ГИДРОХЛОРИДЫ (3-R-1-АДАМАНТИЛ)-1-ЭТИЛАМИНОВ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2005 года по МПК C07C215/14 A61K31/14 A61P31/16 A61P31/22 

Изобретение относится к группе новых биологически активных соединений адамантанового ряда, в частности к гидрохлоридам (3-R-1-адамантил)-1-этиламинов, где R-Cl, С₂Н₅, формулы

R=Cl(a), C₂H₅(б)

Изобретение может найти применение в медицине.

Наиболее близким по структуре соединением является ремантадин (гидрохлорид α-метил-1-адамантилметиламина)

оказывающий профилактическое действие в отношении гриппа, вызываемого штаммами вируса типа А. Хотя соединения Iа-б и являются 3-адамантилзамещенными аналогами ремантадина, их антигрипповая активность довольно слабая, но при этом все данные соединения проявили высокую биологическую активность в отношении вируса герпеса простого, к которому ремантадин малоактивен, а соединения Iб эффективно ингибировало как чувствительный, так и резистентный к ацикловиру варианты вируса герпеса простого.

Если сравнивать соединение Iб с эффективно используемым в медицине для лечения заболеваний герпетической природы производными адамантана, то его антигерпетическая активность превышает активность тромантадина (гидрохлорида 1-(1-адамантил)-2-[(2-диметиламино)этокси]-ацетамида) в 3 раза, а этмантина (1-(3-этиладамантил)-1-этилкарбамата) в 1,5 раза. (А.с. СССР №1721048, 1992, бюл. №11).

Цель изобретения - ряд соединений, обладающих противовирусным действием, гидрохлоридов (3-R-1-адамантил)-1-этиламинов, где R=Cl, C₂H₅.

Физико-химические свойства и спектры этих соединений приведены в табл.1 и 2.

Согласно изобретению биологическая активность патентуемых соединений подтверждается примерами 1-3.

Соединения Iа-б испытывались в отношении их токсичности для клеточных культур и антивирусной активности на моделях вируса гриппа типа А (классической чумы птиц (ВКЧП) штамм Вейбридж [Hav1N1] и человека Aichi/2/68 [H3N2]) и вируса герпеса простого типа 1 (штамм Л₂).

Пример 1. Изучение токсического действия.

В таблице 3 представлены результаты изучения токсического действия производных адамантана на культуру первично-трипсинизированных ФЭК и культуры перевиваемых клеток МДСК и Vero. Ремантадин использовался в качестве референс-препарата. Как видно из таблицы, ЦД₅₀ Iб была приблизительно в 4 раза меньше ЦД₅₀ ремантадина, а препарат Iа еще менее токсичен для исследованных культур.

Пример 2. Изучение биологической активности против вируса гриппа А.

При изучении чувствительности вируса гриппа к производным адамантана ингибирующий эффект оценивали по наличию цитопатических изменений в клеточном монослое и по накоплению гемагглютининов в культуральной жидкости. Показано, что препараты Ia, Iб обладали слабым эффектом на репродукцию вируса: величины ХТИ были в 10-12 раз ниже, чем у ремантадина. Результаты приведены в таблице 4. Препараты не обеспечивали полного ингибирования развития вирусиндуцированного цитопатического эффекта (ЦПЭ) в диапазоне нецитотоксичных концентраций.

Невысокий антигриппозный эффект исследуемых соединений подтвержден также при изучении способности соединений ингибировать бляшкообразование при их введении в состав агарного покрытия (таблица 5). Ингибирующий эффект обнаруживается в присутствии концентраций соединений, резко превышающих эффективные концентрации ремантадина.

Пример 3. Изучение биологической активности против вируса герпеса простого типа 1.

При изучении антигерпетического эффекта производных адамантана в культуре клеток Vero (таблица 6) установлено, что препарат Ia ингибирует развитие вирусиндуцированного эффекта в концентрациях, близких величине ЦД₅₀, а величина ХТИ приблизительно в 2 раза превосходит ХТИ ремантадина. Iб проявил выраженный селективный эффект в отношении ВПГ-1 (ХТИ=12,82). Близкие результаты были получены при использовании ВПГ-1, обладающего резистентностью к базовому лекарственному противогерпетическому препарату ацикловир.

