СОЕДИНЕНИЯ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ДОСТАВКИ АКТИВНЫХ СРЕДСТВ Российский патент 2004 года по МПК C07C233/25 C07C237/36 C07C237/40 A61K31/18 A61P5/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к соединениям для доставки активных средств, таких как биологически или химически активные средства, к месту действия. Такие соединения хорошо подходят для образования смесей без ковалентных связей с активными средствами для перорального введения, введения в ободочную кишку или других способов введения животным. Также описываются способы получения и введения таких композиций.

Предпосылки создания изобретения

Обычные способы доставки активных средств часто серьезно ограничены биологическими, химическими и физическими барьерами. Как правило, эти барьеры создаются средой, через которую происходит доставка, окружающей средой места действия, куда производится доставка, и/или самим местом действия. Биологически и химически активные средства особенно чувствительны к таким барьерам.

При доставке биологически активных и химически активных фармакологических и лечебных средств животным такие барьеры создаются организмом. Примерами физических барьеров являются кожа, липидные бислои и мембраны различных органов, являющиеся относительно непроницаемыми для некоторых активных средств, но которые должны быть пройдены перед достижением места действия, такого как циркуляторная система. К химическим барьерам относятся, но не ограничиваются перечисленными, изменения рН в желудочно-кишечном (GI) тракте и расщепляющие ферменты.

Эти барьеры имеют особое значение при создании систем для пероральной доставки. Можно было бы выбрать пероральную доставку животным многих биологически или химически активных средств, если бы не биологические, химические и физические барьеры. Среди многих средств, которые, как правило, не подходят для перорального введения, находятся биологически или химически активные пептиды, такие как кальцитонин и инсулин; полисахариды и, в частности, мукополисахариды, включая, но не ограничиваясь им, гепарин; гепариноиды; антибиотики и другие органические вещества. Такие средства могут быстро стать неэффективными или разрушиться в желудочно-кишечном тракте под действием кислотного гидролиза, ферментов и т.п. Кроме того, размер и строение макромолекулярных лекарственных средств могут препятствовать поглощению.

Ранее разработанные способы перорального введения уязвимых фармакологических средств основывались на совместном введении с адъювантами (например, резорцинами и неионными поверхностно-активными веществами, такими как полиоксиэтилен-олеиловый эфир и полиоксиэтилен-н-гексадециловый эфир) для искусственного повышения проницаемости стенок кишечника, а также на совместном введении с ингибиторами ферментов (например, ингибиторами панкреатического трипсина диизопропилфторфосфатом (DFF) и трасилолом) для подавления ферментативного расщепления. Также описаны липосомы как системы для доставки лекарственных средств в случае инсулина и гепарина. См., например, патент США 4239754; Patel et al. (1976), FEBS Letters, Vol.62, pg.60; и Hashimoto et al. (1979), Endocrinology Japan, Vol.26, pg.337. Однако широкий спектр применения таких систем для доставки лекарственных средств исключается вследствие того, что (1) такие системы требуют токсичных количеств адъювантов или ингибиторов; (2) подходящие низкомолекулярные "нагрузки", т.е. активные средства, недоступны; (3) системы показывают плохую устойчивость и неадекватные сроки годности; (4) системы трудны для изготовления; (5) системы не в состоянии защитить активное средство (нагрузку); (6) системы неблагоприятным образом изменяют активное средство; или (7) системы не в состоянии создать возможность или промотировать поглощение активного средства.

Позднее для доставки фармацевтических средств стали использовать микросферы из синтетических полимеров смешанных аминокислот (протеиноидов). Например, в патенте США 4925673 описываются соединения для протеиноидных микросфер, содержащих лекарственные средства, а также способы их получения и применения. Такие протеиноидные микросферы полезны для доставки ряда активных средств. Кроме того, для доставки фармацевтических средств используются некоторые модифицированные аминокислоты. См., например, патент США 5629020; патент США 5643957; патент США 5650386 и патент США 5776888.

Однако все еще существует потребность в простых дешевых системах для доставки, которые легко получить, и которые могут доставлять широкий ряд активных средств различными способами.

Краткое изложение сущности изобретения

Описываются соединения и композиции, полезные при доставке активных веществ. К числу таких соединений относятся соединения, перечисленные далее, или их соли. Соответствие номеров и названий соединений по изобретению представлено в табл.1.

Композиции настоящего изобретения содержат по меньшей мере одно активное средство, предпочтительно биологически или химически активное средство, и по меньшей мере одно из соединений или их солей настоящего изобретения. Также описываются способы получения и введения таких композиций. Композиции, содержащие соединения и активные средства, полезны для доставки активных средств в выбранные биологические системы и для повышения или улучшения биологической доступности активного средства по сравнению с введением одного активного средства.

Подробное описание изобретения

Композиции настоящего изобретения содержат активное средство и средство для доставки. Эти композиции можно использовать для доставки различных активных средств через различные биологические, химические и физические барьеры, и, в частности, они подходят для доставки активных средств, которые подвержены разрушению со стороны окружающей среды.

Другими преимуществами настоящего изобретения являются простота получения и дешевизна сырья. Композиции и способы получения по настоящему изобретению рентабельны, просты для осуществления и могут быть применены для коммерческого производства в промышленном масштабе.

Соединения

Соединения могут быть в форме карбоновой кислоты и/или ее солей. Соли включают, но не ограничиваются ими, соли органические и неорганические, такие как натриевые соли. Кроме того, можно использовать полиаминокислоты и пептиды, содержащие одно или несколько таких соединений.

Аминокислота представляет собой карбоновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну свободную аминогруппу, и включает природные и синтетические аминокислоты. Полиаминокислоты или представляют собой пептиды (представляющие собой две или большее число аминокислот, соединенных пептидными связями), или представляют собой две или большее число аминокислот, соединенных связями, образованными другими группами, способными к связыванию, например сложноэфирными или ангидридными связями. Пептиды могут изменяться по длине от дипептидов из двух аминокислот до полипептидов с несколькими сотнями аминокислот. См. Chambers Biological Dictionary, editor Peter M.B. Walker, Cambridge, England: Chambers Cambridge, 1989, page 215. Одна или несколько аминокислот или пептидных звеньев могут быть ацилированы или сульфированы.

Многие соединения из числа описанных здесь могут образовываться из аминокислот, и их можно легко получить из аминокислот способами, известными специалистам в данной области техники, основываясь на данном описании и способах, описанных в WО 96/30036, WO 97/36480, патенте США 5643957 и патенте США 5650386. Например, указанные соединения можно получить посредством взаимодействия одной аминокислоты с подходящим ацилирующим или аминомодифицирующим агентом, который реагирует со свободной аминогруппой, имеющейся в аминокислоте, с образованием амидов. Можно использовать защитные группы, чтобы избежать нежелательных побочных реакций, что хорошо известно специалистам в данной области техники. Что касается защитных групп, можно обратиться к работе T.W.Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York (1981), включенной в настоящее описание в качестве ссылки.

Соединение можно очистить посредством перекристаллизации или фракционирования на одном или нескольких твердых хроматографических носителях, одном или в сочетании. Подходящие системы растворителей для перекристаллизации включают, но не ограничиваются ими, ацетонитрил, метанол и тетрагидрофуран. Фракционирование можно осуществить на подходящем хроматографическом носителе, таком как оксид алюминия, с использованием смесей метанол/н-пропанол в качестве подвижной фазы; методом хроматографии с обращенной фазой с использованием в качестве подвижной фазы смесей трифторуксусная кислота/ацетонитрил; и методом ионообменной хроматографии с использованием в качестве подвижной фазы воды или подходящего буфера. Когда проводят анионообменную хроматографию, предпочтительно использовать градиент хлорида натрия от 0 до 500 мМ.

Активные средства

К активным средствам, подходящим для применения в настоящем изобретении, относятся биологически активные средства и химически активные средства, включающие, но не ограничивающиеся ими, пестициды, фармакологические средства и лечебные средства.

Например, биологически или химически активные средства, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, белки; полипептиды; пептиды; гормоны и, в частности, гормоны, которые самостоятельно не проходят (или проходит только часть введенной дозы) через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта и/или подвержены химическому расщеплению кислотами и ферментами в желудочно-кишечном тракте; полисахариды и, в частности, смеси мукополисахаридов; углеводы; липиды; другие органические соединения; или любые их сочетания.

