СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕЧЕНИЯ СТРОНГИЛЯТОЗОВ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2005 года по МПК A61K31/4184 A61K35/55 A61P33/10 

Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии и иммунологии, и может быть использовано для лечения стронгилятозов животных.

Гельминтозы являются фактором, определяющим возникновение и развитие иммунопатологических реакций со стороны организма хозяина /7, 8/. Специфическая терапия гельминтозов предполагает использование антгельминтных препаратов, которые помимо осуществления основного фармакологического эффекта могут вызывать количественные и функциональные изменения иммунокомпетентных клеток. Иммунологические сдвиги могут быть также спровоцированы сенсибилизацией организма хозяина вследствие дополнительного поступления антигенных субстанций, образующихся в результате изменения метаболизма и гибели паразитов, что снижает эффективность этиотропной терапии /2, 4, 6/. В связи с этим в настоящее время актуальной является разработка комбинированного подхода в лечении паразитарных болезней на основе сочетанного применения иммуноактивных и антгельминтных препаратов с целью устранения или ослабления нежелательных побочных эффектов химиотерапии на иммунную систему организма хозяина, что может снизить вероятность возникновения рецидивов гельминтозов и, следовательно, число необходимых дегельминтизаций.

Для дегельминтизации против стронгилят рекомендовано однократное пероральное применение фенбендазола - 5-фенил-тио-2-бензимидазол карбамат (панакур - гранулированная лекарственная форма фенбендазола, 1 г гранулята содержит 222 мг фенбендазола) в дозе 5 мг/кг для овец.

Недостатками дегельминтизации являются:

- реинвазирование животных в ранние сроки после дегельминтизации вследствие снижения иммунобиологической реактивности животных, в результате сенсибилизации организма хозяина антигенными субстанциями и отрицательного действия фенбендазола на параметры иммунитета /4/;

- терапевтическая доза фенбендазола не обеспечивает полного изгнания гельминтов из организма хозяина /1/.

С целью устранения недостатков дегельминтизации нами разработан и предлагается комбинированный способ лечения стронгилятозов на основе сочетанного применения иммуномодулятора - Т-активина 0,01% (комплекс иммунокоррегирующих пептидов с молекулярной массой от 1500 до 6000 дальтон, полученных экстракцией из тимуса крупного рогатого скота) и антгельминтного средства - фенбендазола.

В качестве прототипа избрана работа Мамыковой О.И. (2000), в которой предпринята попытка комбинированного лечения экспериментального ниппостронгилеза мышей комбинацией иммуномодулятора - Т-активина и антгельминтного средства - фенбендазола. Белым беспородным мышам обоего пола с экспериментальной инвазией Nippostrongylus braziliensis на кишечной стадии развития паразита (8 суток после подкожного заражения инвазионными личинками крысиного штамма) вводили фенбендазол в дозе 15 мг/кг перорально однократно в желудок с помощью пищеводного зонда. Одновременно осуществляли подкожную инъекцию Т-активина в дозе 5 мкг/кг однократно. Группе экспериментальных животных вводили только фенбендазол в дозе 15 мг/кг перорально однократно. Контролем служили зараженные мыши, не получившие препаратов. После окончания лечения при вскрытие животных установлено, что терапевтическая эффективность комбинации препаратов составила 75,3% и не отличалась от эффективности панакура - 74,0%.

Во втором эксперименте белым беспородным мышам массой 18-20 г со спонтанной инвазией N.braziliensis на кишечной стадии развития паразита применяли фенбендазол в дозе 15 мг/кг перорально однократно. Через 2 суток после введения фенбендазола животные получали подкожные инъекции Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг в течение 3 суток подряд. Группа животных получала только фенбендазол дозе 15 мг/кг однократно перорально. Контролем служили зараженные животные, не получавшие препаратов. После окончания лечения при вскрытие животных установлено, что терапевтическая эффективность испытанной комбинации составила 31,0% и была ниже эффективности панакура в 2,4 раза - 74,0%.

Недостатками прототипов являются:

- отсутствие повышения терапевтической эффективности лечения комбинацией Т-активина и фенбендазола при одновременном и однократном применении препаратов;

- снижение терапевтической эффективности комбинированного лечения при последовательном назначении с интервалом 2 суток фенбендазола и Т-активина в течение 3 суток подряд.

