СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода бактериальных инфекций (в частности, неонатальный сепсис) у новорожденных детей респираторным дистресс-синдромом и перинатальным поражением центральной нервной системы, находящихся на ИВЛ.

Неонатальный сепсис занимает одно из ведущих мест в структуре заболеваемости среди новорожденных, составляя летальность от 13% до 50% (Acunas B.A., Peakman M., Liossis G. et al. Effect of freshfrozen plasma and gammaglobulin on humoral immunity in neonatal sepsis // Arch. Dis. Child. Fet. - 1994. - Vol. 70, №3. - P.182-187).

Наиболее актуальной данная проблема является для отделений реанимации и интенсивной терапии, где находятся дети из группы высокого риска, определяемой основным заболеванием, материнским анамнезом, повышенной восприимчивостью к инфекциям.

Значимость клинико-лабораторного мониторинга течения бактериальных инфекций (в частности, сепсиса) связана со значительным возрастанием летальности в группах с тяжелыми формами заболевания, с реализацией процесса в формы септического шока и полиорганной недостаточности.

Проведенный анализ литературы показал, что вопрос прогнозирования исхода бактериальных инфекций у новорожденных детей, находящихся в критических состояниях, недостаточно освещен, в связи с этим разработки в данном направлении весьма актуальны.

В настоящее время известны следующие способы прогнозирования исхода течения бактериальных инфекций у новорожденных.

Способ прогнозирования течения сепсиса у детей (В.В.Эстрин, А.Ф.Комаров, 1994 г.), основанный на подсчете в мазке крови у детей с сепсисом количества аномальных форм эритроцитов (сфероцитов), при наличии в мазке от 75 до 87% поврежденных эритроцитов состояние расценивается как очень тяжелое и прогноз заболевания - неблагоприятный.

Недостатки метода: исследуемые параметры занимают продолжительное время, трудоемки, полученные данные не всегда своевременны, достоверность исследования связана с многократным забором крови ребенка.

Прототипом предлагаемого изобретения выбран способ прогнозирования исхода инфекционно-воспалительного процесса, предложенный А.Л.Костюченко, А.Н.Бельских, А.Н.Тулупов "Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса" (СПб, "Фолиант", 2000, с.37). Сущность способа состоит в том, что у пациента проводится количественное определение С-реактивного белка (СРБ) с помощью любого из методов: турбудиметрии, нефелометрии, иммуноферментного анализа, радиальной иммунодиффузии и так далее. Повышение концентрации СРБ в сыворотке крови более 200 мг/л свидетельствует о развитии системной воспалительной реакции инфекционного генеза, а высокие цифры СРБ (200 мг/л и более) в течение 7-10 суток и более указывают на неблагоприятный исход септического процесса.

Недостатком прототипа является низкая точность и чувствительность способа. По данным литературы чувствительность метода определения СРБ составляет 60%, специфичность 50% (Anwer S.K., Mustafa S. Rapid identification of neonatal sepsis. JPMA J. Pak. Med. Assoc. 2000 Mar; 50 (3) P.94-98). Кроме того, ряд авторов указывает на ненадежность СРБ как диагностического маркера при ранней диагностике бактериальных инфекций у новорожденного, например, Ronnestad A, Abrahamsen TG, Gaustad P, Finne PH. C-reactive protein (CRP) response patterns in neonatal septicaemia. APMIS 1999 Jim; 107(6): 593-600. И, кроме того, необходимость неоднократного исследования в течение длительного времени (7-10 суток) делает проблематичным использование данного способа у новорожденных для своевременной верификации прогноза исхода септического процесса.

Задачей изобретения является разработка более совершенного, высокочувствительного метода прогнозирования исхода бактериальных инфекций у новорожденных детей.

Поставленная задача решается тем, что в крови у новорожденных детей методом фенотипирования лимфоцитов на проточном цитометре определяют концентрацию лимфоцитов, находящихся в состоянии активации по количеству CD-95 рецептора, неблагоприятный исход течения бактериальных инфекций у новорожденных прогнозируют при уровне 8,8% и ниже.

Прогнозирование неблагоприятного прогноза исхода заболевания позволяет усилить терапию бактериальной инфекции назначением более эффективных антибактериальных средств, проведением дезинтоксикационной и заместительной терапии препаратами гипериммунной плазмы и иммуноглобулинов.

CD-95 рецептор принадлежит к суперсемейству фактора некроза опухолей/фактора роста нервов. Молекулярная масса этого рецептора составляет 48 кДа (килодальтон), расположен он на поверхности лимфоцитов и состоит из 3 экстрацеллюлярных обогащенных цистеином доменов (157 аминокислот), 17 трансмембранных аминокислот и одного цитоплазматического домена (145 аминокислот) (Itoh N. et. al., 1991; Oehm A. et. al., 1993 г). Нашими исследованиями установлено, что мониторинговое определение CD-95 рецептора, расположенного на лимфоцитах новорожденного, позволяет с высокой степенью вероятности прогнозировать исход бактериальных инфекций у новорожденных детей.

Работоспособность изобретения подтверждается следующими конкретными примерами.

Пример №1.