Другие примеры включают, но не ограничиваются ими, перечисленные далее средства, включая их синтетические, природные или рекомбинантные источники: гормоны роста, в том числе гормоны роста человека (hGH), рекомбинантные гормоны роста человека (rhGH), бычьи гормоны роста и свиные гормоны роста; гормон-высвобождающие гормоны роста; интерфероны, в том числе α, β и γ; интерлейкин-1, интерлейкин-2; инсулин, в том числе свиньи, коровы, человека, и рекомбинантный инсулин человека, необязательно имеющий контрионы, включая ионы натрия, цинка, кальция и аммония; инсулиноподобный фактор роста, в том числе IGF-1; гепарин, в том числе нефракционированный гепарин, гепариноиды, дерматаны, хондроитины, низкомолекулярный гепарин, гепарин с очень низкой молекулярной массой и гепарин с ультранизкой молекулярной массой; кальцитонин, в том числе лосося, угря и человека; эритропоэтин; предсердный натриуретический фактор; антигены; моноклональные антитела; соматостатин; ингибиторы протеаз; адренокортикотропин, гонадотропин-высвобождающий гормон; окситоцин; лютеинизирующий гормон-высвобождающий гормон; фолликулостимулирующий гормон; глюкоцереброзидаза; тромбо-поэтин; филграстим; простагландины; циклоспорин; вазопрессин; кромолиннатрий (натрий- или динатрийхромогликат); ванкомицин; десферриоксамин (DFO); паратиреоидный гормон (РТН), включая его фрагменты; антимикробные средства, включая противогрибковые средства; аналоги, фрагменты, миметики или модифицированные полиэтиленгликолем (ПЭГ) производные этих соединений; или любое их сочетание.

Системы для доставки

Композиции настоящего изобретения содержат средство для доставки и одно или несколько активных средств. В одном из вариантов воплощения изобретения одно или несколько соединений для доставки средства или солей этих соединений, или полиаминокислот или пептидов, из которых образуются одно или несколько звеньев этих соединений или солей, могут использоваться в качестве средства для доставки посредством смешивания с активным веществом перед введением.

Смеси для введения можно получить посредством смешивания водного раствора соединения с водным раствором активного ингредиента непосредственно перед введением. С другой стороны, соединение и биологически или химически активный ингредиент можно смешивать в процессе изготовления.

Растворы могут содержать, необязательно, добавки, такие как соли фосфатного буфера, лимонная кислота, гликоли или другие диспергирующие вещества. В раствор можно включить стабилизирующие добавки предпочтительно в концентрации в интервале примерно от 0,1 до 20% (в/об.).

Композиции для доставки настоящего изобретения могут также содержать один или несколько ингибиторов ферментов. К таким ингибиторам ферментов относятся, но не ограничиваются перечисленными, такие соединения, как актинонин или эпиактинонин и их производные. Производные этих соединений описаны в патенте США 5206384. Другими ингибиторами ферментов являются, но не ограничиваются ими, апротинин (трасилол) и ингибитор Боумана-Бирка.

Количество активного средства представляет собой эффективное количество для осуществления доставки определенного активного вещества к указанной мишени. Количество активного средства в композиции, как правило, является фармацевтически, биологически, терапевтически или химически эффективным количеством. Однако это количество может быть меньше указанного, когда композицию используют в стандартной лекарственной форме, такой как капсула, таблетка, порошок или жидкость, поскольку стандартная лекарственная форма может содержать несколько композиций соединений и биологически или химически активных средств или может содержать отдельные фармацевтически, биологически, терапевтически или химически эффективные количества. Общее эффективное количество затем можно ввести в кумулятивных единицах, содержащих, в целом, фармацевтически, биологически, терапевтически или химически активные количества биологически или химически активного средства.

Общее количество активного средства, которое должно быть использовано, можно определить способами, известными специалистам в этой области техники. Однако поскольку композиции могут доставлять активные средства более эффективно, чем композиции известного уровня техники, субъекту можно вводить меньшие количества биологически или химически активных средств, чем количества, используемые в известных стандартных лекарственных формах или системах для доставки, при этом в то же время достигая те же их уровни в крови и/или то же лечебное действие.

Описываемые здесь соединения доставляют биологически и химически активные средства, в частности, пероральным, интраназальным путем, подъязычно, интрадуоденальным, подкожным, буккальным путем, через ободочную кишку, ректальным, вагинальным, мукозальным путем, через легкие, трансдермально, интрадермально, парентерально, внутривенно, внутримышечно и через глаза, а также посредством перехода гематоэнцефалического барьера.

Стандартные лекарственные формы также могут содержать любой один или сочетание эксципиентов, разбавителей, дезинтегрантов, смазывающих веществ, пластификаторов, красителей, вкусовых добавок, веществ, маскирующих вкус, сахаров, подслащивателей, солей и носителей для дозированной формы, включая, но не ограничиваясь ими, воду, 1,2-пропандиол, этанол, оливковое масло или любое их сочетание.

Соединения и композиции данного изобретения полезны для введения биологически или химически активных средств любым животным, включая, но не ограничиваясь перечисленными, птиц, таких как куры; млекопитающих, таких как коровы, свиньи, собаки, кошки, приматы, в частности люди; и насекомых. Система, в частности, выгодна для доставки биологически или химически активных средств, которые при ином способе будут разрушаться или становиться менее эффективными из-за условий, встречающихся на пути достижения активным средством зоны своего действия (т.е. участка, где активное средство должно высвобождаться из композиции для доставки) и в организме животного, которому их вводят. Соединения и композиции настоящего изобретения также полезны при введении активных средств, в особенности, тех, которые нельзя доставить определенным способом, в частности пероральным путем, или тех, для которых требуется улучшенная доставка. Доставку можно улучшить, доставляя больше активного средства за некоторый период времени или через определенный период времени (как например, ускорить доставку).

После введения активное средство, имеющееся в композиции или стандартной лекарственной форме, поглощается циркуляторной системой. Биологическую доступность средства легко оценить посредством определения известной фармакологической активности в крови, например, по увеличению времени свертывания крови, вызванного гепарином, или по снижению содержания кальция в циркуляторной системе, вызванного кальцитонином. С другой стороны, можно непосредственно определить содержание в циркуляторной системе самого активного средства.

Описание предпочтительных вариантов воплощения изобретения

Приведенные далее примеры иллюстрируют изобретение без его ограничения. Все части даны как весовые, если нет иных указаний.

Пример 1. Получение соединения

Способ А. Получение соединения 26. В 1-л круглодонную колбу, снабженную магнитной мешалкой, загружают 2-амино-п-крезол (1,71 г, 13,88 ммоль, 1 экв.) и 2 М водный раствор гидроксида натрия (20 мл). К раствору при 0°С при перемешивании добавляют по каплям метилазелоилхлорид (3,08 г, 13,96 ммоль, 1,01 экв.). По завершении добавления реакционной смеси дают возможность нагреться до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 4-5 часов при температуре окружающей среды. Величину рН раствора поддерживают на уровне примерно 11-12 добавлением 20% раствора гидроксида натрия. Затем раствор экстрагируют этилацетатом (3×30 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из ТГФ (50 мл) и обрабатывают 2 N раствором NaOH (20 мл). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 8 часов. ТСХ показывает завершение реакции. Смесь концентрируют в вакууме и подкисляют. Полученное твердое вещество собирают, перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 2,5 г продукта.

Соединения 11-15, 18-21, 24, 25, 27-35, 48-50, 54-56, 58, 65-68, 73, 83, 110, 120 и 131-133 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ. Соединения 120, 122 и 123 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ, за исключением того, что реакция проводилась в среде, содержащей ТГФ.

Способ В. Получение соединения 60. Суспензию 1,03 г (5,62 ммоль) 3-амино-4-фторгидрокоричной кислоты в 20 мл метиленхлорида обрабатывают 1,45 мл (1/24 г, 11,4 ммоль) триметилсилилхлорида и кипятят с обратным холодильником в течение 150 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и обрабатывают 2,4 мл (1,74 г, 17,2 ммоль) триэтиламина. После перемешивания в течение 5 мин смесь выливают в делительную воронку и постепенно добавляют к охлажденному до 0°С раствору 1,21 г (6,09 ммоль) О-ацетилсалицилоилхлорида в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь нагревают до 25°С и перемешивают в течение 18 ч. После промывания 3% водной хлористоводородной кислотой (2×20 мл), водой (1×20 мл) и рассолом (1×15 мл), сушки над сульфатом натрия и концентрирования в вакууме получают коричневато-желтое твердое вещество. Твердое вещество перекристаллизовывают из 15 мл 65% раствора этанол/вода и получают коричневое твердое вещество. Твердое вещество растворяют в насыщенном водном растворе бикарбоната натрия. После перемешивания до тех пор, пока не произойдет отщепление ацетатной группы (по ВЭЖХ), раствор подкисляют, чтобы вызвать образование осадка. После отделения полученного осадка фильтрацией получают 0,58 г (выход 38%) продукта реакции, т.пл.=202-4°С.