Задачей изобретения является получение рациональной схемы применения антгельминтного средства фенбендазола и иммуномудулятора Т-активина, обеспечивающей повышение резистентности животных к реинвазии и терапевтической эффективности лечения.

Сущность изобретения состоит в последовательном применении Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг подкожными инъекциями в течение 3-х суток (дополнительный фактор химиотерапии, повышающий сопротивляемость организма к гельминтам) и фенбендазола в дозе 5 мг/кг. Последняя инъекция иммуномодулятора осуществляется одновременно с введением фенбендазола. Введение в терапию стронгилятозов животных дополнительного лекарственного средства - иммуномодулятора Т-активина по 5 мкг/кг в течение 3-х суток, повышающего сопротивляемость организма животных к гельминтам, устраняет угрозу реинвазирования животных в ранние сроки после лечения и обеспечивает усиление терапевтической эффективности по сравнению с дегельминтизацией, что выгодно отличает комбинированный подход в лечении стронгилятозов от дегельминтизации.

Эффективность предлагаемого способа комбинированного лечения стронгилятозов животных иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Терапевтическую эффективность комбинированного лечения оценивали на модели экспериментального ниппостронгилеза мышей. Дозированное заражение животных осуществляли введением инвазионных личинок крысиного штамма Nippostrongylus braziliensis (п/о Strongylata) в область шейной кожной складки. Доза на мышь составила 100 L₃. Культивирование личинок ниппостронгилюсов проводили по методу Корнвелла в модификации Кротова. Зараженных животных разделили на 4 группы по 8-10 мышей. Мыши первой группы получали фенбендазол в дозе 15 мг/кг однократно перорально. Животные второй группы получали инъекции Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг подкожно в течение 3-х суток. Животные третьей группы (комбинированная терапия) получали инъекции Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг подкожно в течение 3-х суток. Заключительную инъекцию Т-активина осуществляли одновременно с пероральным введением фенбендазола в дозе 15 мг/кг. Антгельминтный препарат вводили в желудок с помощью пищеводного зонда. Контролем служили зараженные мыши, не получившие препаратов. Животных подвергали лечению через 8-9 суток после заражения. Эффективность лечения (ИЭ) оценивали по результатам гельминтологического вскрытия тонкого отдела кишечника, которое проводили через 3-е суток после окончания лечения. За сутки до окончания опыта животных лишали корма, не ограничивая потребление воды. Животных выводили из опыта методом цервикальной дислокации, затем вскрывали брюшную полость срединным разрезом и извлекали кишечники. Тонкий отдел кишечника исследовали компрессорным методом на предмет обнаружения ниппостронгилюсов. Эффективность лечения вычисляли по формуле:

где К - количество гельминтов, обнаруженных у контрольных животных;

Х - количество гельминтов у подопытных животных.

Достоверность результатов оценивали с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при р<0,05.

Результаты эксперимента показали (таблица 1), что сочетанное и последовательное применение Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток и фенбендазола в дозе 15 мг/кг оказало положительное влияние на эффективность элиминации ниппостронгилюсов из организма хозяина. При гельминтологическом вскрытии животных группы комбинированной терапии обнаружено в среднем 2,66±0,88 экз. ниппостронгилюсов (р<0,05 относительно контроля). Контрольный показатель составил 15,4±4,15 экз. Интенсэффективность комбинации Т-активина и фенбендазола составила 82,7%. При гельминтологическом вскрытии животных группы фенбендазола обнаружено в среднем 4,33±1,47 экз. ниппостронгилюсов. Терапевтическая эффективность фенбендазола в дозе 15 мг/кг составила 71,9%. Таким образом, интенсэффективность комбинированной терапии была выше терапевтической эффективности дегельминтизации. При гельминтологическом вскрытии животных группы Т-активина обнаружено в среднем 7,42±1,79 гельминтов. В то время как у животных контрольной группы число таковых составило 15,4±4,15. Протективный эффект Т-активина при введении в течение 3-х суток по 5 мкг/кг подкожно составил 51,8%. Следовательно, ежедневные подкожные инъекции Т-активина по 5 мкг/кг в течение 3-х суток обеспечивали усиление сопротивляемости организма хозяина к гельминтам и приводили к частичной элиминации гельминтов, что подтверждает ранее полученный результат /3/.