Полученные результаты были подтверждены при изучении влияния наиболее активного соединения Iб на инфекционный титр ВПГ-1. Максимальные концентрации, использованные в этой серии экспериментов, не превышали 1/2 ЦД₅₀. В присутствии в концентрации 31,2 мкг/мл (приблизительно 1/2 ЦД₅₀) ремантадин снижал инфекционный титр вируса по сравнению с контролем на 0,9 lg БОЕ/мл, а Iб в той же концентрации - на 1,55 lg. При увеличении концентраций Iб до 62,5 мкг/мл снижение титра составило 2,65 lg БОЕ/мл и носило избирательный характер.

Таким образом патентуемые соединения, особенно Iб, представляют собой перспективное действующее начало для разработки более эффективного антигерпетического препарата среди производных адамантана.

Таблица 4
Изучение антивирусного эффекта производных адамантана в культуре клеток МДСК на модели вирусов гриппа АПрепаратВирус гриппа А ВКЧПAichi/2/68 ИД₅₀ [мкг/мл]хтиМАК [мкг/мл]ХТИIа
Iб
ремантадин96
484,78
3,58192
962,39
1,79 1,240,21,826,80Примечание: МИ 0,1 БОЕ/клетка, продолжительность инкубации - 72 ч. Представлены результаты трех независимых опытов. ИД₅₀ и ИД₉₅ - концентрация соединения, предотвращающая развитие вирусиндуцированного ЦПЭ соответственно на 50% и 95-100% при 95-100% ЦПЭ в контроле. МАК (минимально активная концентрация) - минимальная концентрация вещества, полностью предотвращающая РГА. Химиотерапевтический индекс соединений (ХТИ) вычисляли как отношение ЦД₅₀ к ИД₅₀ (или МАК).Таблица 5
Ингибирование формирования бляшек ремантадином и рядом производных адамантана, включенными в твердое агаровое покрытие, в культуре клеток МДСК, инфицированных ВКЧП.Концентрация [мкг/мл]Ингибирование бляшкообразования, % Препарат ремантадинIaIб0,578001,090005,0910010,0930720,0100201950,0ц.т.3426100,0н.и.3832200,0н.и.43ц.т.Примечание: МИ 0,5 БОЕ/клетка: продолжительность инкубации 48 ч.ц.т. - цитотоксичность, н.и. - не исследовали, так как концентрации близки или превышают величину ЦД₅₀.

Таблица 6
Изучение антивирусного эффекта производных адамантана в культуре клеток Vero на модели ВПГ-1ПрепаратИД₅₀ИД₉₅ХТИIa
Iб125/125
15,6/15,6500/250
62,5/62,53,68/3,68
12,82/12,82Ремантадин31,2/31,262,5/62,51,64/1,64ацикловир0,45/1200,9/>120 Примечание: МИ 0,1 БОЕ/клетка; продолжительность инкубации 48 ч. ИД₅₀ и ИД₉₅ - концентрация соединения, предотвращающая развитие вирусиндуцированного ЦПЭ соответственно на 50% и 95-100% при 95-100% ЦПЭ в контроле. Химиотерапевтический индекс соединений (ХТИ) вычисляли как отношение ЦД₅₀ к ИД₅₀. “*/*” для эталонного чувствительного к ацикловиру ВПГ-1/S и резистентного к ацикловиру ВПГ-1/R(ВПГ/S/ВПГ/R)

Изобретение относится к группе новых азотсодержащих соединений, в частности к производным адамантана общей формулы

,

где R - Cl (Ia), C₂H₅ (Iб), обладающих противовирусной активностью. Изобретение также относится к способу получения этих соединений. Технический результат – получение новых биологически активных соединений адамантанового ряда, которые можно применять в медицине в качестве антигерпетического препарата. 1 з.п. ф-лы, 6 табл.

1. Гидрохлориды (3-R-1-адамантил)-1-этиламинов, формулы

где R-Cl (Ia), C₂H₅ (Iб),

обладающие противовирусной активностью.