ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS AGALACTIAE №71 ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИН ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ Российский патент 2005 года по МПК A61K39/108 C12N1/02 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против стрептококковой инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц.

Стрептококковая инфекция распространена повсеместно, наносит значительный экономический ущерб звероводству и представляет опасность здоровью людей. В зверосовхозах ежегодно регистрируется заболевание песцов и лисиц, кроликов, нутрий, хорей.

Патология при стрептококковой инфекции как у людей, так и у животных очень разнообразна - поражение репродуктивной системы, септические процессы в организме, поражение верхних дыхательных путей и легких, поражение молочных желез. У молодняка лисиц и песцов она вызывает септицемию и ранний отход в первые дни жизни.

Возбудитель Streptococcus agalactiae группы В носит антигенную структуру - С-полисахарид, с которым связаны вирулентность и иммуногенность микробной клетки. Поэтому эффективность специфической профилактики определяется наличием С-фактора в антигенном составе входящих в вакцину компонентов.

Известен вакцинный штамм «К-ДЕП» стрептококка серогруппы С, используемый для изготовления инактивированной ГОА - формовакцины против стрептококка нутрий. Патент №2097422 от 27.11.1997 г. Штамм выделен от нутрий, адаптирован к этому виду зверей и используется для изготовления профилактических препаратов против стрептококкоза нутрий. Однако вакуумных штаммов стрептококка, выделенных от песцов и лисиц и применяемых для изготовления вакцины против стрептококкоза песцов и лисиц, не зарегистрировано.

Технический результат изобретения заключается в получении штамма Streptococcus agalactiae №71, положительного по полисахариду-С и позволяющего изготовить вакцину против Streptococcus agalactiae типа В на основе С-фактора патогенности.

Сущность изобретения: штамм бактерий Streptococcus agalactiae №71 выделен от щенка песца и депонирован в коллекции штаммов-возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А.Афанасьева и имеет регистрационный номер 71.

С-положительный штамм Streptococcus agalactiae №71 предназначен в качестве продуцента стрептококкового антигена полисахарида С при изготовлении специфического иммунного препарата при стрептококковой инфекции.

Штамм бактерий Streptococcus agalactiae НИИПЗК №71 характеризуется следующими признаками и свойствами:

Генетические маркеры

- получение группоспецифических антител к полисахариду-С достигается при иммунизации целой микробной клеткой.

Морфологические свойства

- гемолитический стрептококк типа В,

- производственная культура представляет собой неподвижные шаровидные кокки диаметром 0,8-1,0μ, образующие короткие цепочки (по 2-4 клетки),

- положительно окрашиваются по Граму.

Культуральные свойства

- анаэроб, оптимальная температура роста 37-38°С, верхняя и нижняя температурная граница 20 и 42°С,

- на агаре с кровью образует круглые слегка голубоватые колонии, окруженные зоной гемолиза,

- на среде Эндо образует бело-рощовые колонии с зоной гемолиза типа В,

- на средах Левина, Плоскерева образует мутные сероватые колонии с зоной гемолиза,

- на среде определения стрептококков (Medium nutritium pro isolatio streptococcus siccum) дает придонный осадок с диффузным помутнением среды.

- Общепринятые среды для выращивания МПБ, КТ, МПА с 5% дефибрированной крови барана, с 1% глюкозы, рН 7,2-7,6.

Пример №1

- Хорошо сохраняется при условии лиофильного высушивания с сахарозо-желатинозным стабилизатором, а также при быстром замораживании и хранении при 40°.

Ферментативные свойства

Штамм бактерий Streptococcus agalactiae

- не разжижает желатин,

- свертывает молоко,

- свертывает и обеспечивает лакмусовое молоко,

- ферментирует глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, маннит,

- образует муть на сорбите, дульците.

Вирулентные свойства штамма №71

- при внутрибрюшинном введении белым мышам LD/50 составляет 10⁶×0,2 мл.

Антигенные свойства

- штамм содержит С-полисахарид, обладает антигенными свойствами и стимулирует образование в сыворотке крови тино-специфических антител, обладающих защитным действием против стрептококка.

Токсические свойства

- В жидкой и твердой питательной среде вырабатывает эритрогенный экзотоксин, гемолизин лейкоцидин, некротический токсин.

Хранение штамма

Хранят штамм №71

- при температуре 6±2°С в ампулах в лиофидлизированном состоянии более 2 лет,

- в ампулах по 0,5 мл культуры Str. на среде Тодда-Хевита при температуре 70°С более 3 лет.

Контроль за состоянием штамма

- контролирует морфологические, биохимические, культуральные и вирулентные свойства не реже 1 раза в 3 месяца.

- антигенные свойства (С-фактор) проверяют перед производством иммунного препарата.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами

Пример №1

Культуру штамма Streptococcus agalactiae культивируют на бульоне Тодда-Хевита, в течение 24 часов, при 37,5°С. Через 12 часов культуру сеяли на кровяной агар и выращивали 24 часа. По истечении срока инкубации культуру проверяли на чистоту роста в мазках, окрашенных по Граму. Полученную культуру снова сеяли на среду Тодда-Хевита и инкубировали в течение 6 часов. Полученной культурой в логарифмической стадии роста засевали 500 мл флаконы со Средой Тодда-Хевита, инкубировали в течение 24 часов при 37,5°С. После инкубации флаконы с культурой центрифугировали при 1500 об/мин в течение 30 мин. Недосадочную жидкость сливали. В осадок добавляли 0,5% формальдегида, через сутки проверяли на чистоту инактивации, определяли концентрацию микробных клеток по стандарту мутности и доводили его до 2×10⁹ микробных тел в 1 мл. В качестве адъюванта использовали 3% раствор гидрат окиси алюминия в количестве 10% от объема микробной массы. Довели рН до 7,0.

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии. Штамм депонирован в коллекции штаммов-возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных структур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А.Афанасьева и имеет регистрационный номер 71. Штамм относится к стрептококкам группы Б. Штамм культивируют на мясопептонном бульоне Тодда-Хевита, среде Пайка при 37°С в течение 18-20 часов. После контроля выросшей культуры на вирулентность отделенную биомассу подвергают инактивации путем добавления 0,5% формальдегида. Далее добавляют адъювант - гидроокись алюминия и расфасовывают. Таким образом на основе данного штамма получают эффективную вакцину против стрептококкоза пушных зверей.

Штамм бактерий Streptococcus agalactiae НИИПЗК №71 для изготовления вакцин против стрептококкоза пушных зверей.