СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИКОЗА Российский патент 2005 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, гинекологии, онкологии, токсикологии, может быть использовано в ветеринарии.

Известен способ определения эндогенной интоксикации по молекулам средней массы (МСМ) (Н.И.Габриэлян, В.И.Липатова. Опыт использования показателя средних молекул крови для диагностики неврологических заболеваний у детей. Журнал "Лабораторное дело", 1984, №3, с.138), который состоит в том, что сыворотку крови больного обрабатывают 10% раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:0,5, центрифугируют, разбавляют дистиллированной водой надосадочную жидкость в 9 раз. Измерение производят на спекрофотометре СФ-46 в УФ-свете при длине волны 254 нм. При этом определяют так называемые средние молекулы с молекулярной массой 500-5000 дальтон, которые считают белковыми токсинами.

Недостатками известного способа являются неполная объективность и точность, поскольку суммарную токсическую активность сыворотки больного составляют не только белковые МСМ, но и низкомолекулярные пептиды, а также небелковые метаболиты и токсины, соотношение которых при интоксикации вариабельно. Кроме того, до конца не изучен вопрос, касающийся молекулярных основ строения и функции МСМ, на определении которых базируется метод исследования. Необходимо также отметить, что уровень МСМ может изменяться с изменением характера белкового метаболизма, не связанного с эндотоксикозом.

Известен также способ определения токсических свойств крови и лимфы с помощью парамеций при экзо- и эндотоксикозах, принятый нами за прототип (Пафомов Г.А., Бурдыга Ф.А., Ширинова М.Н. Экспресс- метод определения токсических свойств крови и лимфы с помощью парамеций при экзо- и эндотоксикозах. Журнал "Советская медицина", 1980, №9, с. 42-44), состоящий в том, что на стекло наносят 0,01 мл испытуемой среды и равный объем взвеси, содержащий от 8 до 10 парамеций. Обе капли тщательно перемешивают. Определяют время гибели половины количества парамеций (LD 50) и гибели всех клеток (LD100). При этом для анализа используют чистую линию Paramecim caudatum, которую выращивают в настое сена, стебля или корок банана в кипяченой воде с температурным режимом 20-23°С, являющимся оптимальным для их жизни и размножения.

Недостатком известного способа является низкая точность в связи с тем, что анализу подвергается одна функция клетки – ее подвижность, которая не является суммарной характеристикой жизни клеток, поскольку неподвижность является не признаком смерти, а лишь парабиоза. Недостатком является также необходимость трехкратного исследования, что подчеркивает невысокую объективность однократного анализа. Следует отметить также невысокий уровень стандартизации парамеций, связанный с нестабильностью используемой питательной среды: сена, стеблей растений и корок банана в кипяченой воде, которые могут иметь экологические или технологические загрязнители и не могут быть использованы в качестве эталона. Кроме того, оптимальный температурный режим жизнедеятельности инфузорий 20-23°С не коррелирует с оптимальной температурой для исследования сыворотки и определения жизнедеятельности ее белков, ориентированных на постоянство температуры в интервале 36-38°С.

Задачей заявляемого изобретения является повышение точности определения эндотоксикоза.

Данная задача решается тем, что согласно способу определения эндотоксикоза, заключающегося в определении жизнеспособности клеток, в качестве клеток используют эритроциты, которые помещают в знакопеременное электрическое поле с величиной тока 4,5-5,0 мA при температуре 36-38°С и при наличии амплитуды колебания от 3 мкм и менее судят о наличии эндотоксикоза.

Преимуществом заявляемого способа является сочетанное исследование клеток и плазмы крови, что повышает точность анализа. Другим преимуществом является возможность анализа на основе минимальных масс/ объемов крови, в частности достаточно 3 мг крови. Это позволяет проводить мониторинг эндотоксикоза по крови больного. Важным аспектом метода является точность, короткое время исследования (10-15 минут), высокая степень персонификации данных, отсутствие необходимости в реактивах, отсутствии сложностей в технологии методики, экономичность.

Способ осуществляют следующим образом. По стандартной методике проводят скарификацию и получают минимальный объем крови в капилляр или на поверхность скарификатора. Кровь разводят в 20-50 раз раствором 0,9% хлорида натрия или забуференным физиологическим раствором (фосфатный буфер). Полученный субстрат помещают между двумя покровными стеклами в термостатную камеру для последующего цитологического микроэлектрофореза. Исследуют под микроскопом с увеличением объектива 8, 20, 40 раз, в течение 10-15 минут проводят цитологический микроэлектрофорез (подвергая клетки воздействию знакопеременного электрического поля с величиной тока 4,5-5,0 мA и частотой смены знака 0,3-1 Гц). На основе показателей амплитуды колебаний эритроцитов от 3 мкм и менее констатируют наличие или степени выраженности эндотоксикоза.