Соединения 59, 61, 74-81, 107, 109 и 111-113 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ. По указанному способу с использованием соответствующих исходных веществ также можно получить соединения 37, 42, 44 и 134.

Способ С. Получение соединения 1. В 250-мл круглодонной колбе, снабженной стержневой магнитной мешалкой, трубкой для подачи аргона и конденсатором, охлаждаемым водой, растворяют 1,4-бензодиоксан-2-он (4,50 г, 30 мл) в ацетонитриле (75 мл).

Добавляют триэтиламин (4,17 мл, 3,03 г, 30 ммоль) и 4-(4-аминофенил)масляную кислоту (5,37 г, 30 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, перемешивают в течение ночи при 25°С и концентрируют в вакууме. Коричневый остаток растворяют в метиленхлориде и промывают водным 1 N раствором хлористоводородной кислоты (1×100 мл). Образовавшееся твердое вещество отделяют фильтрацией и промывают водным 1 N раствором хористоводородной кислоты и водой. Полученное твердое вещество сушат в течение ночи в вакуумном шкафу и получают соединение в виде желтовато-коричневого твердого вещества (9,19 г, выход 93%).

По этому способу, исходя из дигидрокумарина и 8-амино-каприловой кислоты, получают соединение 53.

Способ D. Получение соединения 36. С использованием способа Т, исходя из 3,5-динитросалициловой кислоты и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-(N-3,5-динитро-салицилоил)аминокаприловую кислоту.

Раствор 0,7 г (1,9 ммоль) 8-(N-3,5-динитросалицилоил)аминокаприловой кислоты в 40 мл этилацетата обрабатывают 70 мг 10% Pd/C и помещают в атмосферу водорода на 18 ч. Катализатор удаляют фильтрацией. Фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 0,4 г (выход 62%) продукта реакции, т.пл.=156-7°С.

Способ Е. Получение соединения 2. С использованием способа С, посредством взаимодействия 4-(4-амино-фенил)масляной кислоты с 4-бензилоксифеноксиацетилхлоридом получают 4-(4-(4-бензилоксифеноксиацетил)амино)фенил)масляную кислоту.

Суспензию 5,00 г (11,9 ммоль) 4-(4-(4-бензиолксифенокси-ацетил)амино)фенил)масляной кислоты в 150 мл метилового спирта перемешивают в атмосфере аргона в течение приблизительно 20 минут. Добавляют в один прием каталитическое количество (0,4 г) 10% палладия-на-угле. Реакционный сосуд откачивают. Реакционную смесь выдерживают в атмосфере водорода в течение ночи при комнатной температуре. Затем палладий-на-угле отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме, получая продукт реакции в виде белого твердого вещества.

Соединения 8, 9 и 38 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ F. Получение соединения 39. Суспензию 10,82 г (59,7 ммоль) 5-фторизатового (isatoic) ангидрида, 9,50 г 8-аминокаприловой кислоты, 16,8 г 50 мас.% раствора К₂СО₃ в воде в 40 мл диоксана кипятят с обратным холодильником. Через 2 часа реакция завершается (определяют методом ВЭЖХ). Темно-лиловый раствор охлаждают до 25°С и подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой до рН 4,00, что вызывает образование черного осадка. Твердое вещество отделяют фильтрацией и перекристаллизовывают из 65% раствора этанол/вода, получая 11,86 г (выход 67%) продукта реакции в виде желтого твердого вещества, т.пл.=108-9°С.

Соединения 3-7, 10, 40 и 43 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ G. Получение соединения 62. Охлажденную до 5°С смесь 4-(4-аминофенил)масляной кислоты (1,0 экв.) и 6 N хлористоводородной кислоты (5,44 экв.) обрабатывают 1,05 экв. 3 N водного раствора нитрита натрия, причем его добавляют медленно, чтобы температура оставалась ниже 5°С. Добавляют 2,8 N водный раствор иодида калия (1,01 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Слои разделяют. Органическую фазу очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси метанол/метиленхлорид и получают 4-(4-иодфенил)масляную кислоту.

Раствор 4-(4-иодфенил)масляной кислоты (0,86 М) в диметилформамиде обрабатывают 2 экв. карбоната калия, 1,5 экв. 2-гидрокситиофенола и каталитическим количеством ацетата меди(2) (0,01 экв.). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч, охлаждают до 25°С, подкисляют водной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу концентрируют. Остаток очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан и получают 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляную кислоту.

Раствор (0,33 М) 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляной кислоты в смеси этилацетат/уксусная кислота обрабатывают 9,8 М водным раствором пероксида водорода. После перемешивания в течение 12 ч слои разделяют. Органическую фазу концентрируют. Очистка остатка флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси толуол/ацетон/гексан дает продукт реакции.

Способ Н. Получение соединения 82. Охлажденный до 0°С раствор 3,97 г (17,8 ммоль) 9-бром-1-нонанола в метиленхлориде обрабатывают раствором 2,91 г 2-нитрофенилизоцианата в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, перемешивают при 25°С в течение 16 ч и концентрируют в вакууме. Желтое твердое вещество идентифицируют как 9-бромнонил N-(2-нитрофенил)карбамат и используют его как оно есть.

Суспензию 2,99 г (7,72 ммоль) 9-бромнонил N-(2-нитрофенил)карбамата, 1,61 г (23,3 ммоль) нитрита натрия и 4,50 мл (4,72 г, 78,5 ммоль) уксусной кислоты в 15 мл диметилсульфоксида перемешивают при 35°С в течение 7 ч. Реакционную смесь подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой и экстрагируют диэтиловым эфиром (3×20 мл). Объединенные органические слои экстрагируют 2 N водным раствором гидроксида натрия (3×20 мл). Щелочную водную фазу подкисляют 3% водной хлористоводородной кислотой, что вызывает образование осадка. Твердое вещество собирают фильтрацией и получают 0,79 г (выход 30%) соединения, т.пл.=90-1°С.

Способ I. Получение соединения 64. С использованием способа F, исходя из изатового ангидрида и 4-(4-аминофенил)масляной кислоты, получают 4-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)масляную кислоту.

Суспензию 4,73 г (16,0 ммоль) 4-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)масляной кислоты в 40 мл триэтилортоформиата помещают в атмосферу аргона и кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. В процессе кипячения реакционная смесь становится прозрачнее. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, полученное твердое вещество собирают фильтрацией и получают 4,47 г (выход 88%) продукта реакции, т.пл.=201-204°С.

Способ J. Получение соединения 63. Раствор (0,05 М) 4-(4-(2-гидроксифенил)тиофенил)масляной кислоты в метиленхлориде при 0°С обрабатывают 4 экв. м-хлорпербензойной кислоты. Реакционной смеси дают возможность нагреться до 25°С и перемешивают в течение 12 ч. Растворитель удаляют. Остаток очищают флэш-хроматографией с использованием в качестве элюента смеси этилацетат/гексан/уксусная кислота и получают продукт реакции.

Способ К. Получение соединения 84. С использованием способа F, исходя из изатового ангидрида и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-N-(2-аминобензоил)аминокаприловую кислоту.

Суспензию 6,88 г (24,7 ммоль) 8-N-(2-аминобензоил)аминокаприловой кислоты в 100 мл метиленхлорида охлаждают до 0°С и обрабатывают раствором 2,00 мл (2,08 г, 12,4 ммоль) гексаметилендиизоциананта в 5 мл метиленхлорида. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч, охлаждают до 25°С и разбавляют 20 мл этанола. Полученное твердое вещество выделяют фильтрацией и перекристаллизовывают из смеси этилацетат/этанол/вода (1/2/1), получая в целом 5,15 г (выход 57%) продукта реакции в виде желтовато-коричневого вещества, т.пл.=138-142°С.

По этому способу с использованием соответствующих исходных веществ, также можно получить соединение 135.

Способ L. Получение соединения 51. С использованием способа А, исходя из 2-хлор-6-метоксибензойной кислоты и 8-аминокаприловой кислоты, получают 8-(N-6-хлор-2-метокси-бензоил)аминокаприловую кислоту.