Ребенок П - ин, 3-х суток жизни, история болезни №106/5115. Тяжесть состояния ребенка на момент перевода из родильного дома в отделение реанимации была обусловлена дыхательной недостаточностью с признаками генерализованной бактериальной инфекции (выраженная бледность кожных покровов, мраморность, гепатоспленомегалия, лейкоцитоз со сдвигом формулы влево до юных форм). Ребенок был переведен на искусственную вентиляцию легких (ИВЛ) и транспортирован в отделении реанимации. При поступлении у новорожденного взяли 1,5 мл венозной крови добавили 1 каплю гепарина. Для диагностики используют моноклональные антитела фирмы Beckman Coulter. К 20 мкл моноклональных антител CD-95 добавляют 100 мкл гепаринизированной крови, перемешивают на шейкере (1000 об/мин) в течение 3 секунд и инкубируют при комнатной температуре 20 минут. Затем добавляют 500 мкл лизирующего раствора Optilyse С фирмы Immunotech и инкубируют до полного лизиса эритроцитов. Далее дважды отмывают в 1 мл РВС фирмы Биолот при 1500 об/мин по 3 минуты. К осадку добавляют 1 мл РВС (фосфатно-солевой буфер) и ресуспендируют. Анализируют образец на проточном цитометре фирмы Beckman Coulter Epics XL.

В результате проведенного исследования были получены следующие результаты уровня CD-95 рецепторов лимфоцитов: CD-95 при поступлении - 7,8%. Через 3-е суток: CD-95 - 3,6%. На 9-е сутки: CD-95 - 3%.

Обнаружение цифр CD-95 ниже 8,8% у новорожденного с проявлениями генерализованной бактериальной инфекции свидетельствовало о неблагоприятном течении и исходе заболевания. На 11-е сутки течения заболевания ребенок умер. На паталогоанатомическом вскрытии у новорожденного был подтвержден диагноз бактериального сепсиса.

Таким образом, из данного примера следует, что обнаружение уровня CD-95 ниже 8,8% свидетельствовало о неблагоприятном прогнозе исхода бактериальной инфекции у новорожденного.

Пример №2.

Ребенок Б-ов, первых суток жизни, история №7261/131. Поступил из родильного дома в отделение реанимации на ИВЛ в связи с нарастанием дыхательной недостаточности в возрасте 6 часов. При поступлении признаки инфицирования отсутствуют, в крови уровень CD-95 составляет 22%. В реанимационном отделении ребенок получал респираторную терапию, антибактериальную терапию. На 5-е сутки у ребенка развилась генерализованная бактериальная инфекция и внутриутробная генерализованная герпетическая инфекция, при этом отмечалось снижение уровня CD-95 до 8,3%. Учитывая полученные результаты CD-95, говорящие о неблагоприятном течении и исходе заболевания, ребенку была произведена смена антибактериальных препаратов и добавлены противовирусные средства, начата интенсивная заместительная терапия препаратами гипериммунной плазмы, в/в иммуновенина и иммуноглобулина. На фоне проводимой интенсивной терапии на 10-е сутки при повторном исследовании уровень CD-95 повысился до 23,4%. На 16-е сутки ребенок был экстубирован, отлучен от ИВЛ и на 20-е сутки переведен в отделение патологии новорожденных для дальнейшего наблюдения и лечения, на момент перевода уровень CD-95 составил 39%.

Таким образом, из данного примера следует, что обнаружение уровня CD-95 выше 8,8% свидетельствовало о возможном благоприятном прогнозе исхода бактериальных инфекций у новорожденных.

Предлагаемым способом был обследован 21 новорожденный с респираторным дистресс-синдромом и перинатальным поражением ЦНС с проявлениями бактериальной инфекции, получавших лечение в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных. У 13 детей уровень CD-95 не превышал концентрацию 8,8%, у всех из них имел место летальный исход течения заболевания, при паталогоанатомическом исследовании у всех имела место бактериальная инфекция в той или иной форме (генерализованная, локальная). У 8 детей уровень CD-95 не снижался ниже концентрации 8,8%, все из них в дальнейшем были переведены в отделение патологии новорожденных.

Таким образом, исследование уровня CD-95 рецепторов в лимфоцитах крови у новорожденных с респираторным дистресс-синдромом и бактериальной инфекцией, находящихся на ИВЛ, позволяет сказать, что точность заявляемого способа составляет 90,7%.

Исходя из вышеизложенного, заявляемый способ прогнозирования исхода бактериальных инфекций у новорожденных по сравнению с существующими имеет следующие преимущества:

1. Способ позволяет прогнозировать исход бактериальных инфекций фазе, предшествующей развитию тяжелого сепсиса и полиорганной недостаточности, позволяя своевременно усилить проводимую интенсивную терапию.

2. Способ относится к экспресс-диагностике (время выполнения 2 часа).

3. Предлагаемый способ обладает высокой точностью и найдет широкое применение не только в отделениях реанимации, но и в других педиатрических стационарах.

Предлагаемый способ прогнозирования исхода бактериальных инфекций у новорожденных с дыхательными расстройствами и перинатальным поражением центральной нервной системы может использоваться в неонатологии, педиатрии и реаниматологии, дополняя известные методы лабораторной диагностики, позволяя своевременно и обоснованно назначать патогенетическую терапию, тем самым повышая выживаемость больных и сокращая сроки лечения.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования исхода бактериальной инфекции у новорожденных детей. Сущность изобретения заключается в определении CD-95 рецептора лимфоцитов крови и при уровне ниже 8,8% прогнозировании неблагоприятного исхода бактериальной инфекции у новорожденного. Преимущественно изобретение заключается в повышении точности и чувствительности способа.

Способ прогнозирования исхода бактериальных инфекций у новорожденных путем анализа крови, отличающийся тем, что определяют СD-95-рецептор лимфоцитов крови и при уровне ниже 8,8% прогнозируют неблагоприятный исход бактериальных инфекций у новорожденного.