, ГК малоэффективна как ингибитор репликации ВИЧ на хронически инфицированных клетках.

Целью изобретения является поиск новых соединений в ряду производных β -глицирризиновой кислоты, обладающих анти-СПИД-активностью.

Поставленная цель достигается гликопептидом β -глицирризиновой кислоты формула I, проявляющей анти-СПИД-активность.

Фармакологические свойства описываемого соединения были изучены в отделе культивирования и диагностики ретровирусов НПО "Вектор".

Противовирусная активность соединения I изучалась на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор гликопептида в ДМСО (25 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 250-500 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных опытах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4 сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата).

В качестве препаратов сравнения использовали очищенную β -глицирризиновую кислоту (0,2-0,5%), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках in vitro, и один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и термированием синтеза вирусной ДНК [7].

Основным недостатком этого препарата является его высокая токсичность [8].

Установлено, что соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,25 до 0,50 мг/мл (на 99,3-99,5%) (таблица). По уровню выявленной противовирусной активности гликопептид (I) аналогичен АЗТ и β-ГК. Препарат менее токсичен по сравнению с АЗТ, причем снижение концентрации препарата приводит к уменьшению токсического воздействия на культуру клеток (увеличению % живых клеток).

При использовании β -ГК и гликопептида (I) в равных концентрациях (250 мкг/мл) анти-ВИЧ - активность соединения I была более выражена.

ЛД50 гликопептида (I) = 650 (500-845) мг/кг (внутрибрюшинно) и ≈ 7000 мг/кг (внутрижелудочно) мыши. Данное соединение относится к классу малоопасных веществ. Соединение (I) менее токсично, чем азидотимидин, количество живых клеток (%) в случае гликопептида (I) было в 2 раза больше, чем у АЗТ. При введении в желудок препарат (I) также менее токсичен, чем исходная β-ГК, ЛД50 которой составляет ≈ 5000 мг/кг (мыши).

Выход гликопептида (I) 80%. Аналитически чистый продукт получали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле при элюции смесью растворителей хлороформ-метанол = 50 : 1 и 25 : 1 (v/v).

Таким образом, новое матолоксичное производное β -глицирризиновой кислоты гликопептид (I), эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 in vitro (в культуре клеток МТ-4), менее токсичный, чем азидотимидин, аналогичный по анти-СПИД - активности АЗТ и β -ГК.

Сущность изобретения демонстрируется следующими примерами:
П р и м е р 1. Изучение анти-СПИД активности.

Противовирусная активность гликопептида (I) изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4 (in vitro). Растворы препаратов в ДМСО (20 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 250-500 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0% . В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4 сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препаратов сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и термированием вирусной ДНК, и β -глицирризиновую кислоту, эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках. Результаты проведенных экспериментов приведены в таблице.

Как видно из данных таблицы, исследованное соединение I эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в указанных концентрациях (на 98,5-99,5%). По уровню выявленной противовирусной активности производное β -ГК (I) аналогично АЗТ и β -ГК. В разведении 250 мкг/кг гликопептид (I) эффективнее β -ГК в той же концентрации. Соединение (I) менее токсично по сравнению с АЗТ, т.к. количество живых клеток значительно (≈ в 2 раза) выше, чем в случае АЗТ. Снижение концентрации препарата приводит к снижению токсического воздействия на культуру клеток.

П р и м е р 2. Получение гликопептида (I).

К раствору 1,64 г (2 ммоль) очищенной β -глицирризиновой кислоты (92-95% ) в 50 мл сухого диоксана при 0оС прибавляют 1,2 г (10,4 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 1,3 г (6 ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивают при этой температуре 2,5-3 часа, при комнатной 6-7 час и оставляют смесь на ночь при 4-8оС. Отфильтровывают выпавший осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату после охлаждения в бане со льдом прибавляют 2,0 г L-Glu(OBu)2 ˙HCl (6,8 ммоль) и по каплям 1,0 (9,8 ммоль) сухого триэтиламина и 5 мл сухого диметилформамида, выдерживают смесь при комнатной температуре с периодическим перемешиванием 24 часа. Растворитель упаривают в вакууме, остаток растворяют в хлористом метилене (200 мл), промывают последовательно 5% HCl, водой, 5% NaHCO3, водой и сушат над MgSO4. Упариванием растворителя в вакууме получают 2,48 г (80%) гликопептида (I), который хроматографировали на колонке из силикагеля L (100/250, ЧССР), элюируя смесью хлороформа-метанола 50 : 1, 25 : 1 и 10 : 1 (v/v). Смесью 50 : 1 и 25 : 1 вымывают 1,59 г (64% ) аналитически чистого продукта (I) в виде аморфного вещества желтоватого цвета. Rf = 0,5 (хлороформ-метанол-вода = 45 : 10 : 1) (силуфол). [α]D20= +30o (с = 0,02; метанол).

ИК, ν см-1: 1740 (COOBu), 1690 (CONH, амид I); 1650 (C11 = 0); 1530 (CONH, амид II).

УФ, λmaxMeOH (lg ε): 249 нм (4,09).

Найдено, %: C 60,19; H 8,24; N 2,73.

