Способ определения эндотоксикоза Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и касается способа определения эндотокси- коза у больных различного профиля.

Цель изобретения - повышение точности.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят 10%-ный полиакриламидный гель (ПААГ). К 20 мл 30%-ного водного раствора акриламида приливают 15 мл 1,5 М трис-НС буферного раствора с рН 8,8. Добавляют 24,7 мл дистиллированной воды. 0,3 мл 1 %-ного персульфата аммония и 20 мкл тетраметилдиамина (ТЕМЕД). Смесью заливают промежуток между двумя стеклами стеклянных пластин для вертикального элетрофореза и дают заполимеризоваться. Приготовленной смеси достаточно для получения двух полиакриламидных пластин.

Готовят концентрирующий гель. К 2,66 мл 30%-ного акриламида прибавляют 5 мл 0,5 М трис-HCI буферного раствора с рН 6,8, 12.2 мл дистиллированной воды, 100 мкл 1 %-ного персульфата аммония и 10 мкл ТЕ- МЕД. В оставшееся между,стеклами пространство с 10%-ным ПААГ заливают

приготовленную смесь и дают ей заполимеризоваться. Предварительно в это пространство вставляют гребенку После того, как гель заполимеризуется. гребенку вынимают В геле остаются лунки для образцов.

Готовят образцы для анализа К 1 мл сыворотки больного добавляют 0,5 мл 10%- ной ТХУ, выпавший осадок отделяют центрифугированием, а супернатант используют для анализа. Перед анализом к 100 мкл су- пернэтанта добавляют 12 мкл глицерина.

Проведение электрофореза, Две пластины помещают в камеру для вертикального электрофореза. Верхний и нижний сосуды камеры заполняют трис-глициновым буферным раствором (0,025 М) с рН 8,3-8,5 содер- жащим 0,1% додецилсульфата натрия. Подготовленные образцы вносят под буфером в лунки концентрирующего геля в количестве 100 мкл. Стандартные растворы белков вносят аналогичным образом Обычно в качестве стандартов используют готовые смеси, содержащие белки с мол. м 9 кД Электрофорез проводят в приборе для вертикального электрофореза Условия электО

о го о

ч| 00

рофореза: длительность 3-4 ч, напряжение 180 В, сила тока 50-55 мА.

Фиксация, окраска, отмывка геля и анализ результатов. После окончания электрофореза гель освобождают из стеклянных пластин и помещают для фиксации в 15%- ную ТХУ на 2 ч. После фиксации пластины окрашивают в 1 %-ном растворе кумаси R, приготовленном на смеси вода: уксусная кислота (1:1) в течение 18 ч при комнатной температуре или 2-3 ч при 37°С. После окраски пластины отмывают в растворе, содержащем уксусную кислоту, метанол и воду в соотношении 2:7:10, добиваясь бледно-голубого фона. Последняя порция от- мывки должна содержать 10% глицерина. Отмытые пластины высушивают между двумя слоями целофана под прессом. При визуальной оценке результатов определяют наличие на пластинах окрашенных полос полипептидов с мол. м. 9 кД. Просушенные пластины можно денситометрировать. В этом случает по величине пиков, принадлежащих белковым фракциям с мол. м. 9 кД, определяют активность процесса.

Пример 1. Больной К, 70 лет. Поступил с жалобами на боль в области сердца. Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца. При обследовании с помощью предлагаемого способа обнаружена фракция полипептидов с мол. м 9кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, При отсутствии жалоб и удовлетворительном состоянии после проведения лечения больной переведен в общестоматическое от- деление. Однако через 3 сут у больного развился острый трансмуральный инфаркт миокарда.

Пример 2. Больной П, 52 года, Поступил с жалобами на боль в эпигастрии,

похудания. Диагноз при поступлении: рак желудка. До и после операции в сыворотке крови четко определяли наличие фракций полипептидов с мол. м. 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза, нарастала сердечно-легочная недостаточность. Пато- логоанатомический диагноз: правосторонняя бронхопневмония, несостоятельность операционных швов, гнойный медиастенит.

Пример 3. Больной 3, 20 лет. Поступил с жалобами на схваткообразные боли в животе, слабость, тошноту. Диагноз при поступлении: острая кишечная непроходимость. При обследовании по предлагаемому способу обнаружена фракция полипептидов с мол. м. 9 кД, что свидетельствует о наличии эндотоксикоза. Больной оперирован. Диагноз: прободная язва двенадцати- персной кишки, разлитой гнойный перитонит. При выздоровлении содержание полипептидов с мол.м. 9 кД в сыворотке крови снижалось до их полного изчезнове- ния.

Таким образом, наличие в сыворотке крови фракции полипептидов с мол. м. 9 кД с высокой степенью точности свидетельствует об эндотоксикозе и имеет не только диагностическое, но и прогностическое значение.

Формула изобретения

Способ определения эндотоксикоза путем клинико-лабораторного обследования, отличающийся тем. что, с целью повышения точности, дополнительно определяют фракционный состав полипептидов сыворотки крови с помощью электрофореза в полиак- риламидном геле и при наличии фракции с мол. м. 9 кД определяют эндотоксикоз.

Изобретение относится к медицине и касается способов определения эндотоксикоза у больных различного профиля. Целью изобретения является повышение точности определения. Для этого белки сыворотки крови фракционируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. При наличии в составе белков сыворотки крови фракции полипептидов с мол. мас. 9 кД определяют эндотоксикоз. Способ позволяет значительно повысить точность диагностики заболеваний.