Пример 1. Больной Т., 69 лет. Диагноз: Острая обтурационная толстокишечная непроходимость. Распространенный серозный перитонит.

При исследовании заявленным способом в первые сутки после операции амплитудный тест составил 2 мкм, что свидетельствует о выраженной степени интоксикации. Выраженность эндотоксикоза по другим лабораторным исследованиям составила: молекулы средней массы/индекс распределения - 0,473/4,09, лейкоцитарный индекс интоксикации - 3,93, гематологический показатель интоксикации - 18,7.

Далее проводилась дезинтоксикационная терапия. На седьмые сутки после оперативного лечения общее состояние больного удовлетворительное, амплитудный показатель 5 мкм, молекулы средней массы/индекс распределения - 0,44/3,09, лейкоцитарный индекс интоксикации - 4,0, гематологический показатель интоксикации - 7,4. При этом клиническая картина, амплитудный тест свидетельствуют об отсутствии эндотоксикоза. А другие показатели эндогенной интоксикации еще свидетельствуют об эндотоксикозе. На десятые сутки нахождения пациента в стационаре тесты составили: амплитудный показатель 7 мкм, молекулы средней массы/индекс распределения - 0,24/1,09, лейкоцитарный индекс интоксикации - 1,5, гематологический показатель интоксикации - 6,2. Таким образом, исследуемый параметр более чувствителен, раньше определяет наличие или отсутствие эндогенной интоксикации, чем другие клинические и биохимические показатели. На основании этого было констатировано уменьшение, а в последующем отсутствие эндотоксикоза. Через короткое время больной был осмотрен: эндотоксикоз не выявлен.

Пример 2. Больной М., 45 лет. Диагноз: распространенный гнойный перитонит. Эндогенная интоксикация.

В первые сутки после операции анализы крови: гемоглобин - 70 г/л, эритроциты - 2,78·10/ 12/л, молекулы средней массы - 0,34, индекс распределения - 0,97, лейкоцитарный индекс интоксикации - 3,2, гематологический показатель интоксикации - 19,4.

Амплитудный тест составил 2 мкм.

Проводились санационные релапаротомии, интенсивная терапия. Эндогенная интоксикация уменьшалась, что было доказано амплитудным тестом (5 мкм) и клинической картиной. Другие показатели крови еще свидетельствуют об эндотоксикозе: молекулы средней массы/индекс распределения - 0,54/4,09, лейкоцитарный индекс интоксикации - 5,0, гематологический показатель интоксикации - 9,4. В данном случае наиболее чуствительный - это амплитудный тест. Реакция других показателей эндогенной интоксикации несколько замедленная на одиннадцатые сутки после операции. При дальнейшем лечении показатели крови свидетельствовали об отсутствии эндотоксикоза: амплитудный тест (7 мкм), молекулы средней массы/индекс распределения - 0,24/1,05, лейкоцитарный индекс интоксикации - 2,0, гематологический показатель интоксикации - 4,3. Таким образом, исследуемый параметр определения эндотоксикоза (амплитудный тест) наиболее чувствительный и быстрее реагирующий на изменение внутренней среды организма.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, гинекологии, токсикологии, может быть использовано в ветеринарии. Проводят микроэлектрофорез эритроцитов в знакопеременном электрическом поле с частотой смены знака 0,3–1 Гц. Используют электрическое поле с величиной тока 4,5-5,0 мА. Воздействие проводят при температуре 36-38°С. При наличии амплитуды колебания эритроцитов от 3 мкм и менее определяют наличие эндотоксикоза. Способ позволяет упростить и повысить точность определения эндотоксикоза.

Способ определения эндотоксикоза, включающий проведение микроэлектрофореза эритроцитов в знакопеременном электрическом поле с частотой смены знака 0,3 – 1 Гц, отличающийся тем, что используют электрическое поле с величиной тока 4,5-5,0 мA, воздействие проводят при температуре 36-38°С и при наличии амплитуды колебания эритроцитов от 3 мкм и менее определяют наличие эндотоксикоза.