Суспензию 1,27 г (3,72 ммоль) 8-(N-6-хлор-2-метокси-бензоил)аминокаприловой кислоты в 200 мл метиленхлорида в атмосфере аргона охлаждают до 0°С и обрабатывают 8 мл 1,0 М раствора трибромида бора в метиленхлориде. После перемешивания в течение 60 мин ТСХ показывает, что реакция завершилась. Реакционную смесь разбавляют водой и перемешивают в течение 30 мин. Слои разделяют. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (2×30 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученное белое твердое вещество перекристаллизовывают из смеси метанол/ацетон/вода и получают 0,5 г (выход 43%) продукта реакции, т.пл.=156-7°С.

Способ М. Получение соединения 17. Раствор, содержащий 4,28 мл (0,034 моль) дигидрокумарина, 75 мл ацетонитрила, 4,79 мл триэтиламина (3,48 г, 0,0343 моль) и 5,62 г 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты (0,034 моль), перемешивают в атмосфере аргона и смесь в колбе кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и ацетонитрил удаляют в вакууме.

Остаток перемешивают с метиленхлоридом и 1 N водной хлористоводородной кислотой, причем образуется белое твердое вещество. Это твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и метиленхлоридом, затем сушат в вакууме при 50°С и получают 9,17 г (выход 86,1%) продукта реакции, т.пл.=163-165°С.

По этой процедуре, с использованием соответствующих исходных веществ получают также соединение 16.

Способ N. Получение соединения 52. Раствор 10,0 г (65,8 ммоль) 3-гидроксифенилуксусной кислоты в 50 мл ксилола обрабатывают 6,45 мл (68,4 ммоль) уксусного ангидрида. Эту смесь кипятят с обратным холодильником в течение примерно 2,5 ч до тех пор, пока не отгонится большая часть побочного продукта ксилола и уксусной кислоты. Олиго(3-гидроксифенилуксусную кислоту) выделяют в виде коричневого масла.

Это масло растворяют в 150 мл 1,4-диоксана. К раствору олигомера добавляют раствор 9,97 г (62,7 ммоль) 8-амино-каприловой кислоты в 34,5 мл 2 N раствора NaOH. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Затем удаляют диоксан в вакууме. Коричневый остаток растворяют в 2 N растворе NaOH и экстрагируют двумя порциями этилацетата по 100 мл. Затем водный слой подкисляют 2 N раствором серной кислоты и затем экстрагируют тремя порциями этилацетата по 100 мл. Объединенные этилацетатные слои обесцвечивают с помощью активированного угля, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Затем полученное коричневое масло очищают колоночной хроматографией с использованием колонки с силикагелем со смесью этилацетат:гексан:уксусная кислота (60:40:1) в качестве подвижной фазы. Полученное белое твердое вещество промывают теплой водой (40-50°С) и получают продукт реакции в виде белого твердого вещества.

Соединения 41, 45 и 47 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ О. Получение соединения 22. К раствору 3,0 г (11,0 ммоль) 3-(4-(2-аминобензоил)аминофенил)пропионовой кислоты в 10 мл метиленхлорида добавляют по каплям в течение 30 минут уксусный ангидрид (1,12 г, 1,04 мл, 11,0 ммоль). После добавления всего количества уксусного ангидрида реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакция завершается, что определяют методом ВЭЖХ. Полученное твердое вещество выделяют фильтрацией. Полученное белое твердое вещество сушат в вакууме в течение ночи и получают продукт реакции.

Способ Р. Получение соединения 23. Смесь 5,13 г (27,9 ммоль) 2-сульфобензойного циклического ангидрида, 5,0 г (27,9 ммоль) 4-(4-аминофенил)масляной кислоты и 100 мл ацетонитрила перемешивают в течение 18 ч. Молочно-белый раствор концентрируют. Остаток растворяют в 50 мл холодной водной хлористоводородной кислоты, раствор экстрагируют этилацетатом (5×50 мл) и экстракт концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией с использованием в качестве элюента ацетонитрила и получают продукт реакции.

Способ Q. Получение соединения 57. Раствор, содержащий 10 г 5-хлор-2-гидроксибензамида (58,0 ммоль), пиридин (22 мл) и ацетонитрил (25 мл), перемешивают на ледяной бане. Добавляют по каплям этилхлорформиат (6,1 мл, 0,0638 моль). Розовый раствор перемешивают в течение 30 минут при <10°С. Ледяную баню заменяют масляной баней. Реакционную смесь нагревают до 95°С и отгоняют летучие вещества (43 мл). Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, что вызывает образование белого твердого вещества. Смесь выливают в воду (100 мл) и подкисляют концентрированной водной хлористоводородной кислотой. Полученное твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из горячего этанола, получая 9,77 г 6-хлор-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона.

Суспензию 9,77 г 6-хлор-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона (50 ммоль) в 60 мл ДМФ обрабатывают раствором 1,10-дибромдекана (52,52 г, 0,175 моль) в ДМФ (60 мл). Добавляют по каплям диизопропилэтиламин (9,6 мл, 55 ммоль). Присоединяют термометр и обратный холодильник и колбу помещают на масляную баню. Реакционную смесь нагревают при 60°С в течение приблизительно 3 час, охлаждают до 47°С и добавляют гексан (150 мл). Смесь разбавляют водой (175 мл). Образовавшееся твердое вещество удаляют фильтрацией. Водный слой промывают теплым гексаном. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывают от гексанового слоя и перекристаллизовывают из теплого гексана, получая 10,39 г 6-хлор-3-(10-бромдецил)-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона.

Смесь 6-хлор-3-(10-бромдецил)-2Н-1,3-бензоксазин-2,4(3Н)-диона (10,39 г, 0,025 моль), нитрита натрия (5,52 г, 0,08 моль) и ДМСО (60 мл) перемешивают в атмосфере аргона. Добавляют уксусную кислоту (14,9 мл) и реакционную смесь нагревают при 75°С в течение 6 ч. Затем, после охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь растворяют в этилацетате и раствор промывают 0,5 N НСl (2х) и 2 N раствором NaOH (2x). Слои с гидроксидом натрия перемешивают в течение 2 ч 20 мин и раствор подкисляют 2 М раствором H₂SO₄. Затем твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из метиленхлорида и гексана. Выход 3,0 г.

Способ R. Получение соединения 71. Раствор 3,22 г (18,4 ммоль) монометилфталата и 2,90 мл (2,11 г, 20,8 ммоль) триэтиламина в 20 мл ацетона охлаждают на ледяной (с солью) бане и обрабатывают раствором 2,00 мл (2,27 г, 20,9 ммоль) этилхлорформиата в 10 мл ацетона, который добавляют по каплям в течение 20 мин. Белый мутный раствор перемешивают в течение 15 мин и обрабатывают раствором 2,53 г (38,9 ммоль) азида натрия в 8 мл воды. После перемешивания в течение 30 мин все еще мутный раствор выливают в 50 мл воды со льдом и экстрагируют толуолом (3×30 мл). Толуольную фазу сушат над сульфатом натрия и кипятят с обратным холодильником в течение 80 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С. В несколько приемов в течение 5 мин добавляют 3,11 г (18,8 ммоль) 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты. После перемешивания в течение 64 ч реакционную смесь разбавляют 80 мл смеси диоксан/вода (3:1) и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Охлажденную смесь экстрагируют 2 N (1×30 мл) и 0,5 N (2×30 мл) раствором гидроксида натрия. Объединенные водные слои подкисляют, что вызывает образование белого твердого вещества. Выделение фильтрацией, растворение в этилацетате, фильтрация от нерастворимых веществ и концентрирование фильтрата дают 1,13 г твердого продукта реакции.

Способ S. Получение соединения 69. Суспензию 3,17 г (21,7 ммоль) 4-гидроксихиназолина с 3 каплями диметилформамида в 20,0 мл тионилхлорида кипятят с обратным холодильником. Через 150 мин прозрачный желтый раствор охлаждают до 30°С. Избыток тионилхлорида отгоняют при 50 мм рт.ст. После 15-мин выдержки при давлении 1,0 мм рт.ст. беловато-желтое содержимое колбы растворяют в 30 мл метиленхлорида и обрабатывают суспензией 3,61 г (21,9 ммоль) 3-(4-аминофенил)пропионовой кислоты в 40 мл изопропанола. Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч. Светло-желтое твердое вещество выделяют фильтрацией и сушат в вакууме, получая продукт реакции.

По этому же способу получают также соединение 70, за исключением того, что подкисление осуществляют только до рН 4,56, чтобы выделить свободный амин.

