СПОСОБ СРАВНИТЕЛЬНОЙ ОЦЕНКИ СИЛЫ РЕАКЦИИ ГИСТОНЕСОВМЕСТИМОСТИ У ПТИЦ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к птицеводству.

Известен способ оценки степени гистонесовместимости между отдельными особями, в том числе представителями инбредных линий животных, путем постановки прямого кожно-трансплантационного теста на одном из партнеров по трансплантации и учета продолжительности периода отторжения трансплантатов (Marangu J.P., Nordskog A.W. The allograft reaction as an index of genetic diversity in inbred chickens. // Theor. and appl. genet. - 1974. - Vol.45, N 55. - P. 215-221). Недостаток этого способа состоит в том, что он не позволяет оценить степень гистосовместимости между группами партнеров из неинбредных популяций животных.

За прототип принят способ оценки степени гистонесовместимости между группами особей из разных неинбредных популяций животных путем постановки прямого кожно-трансплантационного теста на одной из групп партнеров по трансплантации и учета продолжительности периода отторжения трансплантатов, а также их сохранности к определенному сроку после трансплантации (Сюзюмова Л.М. О возможности использования реакции на трансплантат при изучении внутри- и межпопуляционной изменчивости млекопитающих. // Докл. АН СССР. - 1967. - Т. 173, вып.4.). Недостаток этого способа состоит в том, что он не позволяет оценить силу реакции гистонесовместимости, то есть силу иммунной реакции на несовместимый трансплантат, у партнеров по трансплантации из разных популяций животных.

Заявленный способ состоит в том, что кожно-трансплантационный тест на гистосовместимость проводят реципрокно между одновозрастными группами партнеров, причем постановку этого теста осуществляют на молодняке неонатального возраста.

Под термином «реципрокно» в контексте фразы «тест на гистосовместимость проводят реципрокно между одновозрастными группами партнеров» подразумевается, что трансплантацию мелких лоскутов донорской кожи между партнерами из этих групп проводят взаимообратно, то есть таким образом, что каждый из них одновременно служит и донором, и реципиентом.

Под термином «неонатальный возраст» обычно подразумевается возраст животных, ограниченный периодом новорожденности. У молодняка птиц этот период составляет приблизительно 5-7 дней с момента рождения, в течение которых происходит постепенное рассасывание остаточного желтка и переход с эмбрионального на обычный тип питания. В этот период, судя по литературным данным, у молодняка птиц происходит также становление функций иммунной системы, причем к 2-недельному возрасту уровень его иммунореактивности становится уже практически таким же, как у взрослых особей, (см., например, Задарновская Г.Д., Дарьенко П.М. Становление механизмов иммунитета у птиц в онтогенезе. //Научн.тр. Ставр. СХИ. - 1973 - Вып.36, т.4. С.86-91).

Технический результат достигается тем, что реципрокное проведение кожно-трансплантационного теста между одновозрастными группами партнеров позволяет сравнить силу реакции гистонесовместимости у партнеров по трансплантации из разных популяций птиц, а его постановка на молодняке неонатального возраста позволяет повысить уровень разности оцениваемого показателя.

Пример конкретного выполнения. Опыт проводили в лаборатории биологических проблем Селекционного центра ВНИТИП. Экспериментальным материалом служил молодняк кур 4 разных пород и линий, а именно итальянской куропатчатой (ИК), серой калифорнийской (СК) и русской белой пород (РБ), а также линии П4 из породы белый леггорн (П4), контрастных по окраске оперения. Все подопытное поголовье цыплят содержали на виварии в одинаковых условиях.

На указанном экспериментальном материале была проведена серия экспериментов по реципрокной трансплантации некоторых донорских органов между одновозрастными группами цыплят разных пород в трех конкретных их сочетаниях. В первом эксперименте осуществляли ортотопную трансплантацию донорского яичника (далее - о. т.д. я.) между цыплятами 35-42-дневного возраста указанных пород. Во втором же и третьем экспериментах между цыплятами тех же пород в область крестца был трансплантирован полнослойный лоскут донорской кожи минимального размера (0,3×0,5 см). Условия последних двух экспериментов отличались только тем, что в одном из них указанный кожно-трансплантационный тест (далее - к. - т. т.) осуществляли на цыплятах 14-дневного возраста, имеющих, как известно, уже вполне компетентную иммунную систему, а в другом - на цыплятах 2-дневного возраста, у которых становление функций иммунной системы еще не завершилось. Схема экспериментов представлена в таблице 1.

Таблица 1Схема экспериментов№сочетания пород№варианта трансплантацииПородаТрансплантируемый органВозраст цыплят при трансплантации, днейреципиентадонораЭксперимент 111КСИКЯичник35-422ИККС21РБИКТо жеТо же2ИКРБ31П4ИК-//--//-2ИКП4Эксперимент 211КСИКЛоскут кожи142ИККС21РБИКТо жеТо же2ИКРБ31П4ИК-//---//-2ИКП4Эксперимент 311КСИКЛоскут кожи22ИККС21РБИКТо жеТо же2ИКРБ31П4ИК--//---//--2ИКП4

После проведения о. т. д. я. у цыплят разных пород их выращивали до наступления возраста половой зрелости. Затем способных к яйцекладке реципиентов искусственно осеменяли спермой петухов, имеющих рецессивную окраску оперения, а собранное с учетом происхождения яйцо инкубировали, и по цвету полученного пуха суточного молодняка определяли происхождение фертильности у этих реципиентов. В возрасте 45-60 недель всех реципиентов убивали путем декапитации и подвергали вскрытию. При этом учитывали следующие показатели:

1. Частота приживления трансплантатов донорского яичника в процентах от общего их числа.