Таким образом, установлено, что предварительные инъекции Т-активина в дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток потенцируют антгельминтное действие фенбендазола в дозе 15 мг/кг и повышают эффективность лечения на 10,8%.

Пример 2. Терапевтическую оценку комбинации Т-активина подкожными инъекциями в дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток и фенбендазола в дозе 5 мг/кг при однократном пероральном введении одновременно с последней инъекцией Т-активина проводили в эксперименте на ягнятах 4-5-месячного возраста со спонтанной инвазией стронгилятами желудочно-кишечного тракта. Под наблюдением находились 20 животных. Эксперимент выполнен в период содержания животных на пастбище (август-октябрь). Интенсивность инвазии составила 671,9±179,6-959,9+369,6 яиц стронгилят в 1 г фекалий до применения препаратов. Животные были разделены на 4 группы - контрольную и 3 подопытные. Контролем служили зараженные ягнята, не получившие препаратов. Животные первой подопытной группы были дегельминтизированы фенбендазолом в дозе 5 мг/кг перорально однократно. Вторую группу составили ягнята, получившие подкожные инъекции Т-активина в дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток. Третьей группе проводилась комбинированная терапия, которая включала подкожные инъекции Т-активина в дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток перед пероральным однократным введением фенбендазола в дозе 5 мг/кг. Заключительная инъекция Т-активина осуществлялась одновременно с введением фенбендазола.

Оценка терапевтической эффективности комбинированного лечения и дегельминтизации проводилась в «контрольном» и «критическом» тестах по изменению количества яиц в 1 г фекалий. Гельминтовоскопические исследования проводили методом флотации, используя раствор натриевой силитры (d=1,4). Эффективность лечения рассчитывали общепринятым способом.

Экспериментальные данные обработаны методом математической статистики с вычислением стандартной ошибки средней арифметической и критерия достоверности различий между средними величинами.

Терапевтические эффекты комбинированной терапии и дегельминтизации (ИЭ) представлены в таблице 2.

В «критическом» тесте установлено, что дегельминтизация ягнят фенбендазолом в терапевтической дозе 5 мг/кг не вызывала полной элиминации гельминтов из организма хозяина. Через 7 суток после дегельминтизации в 1 г фекалий животных обнаружено в среднем 63,9±27,3 яиц стронгилят (р<0,05 относительно исходных и контрольных значений). Интенсэффективность дегельминтизации составила 92,6%.

Назначение Т-активина в суточной дозе 5 мкг/кг в течение 3-х суток приводило к усилению антипаразитарной резистентности, о чем свидетельствовало снижение интенсивности инвазии по сравнению с исходным уровнем. При гельминтовоскопическом исследовании обнаружено 463,9±182,4 яиц стронгилят в 1 г фекалий. Протективный эффект Т-активина составил 51,6%, что указывает на возможность иммунорегуляции характера течения инвазии с помощью Т-активина.

Результаты исследований обнаружили высокую эффективность комбинированного лечения в сравнении с дегельминтизацией против стронгилят желудочно-кишечного тракта. Интенсэффективность комбинации Т-активина и фенбендазола достигала 100%, что указывает на изменение выраженности фармакологического эффекта фенбендазола на фоне иммуномодуляции Т-активином.

Надежность терапевтического эффекта комбинированного лечения подтвердили гельминтоовоскопические исследования, проведенные в отдаленные сроки после лечения животных. Через 25 суток после терапии стронгилятозов в пробах фекалий животных, получивших комбинацию Т-активина (подкожные инъекции по 5 мкг/кг в течение 3-х суток) и фенбендазола (5 мг/кг перорально однократно, одновременно с последней инъекцией Т-активина) яиц стронгилят не обнаружено. В то время как дегельминтизация фенбендазолом в дозе 5 мг/кг не устраняла угрозы реинвазирования животных. Интенсэффективность фенбендазола составила 78,4%, хотя были установлены статистически достоверные различия между средними значениями количества яиц стронгилят у животных подопытной и контрольной групп (387,9±119,1 и 1799,9±382,8, соответственно).