Способ Т. Получение соединения 46. Уксусный ангидрид (6,45 мл, 6,98 г, 68,4 ммоль), 4-гидроксифенилуксусную кислоту (10,00 г, 65,8 ммоль) и ксилол (50 мл) загружают в 100-мл трехгорлую колбу, снабженную стержневой магнитной мешалкой, термометром и ловушкой Дина-Старка с холодильником. Колбу нагревают до закипания реакционной смеси с обратным холодильником, причем реакционная смесь становится прозрачным желтым раствором примерно при 100°С. Большая часть летучих органических соединений (ксилол и уксусная кислота) отгоняется в ловушку Дина-Старка в течение двух часов (135-146°С). Отгонку продолжают еще в течение часа, и за это время температура постепенно повышается до 190°С, и дистиллят постепенно перестает образовываться. Остаток, пока он еще горячий, выливают в алюминиевый лоток. После остывания образуется коричневое воскообразное твердое вещество.

К раствору олиго(4-гидроксифенилуксусной кислоты) (11,06 г, 81,3 ммоль) в диоксане (150 мл) в течение пяти минут добавляют 2 N раствор гидроксида натрия (34,4 мл, 36 г, 86,7 ммоль) и 8-аминокаприловую кислоту (9,94 г, 62,5 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 90°С в течение 5,5 ч (после чего методом ВЭЖХ определяют, что реакция закончилась). Прозрачную оранжевую реакционную смесь охлаждают до 40°С. В вакууме удаляют диоксан. Коричневый остаток растворяют в 2 N растворе гидроксида натрия, экстрагируют этилацетатом (2×100 мл) и подкисляют. Экстракция этилацетатом (3×100 мл), обесцвечивание углем, сушка над сульфатом натрия и концентрирование в вакууме дают коричневое масло. Обработка теплой водой (2 раза) дает желтовато-коричневое твердое вещество, которое перекристаллизовывают из смеси этанол/вода и получают 2,48 г продукта реакции в виде желтовато-коричневого твердого вещества.

Соединения 106 и 108 также получают этим способом с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ U. Получение соединения 72. Суспензию 4,11 г (25,3 ммоль) 4-гидроксикумарина, 4,54 г (25,3 ммоль) 4-(4-аминофенил)масляной кислоты и 20 мл уксусной кислоты кипятят с обратным холодильником в течение 7 суток. Реакционную смесь охлаждают до 25°С, что вызывает образование не совсем белого твердого вещества, которое собирают фильтрацией. Фильтрат разбавляют 50 мл воды, что вызывает образование второй порции твердого вещества, которое также собирают фильтрацией. Две порции твердого вещества объединяют и перекристаллизовывают из 65% раствора этанол/вода, получая 0,62 г продукта реакции.

Способ V. Получение соединения 85. Суспензию 5,00 г 10-аминодекановой кислоты (26,7 ммоль в 70 мл метиленхлорида обрабатывают 6,78 мл хлортриметилсилана (5,80 г, 53,5 ммоль) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 140 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и затем обрабатывают 5,58 мл триэтиламина (4,1 г, 40,1 ммоль). После этого смесь перемешивают в течение примерно 20 мин и к реакционной смеси в течение 15 мин добавляют по каплям раствор 3,91 мл о-фторбензоилхлорида (4,24 г, 26,7 ммоль) в 10 мл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 0°С и затем в течение 18 ч при 25°С. Метиленхлорид удаляют в вакууме и к остатку добавляют 100 мл раствора NaOH (2 N). Эту смесь перемешивают в течение 1 ч перед тем, как смесь подкисляют раствором хлористоводородной кислоты (2 М) до рН 1. Затем подкисленную смесь экстрагируют этилацетатом (2×100 мл), экстракт обесцвечивают активированным углем, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Полученное твердое белое вещество перекристаллизовывают из смеси 50% этанол/вода, причем получают белое твердое вещество, которое сушат в течение 24 ч в вакууме при 25°С. Выход продукта реакции составляет 6,57 г (79,5%), т.пл.=85-86°С.

Соединения 86-101 также получают этим способом взаимодействием соответствующей аминокислоты с соответствующим хлорангидридом.

Способ W. Получение соединения 102. Суспензию 20,72 г глицина (0,276 моль) в 150 мл метиленхлорида обрабатывают 70,06 мл хлортриметилсилана (59,97 г, 0,552 моль) и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и затем обрабатывают 115,41 мл триэтиламина (83,79 г, 0,828 моль). После перемешивания этой смеси в течение примерно 20 мин к ней добавляют по каплям в течение 15 мин раствор 20,72 г (0,276 моль) 4-метокси-2-ацетилбензоилхлорида (58,70 г, 0,276 моль) в 75 мл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 0°С и затем в течение 18 ч при 25°С. Метиленхлорид удаляют в вакууме и к остатку добавляют 200 мл раствора NaOH (2 N). Эту смесь перемешивают в течение нескольких часов перед тем, как смесь подкисляют раствором хлористоводородной кислоты (2 М) до рН 3. Полученное твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме при 40°С. Твердое вещество перекристаллизовывают из смеси вода/этанол (3/1) и получают твердое вещество, которое сушат в течение 24 ч в вакууме при 25°С. Выход продукта составляет 27,35 г (44%), т.пл.=185,5-189°С.

Из полученного выше твердого вещества получают натриевую соль, для чего вещество растворяют в 150 мл этанола при нагревании. К раствору в этаноле добавляют гидроксид натрия (4,95 г в 14,5 мл воды) и смесь охлаждают до комнатной температуры. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывают с использованием гептана, чтобы способствовать фильтрации, и для промывки твердого вещества. После сушки получают желтовато-коричневое твердое вещество (27,73 г, 92,37%), т.пл. >230°С. Элементный анализ (CHN)% для C₁₀H₁₀N₁O₅Na·0,40Н₂О: вычислено: С, 47,21; Н, 4,28; N, 5,51; Na, 9,04; найдено: С, 47,14; Н, 4,32; N, 5,36; Na, 8,45; и 2,83% воды.

Способ X. Получение соединения 103. Суспензию 25,0 г β-аланина (0,281 моль) в 300 мл метиленхлорида обрабатывают 71,33 мл хлортриметилсилана (61,06 г, 0,562 моль) и кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и затем обрабатывают 117,50 мл триэтиламина (85,30 г, 0,843 моль). После перемешивания этой смеси в течение примерно 20 мин к ней добавляют по каплям в течение 15 мин раствор ацетилсалицилоилхлорида (55,73 г, 0,281 моль) в 150 мл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин при 0°С и затем в течение 18 ч при 25°С. Метиленхлорид удаляют в вакууме и к остатку добавляют 200 мл раствора NaOH (2 N). Эту смесь перемешивают в течение одного часа перед тем, как смесь подкисляют серной кислотой (2 М) до рН 1. Полученное масло экстрагируют этилацетатом (3×200 мл), экстракт сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют в вакууме. Твердое вещество перекристаллизовывают из смеси этилацетат/гексан (1/1) и получают твердое вещество, которое сушат в течение 24 ч в вакууме при 25°С. Выход продукта составляет 9,20 г (16%). Элементный анализ (CHN) для C₁₀H₁₀N₁О₄: вычислено: С 57,03; Н 5,27; N 6,67; найдено: С 57,41; Н 5,30; N 6,69. Из полученного выше твердого вещества получают натриевую соль, для чего вещество растворяют в 50 мл этанола при нагревании. К раствору в этаноле добавляют гидроксид натрия (1,79 г в 5,25 мл воды) и смесь охлаждают до комнатной температуры. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывают. После сушки получают твердое вещество (5,80 г), т.пл. 231-235°С. Элементный анализ (CHN) для C₁₀H₁₀N₁О₄Na·0,35H₂О: вычислено: С 50,56; Н 4,54; N 5,90; Na 9,68; найдено: С 50,30; Н 4,37; N 5,72; Na 9,55; и 2,68% воды.

Способ Y. Получение соединения 104. 4-Метоксисалициловую кислоту (98,74 г, 0,59 ммоль) перемешивают в метиленхлориде (500 мл) на ледяной бане. Добавляют по каплям соответственно триэтиламин (123,4 мл, 1,5 экв.) и ацетилхлорид (46,2 мл, 1,1 экв.). Раствор снимают с ледяной бани и перемешивают при комнатной температуре в течение двух суток. Реакцию контролируют методом ВЭЖХ. Реакционную смесь промывают 0,5 N НСl (2×200 мл) и водой (2×200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Полученное твердое вещество перекристаллизовывают из смеси метиленхлорид/гексан. Выход продукта реакции 4-метокси-2-ацетилбензойной кислоты составляет 61,72 г. Структура подтверждается данными ¹Н-ЯМР.