C81H131N3O25.

Вычислено, %: C 60,30; H 8,53; N 2,72.

Растворим в ацетоне, метаноле, тетрагидрофуране, диоксане, спирте, диметилформамиде.

Похожие патенты RU2024546C1

название год авторы номер документа
ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С МЕТИЛОВЫМ ЭФИРОМ ГЛИЦИЛ-L-ВАЛИНА, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ 1991
  • Балтина Л.А.
  • Покровский А.Г.
  • Плясунова О.А.
  • Толстиков Г.А.
RU2024542C1
ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИМЕТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ 1991
  • Толстиков Г.А.
  • Балтина Л.А.
  • Покровский А.Г.
  • Плясунова О.А.
  • Муринов Ю.И.
RU2024544C1
АМИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С МЕТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L -ГИСТИДИНА, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ 1991
  • Балтина Л.А.
  • Покровский А.Г.
  • Плясунова О.А.
  • Толстиков Г.А.
RU2024543C1
ГЛИКОПЕПТИД ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С S-БЕНЗИЛ-L-ЦИСТЕИНОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-ВИЧ АКТИВНОСТЬ 2001
  • Кондратенко Р.М.
  • Балтина Л.А.
  • Плясунова О.А.
  • Покровский А.Г.
  • Толстиков Г.А.
RU2198177C2
АМИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С 6-АМИНО-2-ТИО-УРАЦИЛОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ 1991
  • Балтина Л.А.
  • Покровский А.Г.
  • Плясунова О.А.
  • Толстиков Г.А.
RU2024547C1
АМИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С 6-АМИНОУРАЦИЛОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ 1991
  • Толстиков Г.А.
  • Балтина Л.А.
  • Покровский А.Г.
  • Плясунова О.А.
  • Муринов Ю.И.
  • Сандахчиев Л.С.
RU2024545C1
ГЛИКОПЕПТИД ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ГЛИЦИЛ-L-ФЕНИЛАЛАНИНОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-ВИЧ-1 АКТИВНОСТЬ 2006
  • Балтина Лидия Ашрафовна
  • Плясунова Ольга Александровна
  • Балтина Лия Александровна
  • Покровский Андрей Георгиевич
  • Толстиков Генрих Александрович
RU2315058C1
АМИД ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С 5-АМИНОУРАЦИЛОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-ВИЧ АКТИВНОСТЬ 2001
  • Кондратенко Р.М.
  • Балтина Л.А.
  • Мустафина С.Р.
  • Плясунова О.А.
  • Покровский А.Г.
  • Толстиков Г.А.
RU2199547C2
N'-{N-[3-ОКСО-20(29)-ЛУПЕН-28-ОИЛ]-9-АМИНОНОНАНОИЛ}-3-АМИНО-3-ФЕНИЛПРОПИО НОВАЯ КИСЛОТА, ОБЛАДАЮЩАЯ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ И ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2002
  • Толстиков Г.А.
  • Петренко Н.И.
  • Еланцева Н.В.
  • Шульц Э.Э.
  • Плясунова О.А.
  • Ильичева Т.Н.
  • Борисова О.А.
  • Проняева Т.Р.
  • Покровский А.Г.
RU2211843C1
ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИБУТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И ПРОТИВОЯЗВЕННУЮ АКТИВНОСТЬ 1991
  • Балтина Л.А.
  • Давыдова В.А.
  • Зарудий Ф.А.
  • Лазарева Д.Н.
  • Толстиков Г.А.
RU2024548C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 024 546 C1

Реферат патента 1994 года ГЛИКОПЕПТИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ДИБУТИЛОВЫМ ЭФИРОМ L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ

Использование: в качестве средства с анти-СПИД-активностью. Сущность: изпродукт 3-0-[2-0-(N- b -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-N- b -D-глюкопиранозилураноил-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир]-(3 b , 20 b )-11,30-диоксо-30-(N-L-глутаминовой кислоты дибутиловый эфир)-30-норолеан-12-ена БФ C81H131N3O25, выход 64%, Rf = 0,5( CH3Cl : CH3OH : H2O = 45 : 10 : 1). [α]2D

0 = +30°(с = 0,02, CH3OH ). Реагент I: β -глицирризиновая кислота. Реагент II: дибутиловый эфир L-глутаминовый кислоты. Условия реакции: в среде сухого диоксана в присутствии N-гидроксисукцинимида и N,N′-дициклогексилкарбодиимида при дальнейшем прибавлении сухого триэтиламина и сухого диметилформамида. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 024 546 C1

Гликопептид β - глицирризиновой кислоты с дибутиловым эфиром L-глутаминовой кислоты общей формулы

где R - L - Glu (OBu)2,
проявляющий анти-СПИД-активность.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1994 года RU2024546C1

Механическая топочная решетка с наклонными частью подвижными, частью неподвижными колосниковыми элементами 1917
  • Р.К. Каблиц
SU1988A1

RU 2 024 546 C1

Авторы

Толстиков Г.А.

Балтина Л.А.

Покровский А.Г.

Плясунова О.А.

Сандахчиев Л.С.

Даты

1994-12-15Публикация

1991-03-04Подача