ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА БАКТЕРИОФАГОВ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2005 года по МПК C12N7/00 A61K35/74 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к составу питательной среды для производства бактериофагов и способу ее получения. Известна мясная среда, используемая для получения бактериофагов (патент РФ №2036232, опубл. 27.05.95).

Однако эта среда нестандартна и дорогостояща. Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда, содержащая в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду (патент РФ №2086646 С1, опубл. 10.04.1997).

Недостатком ее является то, что фаголизаты, полученные на этих средах, обладают плохой фильтруемостью через микропористые мембраны, что усложняет технологию.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению по способу получения питательной среды является известный способ (Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. М. Медгиз, 1962. - Т.1. - с.346). Известный способ осуществляется путем гидролиза казеина, изоосаждения и обработки углем.

Недостатком известного способа является низкая производительность.

Задачей настоящего изобретения является повышение производительности, упрощение способа, повышение качества продукта и снижение затрат.

Для достижения названного технического результата питательная среда для производства бактериофагов содержит в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду, при этом она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем соотношении компонентов:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

Отличительной особенностью предлагаемой питательной среды для производства бактериофагов является то, что она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем соотношении компонентов:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

Кроме того, для достижения указанного технического результата предлагается способ получения питательной среды для производства бактериофагов путем гидролиза казеина, смешанного с водой, с помощью соляной кислоты, изоосаждения и обработки гидролизата казеина углем, при этом гидролиз ведут при давлении 0,2±0, 05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, а изоосаждение нерасщепленного казеина и обработку углем ведут одновременно.

Кроме того, гидролиз казеина осуществляют при следующем соотношении компонентов: вода дистиллированная 100±1 л, казеин 5±0,5 кг, кислота соляная 3±0,3 л.

Отличительной особенностью предлагаемого способа является то, что гидролиз ведут при давлении 0,2±0,05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, а изоосаждение нерасщепленного казеина и обработку углем ведут одновременно. Кроме того, гидролиз казеина осуществляют при следующем соотношении компонентов: вода дистиллированная 100±1 л, казеин 5±0,5 кг, кислота соляная 3±0,3 л.

Сущность изобретения заключается в следующем. Расщепление казеина кислотой ведут при давлении 0,2±0,05 МПа и сниженной дозе казеина, что обеспечивает более глубокое расщепление белка. Для экономии времени и сокращения единиц оборудования, занятых в технологическом процессе, изоосаждение казеина и обработку гидролизата активированным углем совмещают в одну операцию. В качестве стимулирующей добавки используют набор витаминов. Использование витаминов намного упрощает приготовление среды, способствует ее стандартизации. Для приготовления гидролизата и питательной среды используют дистиллированную воду с целью обеспечения стандартности ее солевого состава. Установление в питательной среде рН (7,6±0,1) обеспечивает получение оптимальной слабощелочной среды в фаголизате (7,4±0,1), необходимой для сохранения активности бактериофагов.

Предлагаемая среда является универсальной для всех используемых в производстве бактериофагов культур: стафилококка, стрептококка, энтерококка, клебсиелл, синегнойной палочки, кишечной палочки, протея, дизентерии, сальмонелл и позволяет получать бактериофаги по активности не ниже, чем при использовании мясных сред. Активность по Аппельману фаголизатов стафилококка, стрептококков, энтерококков, синегнойной палочки, кишечной палочки, клебсиелл, протея, сальмонелл не ниже 10^-5, активность дизентерийных бактериофагов, полученных на данной среде, не ниже 10^-8. Фаголизаты хорошо фильтруются через капроновые микропористые мембраны и могут быть сконцентрированы в 100 раз и более при использовании мембранных методов разделения.

Приготовленные на данной среде бактериофаги сохраняют активность без изменения до 5 лет (срок наблюдения) при температуре (6±4)°С в защищенном от света месте.

Пример получения казеиновой питательной среды.

1. Гидролизат казеина.

Состав:

Вода(дистиллированная) 700 л

Казеин технический 35 кг

Кислота соляная (уд. вес 1,19) 21 л

Уголь активированный 14 кг

Натрия гидроксид 7,0-7,5 кг

В эмалированный реактор вместимостью 1000 л закачивают под вакуумом воду и соляную кислоту, перемешивают. Через люк загружают казеин, люк закрывают, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (1,0±0,5) ч. Вентиля закрывают и постепенно в течение (1,5±0,5) ч поднимают давление в реакторе до 0,2 МПа. Гидролиз ведут 2 ч под давлением 0,2 МПа. Обработку гидролизата проводят через (18±2) ч.

К гидролизату при перемешивании добавляют 40% раствор гидроксида натрия до рН 4,7. Всыпают уголь, перемешивают, люк закрывают, нагревают до кипения при открытых вентилях и кипятят 15 мин. Содержимое реактора фильтруют через миткалевое полотно в бутыли. Полученный гидролизат хранят при температуре (6±4)°С.

2. Приготовление питательной среды.

Состав:

кислотный гидролизат казеина 25-33 л

никотиновая кислота 0,1-0,2 г

фолиевая кислота 0,1-0,2 г

пантотенат кальция 0,1-0,2 г

рибофлавин 0,1-0,2 г

тиамина бромид 0,1-0,2 г

биотин 0,001-0,002 г

дистиллированная вода до 100 л

В реактор закачивают гидролизат, затем разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 1,1-1,2 мг/мл, добавляют гидроксид натрия до рН 7,6 и всыпают смесь витаминов. Кипятят 15 минут, фильтруют через миткалевое полотно, разливают в бутыли и стерилизуют в автоклаве при давлении 0,05 МПа в течение 30-45 мин.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается способа получения питательной среды для производства бактериофагов, и может быть использовано в медицинской микробиологии. Питательная среда для производства бактериофагов содержит в качестве основы кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, витамины - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин, дистиллированную воду. Способ получения питательной среды для производства бактериофагов, предусматривающий гидролиз нерасщепленного казеина, смешанного с водой с помощью соляной кислоты, при давлении 0,2±0,05 МПа до достижения степени расщепления 0,6-0,7, изоосаждение и обработку углем ведут одновременно. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства среды, повысить качества получаемого бактериофага, снизить себестоимость. 2 н. и 1 з.п. ф-лы.

1. Питательная среда для производства бактериофагов, содержащая в качестве основы гидролизат казеина, витамины, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она содержит кислотный гидролизат казеина со степенью расщепления 0,6-0,7, а из витаминов - никотиновую кислоту, фолиевую кислоту, пантотенат кальция, рибофлавин, тиамина бромид, биотин при следующем содержании компонентов:

Кислотный гидролизат казеина 25-33 л

Никотиновая кислота 0,1-0,2 г

Фолиевая кислота 0,1-0,2 г

Пантотенат кальция 0,1-0,2 г

Рибофлавин 0,1-0,2 г

Тиамина бромид 0,1-0,2 г

Биотин 0,001-0,002 г

Дистиллированная вода До 100 л