К смеси 4-метокси-2-ацетилбензойной кислоты (20 г, 0,195 моль) и метиленхлорида (100 мл) добавляют тионилхлорид (13,8 мл, 2 экв.) и 1 каплю ДМФ. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакууме, получая масло. Полученный 4-метокси-2-ацетилбензоилхлорид используют без очистки.

Суспензию 4-(4-аминофенил)масляной кислоты (7,87 г, 0,044 моль) в метиленхлориде (100 мл) обрабатывают TMS-хлоридом (11,2 мл) и кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и затем обрабатывают триэтиламином (18,4 мл), добавляя его по каплям. После перемешивания этой смеси в течение примерно 20 минут к ней добавляют по каплям в течение 15 мин раствор полученного выше 4-метокси-2-ацетилбензоилхлорида (10 г) в метиленхлориде (10 мл). Ледяную баню удаляют и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Метиленхлорид удаляют в вакууме и к остатку добавляют 2 N раствор NaOH (100 мл). Эту смесь перемешивают в течение 1 ч перед тем, как смесь подкисляют 2М НСl до рН 1. Затем подкисленную смесь экстрагируют этилацетатом (2×100 мл), экстракт обесцвечивают с помощью активированного угля, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Полученное белое твердое вещество перекристаллизовывают из смеси 50% этанол/вода и получают белое твердое вещество, которое сушат в течение 24 ч в вакууме при 25°С. Элементный анализ (CHN) для C₁₈H₁₉NO₅: вычислено: С 65,54; Н 5,81; N 4,25; найдено: С 65,49; Н 5,84; N 4,23. Выход составляет 7,76 г (53,6%), т.пл.=177-182°С.

Способ Z. Получение соединения 105. 4-Броммасляную кислоту (26,17 г, 0,16 моль) добавляют к метанолу (150 мл) и добавляют несколько капель серной кислоты. Этот раствор кипятят с обратным холодильником в течение 3,25 ч. Осуществляют ТСХ (EtOAc/гексан = 1:1), показывающую завершение образования эфира. Смесь концентрируют в вакууме до масла. Это масло растворяют в метиленхлориде и раствор промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Органический слой сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Структуру полученного вещества подтверждают методом ¹H-ЯМР и получают 20,26 г метил (4-бром)бутаноата.

6-Хлоркарсалам (12,4 г, 1,12 экв.), метил (4-бром)бутаноат (10,13 г, 1,0 экв.) и 10,13 г карбоната натрия (10,13 г, 1,12 экв.) перемешивают в 50 мл DMA. Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч и затем охлаждают до комнатной температуры в течение ночи. Твердое вещество отфильтровывают и промывают этанолом. К фильтрату добавляют воду и 2N раствор NaOH. Эту смесь нагревают в течение 2,5 ч. Осуществляют ВЭЖХ, показывающую завершение гидролиза. Раствор подкисляют концентрированной НС1 до рН прибл.1. Полученное белое твердое вещество отфильтровывают и помещают на ночь в вакуум над P₂O₅. Это твердое вещество перекристаллизовывают из смеси метанол/вода, отфильтровывают и сушат, получая 7,35 г соединения. Элементный анализ для C₁₁H₁₂NO₄4Cl: вычислено: С 51,28; Н 4,69; N 5,44; найдено: С 50,92; Н 4,59; N 5,46. Т.пл. 136-140°С.

Следует отметить, что температуры плавления других партий этого соединения, полученного таким же способом, более чистого по данным элементного анализа, находятся в интервале 153-155°С.

Способ АА. Получение соединения 118. В 250-мл 3-горлую круглодонную колбу, в которую загружены 6-хлоркарсалам (10,0 г, 0,0506 моль) и диметилацетамид (50 мл), добавляют карбонат натрия (5,37 г, 0,0506 моль). К реакционной смеси при перемешивании добавляют в один прием этил 5-бромгептаноат (10,91 г, 0,0460 моль) и реакционную смесь начинают нагревать. Температуру реакционной смеси поддерживают при 80°С и нагревают в течение 16 ч. Нагревание прекращают и реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь подвергают вакуумной фильтрации и остаток на фильтре промывают двумя порциями этилового спирта по 20 мл. К фильтрату добавляют воду, пока не будет отмечено образование осадка оранжево-коричневого твердого вещества. Это твердое вещество выделяют вакуумной фильтрацией и промывают сначала 20 мл этилового спирта, а затем 20 мл гептана. Это твердое вещество переносят в круглодонную колбу и добавляют 200 мл 2 N раствора NaOH. Смесь нагревают до кипения и продолжают кипячение с обратным холодильником в течение 1 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до 25°С и реакционную смесь подкисляют 2 N НСl. Выпавшее в осадок белое твердое вещество отделяют фильтрацией, перекристаллизовывают из смеси этиловый спирт:вода (30:70) и сушат в вакууме в течение ночи. Выделяют 9,55 г (63,0%) продукта реакции. Т.пл. 115-116°С. Анализ сжиганием: % С: 56,09 (выч.), 55,93 (найдено); % Н: 6,01 (выч.), 6,09 (найдено); % N: 4,67 (выч.), 4,64 (найдено). Анализ методом ¹H-ЯМР: (d₆-ДМСО): δ 12,7, с, 1Н (СООН); δ 12,0, с, 1Н (ОН); δ 8,88, т, 1Н (NH); δ 7,94, д, 1Н (Н орто- к амиду); δ 7,42, дд, 1Н (Н пара- к амиду); δ 6,92, д, 1Н (Н орто- к гидроксиду); δ 3,27, к, 2Н (СН₂ альфа- к амиду); δ 2,20, т, 2Н (СН₂ альфа- к СООН); δ 1,40, м, 4Н (CH₂ бета- к амиду, СН₂ бета- к СООН); δ 1,30, м, 4Н (остальные алифатические CH₂).

Соединения 114, 116 и 117 также получают по этому способу с использованием соответствующих исходных веществ.

Способ ВВ. Получение соединения 121. Суспензию 2-амино-4-хлорфенола (17,88 г, 124,5 ммоль), 8-этокси-8-оксооктановой кислоты (25,19 г, 124,5 ммоль), борной кислоты (0,385 г, 6,23 ммоль) и 2-амино-5-метилпиридина (0,675 г, 6,23 ммоль) в 160 мл сухого толуола кипятят с обратным холодильником (110°С) в атмосфере азота в течение 4 часов, на протяжении которых удаляют образовавшуюся воду (2,5 мл) азеотропной перегонкой в отделителе Дина-Старка. Тонкослойная хроматография на силикагеле (элюент: EtOAc/гептан, 1:1) показывает завершение реакции. К охлажденной реакционной смеси добавляют 2 N водный раствор NaOH (125 мл, 250 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч и затем охлаждают. Охлажденную реакционную смесь разбавляют этилацетатом (300 мл) и водой (150 мл). Водный слой промывают двумя порциями этилацетата (250 мл). После тщательного разделения водный слой охлаждают и подкисляют 10% раствором хлористоводородной кислоты (86,2 мл, 250 ммоль), получая твердое вещество, которое отфильтровывают, промывают гексаном и сушат в вакууме. Обработка дихлорметаном дает нужную кислоту (8-(5-хлор-2-гидроксианилино)-8-оксооктановую кислоту) (22,39 г, 60%) в виде не совсем белого твердого вещества. ВЭЖХ (колонка Higgins Kromasil 100 С18, вода/ацетонитрил/уксусная кислота, 950/50/1, 3 мл/мин, 220 нм), Rt 5,38 мин; т.пл. 123-124°С; ¹H-ЯMP (ДМСО d₆, 300 МГц) δ: 1,28 (м, 4Н), 1,51 (м, 4Н), 2,19 (т, 2Н), 2,39 (т, 2Н), 6,83 (д, 1Н), 6,93 (дд, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 9,20 (с, 1Н), 10,10 (с, 1Н), 12,00 (ушс, 1Н); ¹³С ЯМР (ДМСО d₆, 75 МГц) δ: 24,29, 24,90, 28,20, 33,58, 35,90, 116,50, 121,02, 122,20, 123,41, 127,74, 148,23, 171,93, 174,26. MS m/z 300 (М+1)⁺.