2. Доля реципиентов, имевших фертильность за счет функций трансплантата донорского яичника, в процентах от общего их числа;

3. Доля реципиентов, имевших нефукционирующий трансплантат донорского яичника, в процентах от общего их числа.

После проведения к. - т. т. у цыплят разных пород их выращивали до полного отторжения всех трансплантатов донорской кожи. Состояние трансплантатов контролировали визуально через определенные промежутки времени после трансплантации вплоть до полного их отторжения, причем в течение первых 2 недель - через каждые 2 дня, а затем - через каждую неделю. При этом учитывали следующие показатели:

1. Продолжительность периода отторжения трансплантатов донорской кожи в неделях.

2. Сохранность трансплантатов донорской кожи к определенному сроку после трансплантации в процентах от общего их числа.

Основные результаты реципрокного проведения о. т. д. я. между цыплятами разных пород представлены в таблице 2.

При реципрокном проведении о. т.д. я. между цыплятами разных пород частота приживления трансплантатов в разных сочетаниях пород и вариантах трансплантаций колебалась в пределах от 26,4 до 60,0%, причем в двух из трех сочетаний пород разность между вариантами трансплантаций оказалась достоверной. При этом некоторая часть (от 3,8 до 10,0%) реципиентов разных пород имела фертильность, то есть репродуктивную способность, за счет функций трансплантата донорского яичника, но только в тех вариантах трансплантаций, где частота приживления трансплантатов составляла не менее 46,9%. Преобладающее же большинство реципиентов, имеющих прижившийся трансплантат донорского яичника, оказалось стерильным, т.е. не способными к репродукции по разным причинам, основной из которых являлась дегенерация трансплантата, обусловленная, как известно, его хроническим отторжением.

Результаты этого эксперимента свидетельствуют о том, что искусственная репродукция кур путем о. т. д. я. между цыплятами разных пород возможна даже без применения каких либо приемов преодоления барьеров гистонесовместимости, но только в тех сочетаниях пород и вариантах трансплантаций, где частота приживления трансплантатов достигает достаточно высокого уровня.

Основные результаты реципрокного проведения к. - т. т. между цыплятами разных пород представлены в таблице 3.

При реципрокном проведении к. - т. т. между цыплятами разных пород 14-дневного возраста полное отторжение трансплантатов закончилось уже к концу 2 недели после трансплантации, а достоверной разности по изучаемым показателям между реципрокными вариантами трансплантаций ни в одном из трех сочетаний пород выявить не удалось. Объясняется это, прежде всего, тем, что процесс отторжения трансплантатов у цыплят этого возраста происходил в течение всего лишь 2-3 дней, то есть протекал в острой форме.

При постановке того же к. - т. т. на цыплятах 2-дневного возраста значительная часть трансплантатов, как и в предыдущем эксперименте, была отторгнута уже к концу 2 недели после трансплантации, но у большинства реципиентов процесс отторжения трансплантатов происходил в течение нескольких недель, а у некоторых закончился лишь к 10-14 неделе после трансплантации. Вследствие этого разность по сохранности трансплантатов к определенному сроку после трансплантации между партнерами из разных пород в конкретных их сочетаниях стала намного заметней, причем в двух из трех испытанных сочетаний она оказалась достоверной и могла быть выявлена уже к концу 2 недели после трансплантации.

Результаты 3 эксперимента свидетельствуют о том, что реципрокное проведение к. - т. т. между одновозрастными группами цыплят разных пород неонатального возраста позволяет выявить в некоторых сочетаниях пород достоверную разность по изучаемым показателям между реципрокными вариантами трансплантаций. Но, поскольку степень гистосовместимости партнеров из разных пород кур при разных вариантах трансплантации донорской кожи в каждом конкретном сочетании остается равнозначной, то обнаружение такой разности в некоторых сочетаниях пород указывает на разную силу реакции гистонесовместимости у реципиентов из этих пород.

Принимая во внимание, что при реципрокном проведении о. т.д. я. между цыплятами разных пород в двух из трех испытанных сочетаний также была выявлена достоверная разность по частоте приживления трансплантатов донорского яичника у реципиентов из разных пород, сравнили эти данные с экспериментальными данными по сохранности трансплантатов донорской кожи к концу 2 недели после трансплантации у реципиентов из тех же пород, полученными в последнем эксперименте этого опыта (см. таблицу 4).

Сравнение этих данных показало, что характер изменчивости результатов трансплантации указанных органов между цыплятами разных пород во всех испытанных сочетаниях аналогичен. Это свидетельствует о том, что предлагаемый способ может быть использован для отбора наиболее перспективных сочетаний пород и вариантов трансплантаций в процессе искусственной репродукции птиц путем о. т. д. я. между молодняком разных пород.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к птицеводству. Способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц включает проведение трансплантации мелких лоскутов донорской кожи и учет продолжительности периода отторжения трансплантатов, а также их сохранности к определенному сроку после трансплантации, причем указанную трансплантацию донорской кожи проводят реципрокно между одновозрастными группами партнеров, причем проведение такой трансплантации осуществляют на молодняке неонатального возраста. 4 табл.

Способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц, включающий проведение трансплантации мелких лоскутов донорской кожи и учет продолжительности периода отторжения трансплантатов, а также их сохранности к определенному сроку после трансплантации, отличающийся тем, что указанную трансплантацию донорской кожи проводят реципрокно между одновозрастными группами партнеров, причем проведение такой трансплантации осуществляют на молодняке неонатального возраста.