Сравнительная оценка эффективности дегельминтизации и комбинированного подхода в лечении стронгилятозов выявила более высокий фармакологический эффект комбинации Т-активина и фенбендазола. Полученный эффект достигается предварительными трехкратными инъекциями Т-активина по 5 мкг/кг, которые повышают сопротивляемость организма и, следовательно, выступают в качестве дополнительного фактора химиотерапии, повышающего эффективность лечения.

Источники информации

1. Демидов Н.В.//Антгельминтики в ветеринарии. - М.: Колос. - 1982. - 367 с.

2. Кашуба Э.А., Крылов В.И., Мананников В.П.//Мед паразитол. и паразитар. болезни. - 1985. - № 2. - С.12-16.

3. Мамыкова О.И.//Тр. Всерос.ин-та гельминтол. - 1997. - Т.33. - C.110-120.

4. Мамыкова О.И. Оценка иммунобиологического статуса животных после дегельминтизации и пути его коррекции. Дисс. канд. вет. наук. 03. 00. 20. М., 1989. - 162 с.

5. Мамыкова О.И.//Тр. Всерос.ин-та гельминтол. - 2000. - Т.36. - С.102-117.

6. Озерецковская Н.Н.//Мед паразитол. и паразитар. болезни. - 1989. - № 6. - С.5-12.

7. Озерецковская Н.Н.//Мед. паразитол. и паразитар. болезни. - 1997. - № 2. - С.3-9.

8. Els. N.T.Meeusen // Vet. Parasitol. - 1999. - V.84. - P.259-273.

Таблица 1.
Эффективность комбинированного лечения ниппостронгилеза мышей, включающего последовательное применение Т-активина в дозе 5 мкг/кг подкожными инъекциями в течение 3-суток и фенбендазола в дозе 15 мг/кг.Группа обследованныхЧисло наблюдений (n)Препараты и их комбинацияДоза мкг/кг, мг/кгЧисло обнаруженных гельминтовИЭ, %Контроль (без лечения)10--15,4±4,15-1 гр8фенбендазол15 мг/кг4,33±1,47^*71,92 гр10Т-активин5 мкг/кг х 37,42±1,7951,83 гр10Т-активин + фенбендазол5 мкг/кг х 3 + 15 мг/кг2,66±0,88^**82,7Примечание: ^* -^{р<0,05 достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы.
** - р<0,05 достоверность различий с соответствующим показателем группы дегельминтизированных животных.}

Таблица 2.
Терапевтическая эффективность комбинации Т-активина и фенбендазола при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта овец.Препарат, доза и режим введенияДо лечения7 суток после лечения ^**ИЭ, %25 суток после лечения ^***ИЭ, %фенбендазол 5 мг/кг863,9±140,463,9±27,3*92,6387,9±119,1^*78,4Т-активин 5 мкг/кг х 3959,9±367,6463,9±182,451,61179,9±647,734,5Т-активин 5 мкг/кг х 3 + фенбендазол 5 мг/кг839,9±64,82-100-100контроль (без лечения)671,9±174,51103,6±71,18-1799,9±382,8-

Примечаие: ^(*) - р<0,05 достоверность различий между средними величинами.

^(**) - «критический« тест.

^(***) - «контрольный «тест.

Представлены средние значения количества яиц стронгилят в 1 г фекалий.

Изобретение относится к ветеринарии и касается лечения стронгилятозов животных. Используют комбинированное введение Т-активина в дозе 5 мкг/кг один раз в сутки и однократное введение фенбендазола в дозе 5 мг/кг. Причем Т-активин вводят в течение 3-х суток, а фенбендазол вводят одновременно с последней инъекцией Т-активина. Режим введения иммуномодулятора и определенная последовательность введения его и антигельминтного средства обеспечивают повышение резистентности животных к повторному заражению. 2 табл.

Способ комбинированного лечения стронгилятозов животных, включающий введение Т-активина в дозе 5 мкг/кг один раз в сутки и однократное введение фенбендазола, отличающийся тем, что Т-активин вводят в течение 3-х суток, а фенбендазол вводят в дозе 5 мг/кг одновременно с последней инъекцией Т-активина.