Элементный анализ для C₁₄H₁₈ClNO₄: вычислено: С 56,10; Н 6,05; Сl 11,83; N 4,67; найдено: С 56,07; Н 6,11; Сl 11,98; N 4,64.

Таким же способом, с использованием соответствующих исходных веществ, получают соединение 119. Соединения 124-130 также можно получить с использованием этого способа с соответствующими исходными веществами. Физико-химические характеристики полученных соединений представлены в табл.2.

Пример 2. Доставка паратиреоидного гормона

Получают дозирующие растворы для перорального кормления через зонд (РО) и введения через ободочную кишку (IC) соединения для доставки средства и остатков паратиреоидного гормона 1-34 (РТН) (остатков 1-38 в случае раствора с соединением 103). Раствор соединения готовят или с натриевой солью соединения, или превращением свободной кислоты в ее натриевую соль, для чего готовят раствор соединения, перемешивают, добавляют один эквивалент гидроксида натрия (1,0 N раствор) и разбавляют водой (в случае РО-растворов) или 25% водным раствором пропиленгликоля (в случае IC). Конечные дозирующие растворы получают смешиванием раствора соединения со стандартным раствором РТН (как правило, концентрации 5 мг РТН на мл) и разбавлением до нужного объема (как правило, 3,0 мл). Дозы соединения и РТН приводятся ниже в табл.1.

Самцов крыс Sprague-Dawley массой 200-250 г оставляют без пищи в течение 24 ч и вводят им кетамин (44 мг/кг) и хлорпромазин (1,5 мг/кг) за 15 мин до введения дозы. Крысам вводят один из дозирующих растворов в количестве 1 мл/кг для РО или 0,5 мл/кг для IC. Периодически берут образцы крови из хвостовой артерии для определения концентрации РТН в сыворотке. Содержание РТН в сыворотке определяют с помощью набора для радиоиммуноанализа РТН (набор # RIK 6101 от Peninsula Laboratories, Inc., San Carlos, CA). Результаты приводятся ниже в табл.3.

Пример 3. Доставка гепарина

Посредством смешивания получают дозирующие композиции для введения через ободочную кишку (IC), содержащие соединение для доставки средства и гепариннатрий USP в 25% водном растворе пропиленгликоля. Используют или натриевую соль соединения, или свободную кислоту превращают в натриевую соль с помощью одного эквивалента гидроксида натрия (1,0 N раствор). Как правило, смешивают соединение и гепарин в виде порошков, добавляют 25% водный раствор пропиленгликоля, добавляют раствор NaOH, содержимое обрабатывают ультразвуком и затем разбавляют до объема 3,0. Проверяют рН и при необходимости доводят рН до 7-8. Конечные дозы соединения и гепарина приводятся ниже в табл.4.

Самцов крыс Sprague-Dawley массой 200-250 г оставляют без пищи в течение 24 ч и вводят им кетамин (44 мг/кг) и хлорпромазин (1,5 мг/кг) за 15 мин до введения дозы. Голодным крысам вводят дозирующие растворы в количестве 1 мл/кг. Берут образцы крови посредством пункции сердца после введения кетамина (44 мг/кг). Гепариновую активность определяют с использованием активированного частичного тромбопластинового времени (АРТТ), согласно методу Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods; Philadelphia, PA; W.B.Saunders (1979). Результаты приводятся ниже в табл.4.

Пример 4. Пероральная доставка рекомбинантного гормона роста человека (rhGH)

Получают дозирующие растворы соединения и rhGH в фосфатном буфере для перорального кормления (РО) через зонд. Раствор соединения готовят или с натриевой солью соединения, или превращением свободной кислоты в ее натриевую соль, для чего готовят раствор соединения, перемешивают, добавляют один эквивалент гидроксида натрия (1,0 N раствор) и разбавляют фосфатным буфером. Конечные дозирующие растворы получают смешиванием раствора соединения со стандартным раствором rhGH (как правило, концентрации 15 мг rhGH на мл) и разбавлением до нужного объема (как правило, 3,0 мл). Дозы соединения и rhGH приводятся ниже в табл.5.

Самцов крыс Sprague-Dawley массой 200-250 г оставляют без пищи в течение 24 ч, и вводят им кетамин (44 мг/кг) и хлорпромазин (1,5 мг/кг) за 15 мин до введения дозы. Крысам вводят дозирующий раствор в количестве 1 мл/кг. Периодически берут образцы из хвостовой артерии для определения концентрации rhGH в сыворотке. Содержание rhGH в сыворотке определяют с помощью набора для радиоиммуноанализа rhGH (набор # K1F4015 от Genzyme Corporation, Inc., Cambridge, MA).

Результаты приводятся ниже в табл.5.

Пример 5. Доставка кальцитонина лосося (sCT)

Готовят дозирующие композиции для пероральной доставки (РО) соединения для доставки средства и sCT в воде посредством смешивания. Количества веществ приводятся в табл.6. К 2,0 мл воды добавляют 450 мг соединения. Используют или натриевую соль соединения, или свободную кислоту превращают в натриевую соль перемешиванием полученного раствора и добавлением одного эквивалента гидроксида натрия (1,0 N раствора) и разбавлением водой. К раствору добавляют 90 мкг sCT. Затем добавляют воду для доведения общего объема до 3,0 мл. Раствор имеет конечную концентрацию 150 мг/мл. (В случае соединений 118 и 123 растворы разбавляют до 6,0 мл и удваивают объем дозы.) Общая концентрация sCT составляет 30 мкг/мл. (В случае соединения 123 используют другое количество sCT, чтобы получить конечную дозу sCT 100 мкг/мл при введении 2,0 мл/кг.)

Самцов крыс Sprague-Dawley массой 200-250 г оставляют без пищи в течение 24 ч и вводят им кетамин (44 мг/кг) и хлорпромазин (1,5 мг/кг) за 15 мин до введения дозы. Крысам вводят дозирующий раствор в количестве 1 мл/кг (2 мл/кг в случае соединений 118 и 123). Периодически берут образцы крови из хвостовой артерии. Содержание sCT в сыворотке определяют испытаниями с помощью набора для EIA (набор # EIAS-6003 от Peninsula Laboratories, Inc., San Carlos, CA). Стандартную схему применения набора для соединений 104 и 105 изменяют следующим образом; инкубируют с 50 мкл пептидных антител в течение 2 ч при встряхивании в темноте, промывают планшет, добавляют сыворотку и биотинилированный пептид и разводят 4 мл буфера и встряхивают в темноте в течение ночи. Результаты приводятся ниже в табл.6.

Вышеуказанные патенты, заявки, методы испытаний и публикации полностью включены в настоящее описание в качестве ссылок.

Специалисты в этой области техники смогут сами предположить многие варианты настоящего изобретения на основании приведенного выше подробного описания. Все такие очевидные варианты охватываются объемом прилагаемой формулы изобретения.

Изобретение относится к новым соединениям для доставки биологически активных средств к месту действия, обладающим высокой проницаемостью по отношению к биологическим мембранам. Описаны также композиции, содержащие такие соединения, стандартные лекарственные формы и способы введения биологически активного средства, а также способ получения композиции для доставки биологически активных средств к месту действия. 5 н. и 34 з.п. ф-лы, 6 табл.

1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений:

1 3-{4-[2-(2-гидроксифенокси)ацетиламино]фенил}пропионовая кислота;

2 3-{4-[2-(4-гидроксифенокси)ацетиламино]фенил}пропионовая кислота;

3 4-[4-(2-амино-5-фторбензоиламино)фенил]масляная кислота;

4 3-[4-(2-амино-5-фторбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

5 4-[4-(2-амино-5-хлорбензоиламино)фенил]масляная кислота;

6 3-[4-(2-амино-3,5-дихлорбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

7 3-[4-(2-метиламинобензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

8 4-[4-(4-гидроксифенилацетиламино)фенил]масляная кислота;

9 4-[4-(3-гидроксифенилацетиламино)фенил]масляная кислота;

10 4-[4-(2-метиламинобензоиламино)фенил]масляная кислота;

11 3-[4-(2-гидрокси-3-фтор-5-хлорбензоиламино)фенил]пропионо-вая кислота;

12 3-[4-(2-гидрокси-3-хлор-5-фторбензоиламино)фенил]пропионо-вая кислота;

13 3-[4-(2-гидрокси-3,5-диметилбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

14 4-[4-(2-гидрокси-3,5-диметилбензоиламино)фенил]масляная кислота;

15 3-[4-(2-гидрокси-3-бром-5-хлорбензоиламино)фенил]пропионо-вая кислота;

16 4-{4-[3-(2-гидроксифенил)пропиониламино]фенил}масляная кислота;

17 3-{4-[3-(2-гидроксифенил)пропиониламино]фенил}пропионовая кислота;

18 3-[4-(2-гидрокси-3,5-дифторбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

19 4-[4-(2-гидрокси-3,5-дифторбензоиламино)фенил]масляная кислота;

20 3-[4-(2-гидрокси-5-фторбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

21 4-[4-(2-гидрокси-5-фторбензоиламино)фенил]масляная кислота;

22 3-[4-(2-ацетиламинобензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

23 2-[4-(3-карбоксипропил)фенилкарбамоил]бензолсульфонат натрия;

24 4-[4-(2-гидрокси-3-метил-5-фторбензоиламино)фенил]масляная кислота;

25 4-[4-(2-гидрокси-3-метил-5-хлорбензоиламино)фенил]масляная кислота;

26 8-(2-гидрокси-5-метилфенилкарбамоил)октановая кислота;

27 7-(2-гидроксифенилкарбамоил)гептановая кислота;

28 9-(2-гидрокси-3,5-дихлорфенилкарбамоил)нонановая кислота;

29 8-(2-гидрокси-3,5-дихлорфенилкарбамоил)октановая кислота;

30 9-(2-гидрокси-4-метилфенилкарбамоил)нонановая кислота;

31 8-(2-гидроксиметилфенилкарбамоил)октановая кислота;

32 5-(2-гидрокси-4-метилфенилкарбамоил)пентановая кислота;

33 8-(2-гидрокси-4-метилфенилкарбамоил)октановая кислота;

34 8-(2-гидрокси-5-фторфенилкарбамоил)октановая кислота;

35 9-(2-гидрокси-5-фторфенилкарбамоил)нонановая кислота;

36 8-(2-гидрокси-3-амино-5-нитробензоиламино)октановая кислота;

37 6-(2-гидрокси-4-хлорбензоиламино)гексановая кислота;

38 8-[2-(2-гидроксифенокси)ацетиламино]октановая кислота;

39 8-(2-амино-5-фторбензоиламино)октановая кислота;

40 8-(2-амино-5-хлорбензоиламино)октановая кислота;

41 8-(2-гидрокси-3,5-дифторбензоиламино)октановая кислота;

43 8-(2-метиламинобензоиламино)октановая кислота;

45 8-(2-гидрокси-3-фтор-5-хлорбензоиламино)октановая кислота;

46 8-(4-гидроксифенилацетиламино)октановая кислота;

47 8-(2-гидрокси-3-хлор-5-фторбензоиламино)октановая кислота;

48 8-(2-гидрокси-3-бром-5-хлорбензоиламино)октановая кислота;

49 8-(2-гидрокси-3,5-диметилбензоиламино)октановая кислота;

50 8-(2-метокси-6-хлорбензоиламино)октановая кислота;

51 8-(2-гидрокси-6-хлорбензоиламино)октановая кислота;

52 8-(3-гидроксифенилацетиламино)октановая кислота;

53 8-[3-(2-гидроксифенил)пропиониламино]октановая кислота;

54 8-(2-гидрокси-5-фторбензоиламино)октановая кислота;

55 8-(2-гидрокси-3-метил-5-хлорбензоиламино)октановая кислота;

56 8-(2-гидрокси-3-метил-5-фторбензоиламино)октановая кислота;

57 10-(2-гидрокси-5-хлорбензоиламино)декановая кислота;

58 3-[4-(3,5-дихлор-2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]-пропионовая кислота;

59 6-(2-гидроксибензоиламино)хинолин-2-карбоновая кислота;

60 3-[4-гидрокси-3-(2-фторбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

61 3-[4-гидрокси-3-(2-гидроксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

62 4-[4-(2-гидроксибензолсульфинил)фенил]масляная кислота;

63 4-[4-(2-гидроксибензолсульфонил)фенил]масляная кислота;

64 4-[4-(4-оксо-4Н-хиназолин-3-ил)фенил]масляная кислота;

65 3-[4-хлор-3-(2-метоксибензоиламино)бензоиламино]пропионовая кислота;

66 3-[4-фтор-3-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]пропионо-вая кислота;

67 3-[4-фтор-3-(2-метоксибензоиламино)бензоиламино]пропионовая кислота;

68 3-[4-метокси-3-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]про-пионовая кислота;

69 3-[4-(хиназолин-4-иламино)фенил]пропионовая кислота;

70 4-[4-(хиназолин-4-иламино)фенил]масляная кислота;

71 3-[4-(2,4-диоксо-1,4-дигидро-2Н-хиназолин-3-ил)фенил]-пропионовая кислота;

72 4-[4-(2-оксо-2Н-хромен-4-иламино)фенил]масляная кислота;

73 метиловый эфир 5-{2-[4-(3-карбоксипропил)фенил-карбамоил]фенилкарбамоил}пентановой кислоты;

74 3-[3-метил-4-(2-гидроксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

75 3-[3-метокси-4-(2-гидроксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

76 3-[3-(2,3-диметоксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

77 3-[3-(2-гидрокси-3,5-дихлорбензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

78 3-[2-(2,3-диметоксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

79 3-[2-фтор-4-(2-гидроксибензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

80 3-{4-[(бензо[1,3]диоксол-4-карбонил)амино]фенил}пропионовая кислота;

81 3-[4-(2-бензоиламинобензоиламино)фенил]пропионовая кислота;

82 9-(2-нитрофенилкарбамоилокси)нонановая кислота;

83 9-(2-гидроксибензилкарбамоил)нонановая кислота;

84 8-{2-[3-(6-{3-[2-(7-карбоксигептилкарбамоил)фенил]-уреидо}гексил)уреидо]бензоиламино}октановая кислота;

85 10-(2-фторбензоиламино)декановая кислота;

86 6-(2-фторбензоиламино)гексановая кислота;

87 11-бензоиламиноундекановая кислота;

88 11-(2-фторбензоиламино)ундекановая кислота;

89 6-бензоиламиногексановая кислота;

90 4-(2-метоксибензоиламино)масляная кислота;

91 4-(2-метилбензоиламино)масляная кислота;

92 4-(2-фторбензоиламино)масляная кислота;

93 4-бензоиламиномасляная кислота;

94 10-(2-метоксибензоиламино)декановая кислота;

95 12-(2-метилбензоиламино)додекановая кислота;

96 12-(2-метоксибензоиламино)додекановая кислота;

97 12-(2-фторбензоиламино)додекановая кислота;

98 12-бензоиламинододекановая кислота;

99 10-(2-метилбензоиламино)декановая кислота;

100 10-бензоиламинодекановая кислота;

101 6-(2-метилбензоиламино)гексановая кислота;

102 2-гидрокси-4-метоксибензоилуксусная кислота;

103 3-(2-гидроксибензоиламино)пропионовая кислота;

104 4-[4-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)фенил]масляная кислота;

105 4-(2-гидрокси-5-хлорбензоиламино)масляная кислота;

106 4-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)масляная кислота;

107 6-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)гексановая кислота;

108 10-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)декановая кислота;

109 12-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)додекановая кислота;

110 бензоиламиноуксусная кислота;

111 2-метилбензоиламиноуксусная кислота;

112 2-метоксибензоиламиноуксусная кислота;

113 2-фторбензоиламиноуксусная кислота;

114 2-гидрокси-5-хлорбензоиламиноуксусная кислота;

116 5-(2-гидрокси-5-хлорбензоиламино)пентановая кислота;

117 6-(2-гидрокси-5-хлорбензоиламино)гексановая кислота;

118 7-(2-гидрокси-5-хлорбензоиламино)гептановая кислота;

119 4-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)масляная кислота;

120 6-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)гексановая кислота;

121 7-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)гептановая кислота;

122 8-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)октановая кислота;

123 9-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)нонановая кислота;

124 2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоилуксусная кислота;

125 3-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)пропионовая кислота;

126 5-(2-гидрокси-5-хлорфенилкарбамоил)пентановая кислота;

131 8-(2-гидрокси-3,4-дифторфенилкарбамоил)октановая кислота;

132 8-(2-гидрокси-4-фторфенилкарбамоил)октановая кислота;

133 3-[4-(2-гидрокси-3-метил-5-хлорбензоиламино)фенил]про-пионовая кислота;

и их солей.

Приоритет по пунктам: