СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, к лабораторным способам выявления степени скрытого повреждения эритроцитов и изучения физико-химического состояния консервированных эритроцитов.

Наиболее известным способом изучения состояния мембраны эритроцитов является способ осмотической резистентности эритроцитов в средах с нарастающей гипотоничностью (Физиология человека /Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, том 2, стр.425). Измеряют степень гемолиза (фотометрическим методом) в зависимости от концентрации раствора хлористого натрия. У здорового человека 50% эритроцитов гемолизируются при концентрации хлористого натрия 4,3 г/л. При нарушениях структуры мембраны, обусловленных той или иной патологией организма, происходит отклонение от этого значения.

Недостатками способа являются его длительность и сложность, т.к. необходимо брать 10-20 проб и следить за их гемолизом, который может длиться до нескольких суток.

Другой известный способ определения степени повреждения эритроцитов в качестве повреждающего агента вместо хлористого натрия используют мочевину (А.С. №1220636 МПК G 01 N 33/49, 1986).

Указанный способ имеет те же самые недостатки, что и вышеуказанный.

Известен способ определения степени повреждения мембран эритроцитов, включающий центрифугирование исследуемой суспензии эритроцитов и определение концентрации гемоглобина в надосадочной жидкости (А.С. №1663549 МПК G 01 N 33/49, 1991).

В контрольном (нативном) образце суспензии эритроцитов определяют распределение клеток по объему. Осадок, полученный после центрифугирования, ресуспендируют в плазме и определяют в нем количество клеток, распределение которых идентично распределению клеток в контрольном образце. Степень повреждения в процентном выражении определяют как разность по отношению к образцу полностью лизированных клеток при - 196°С (повреждающий агент). Недостатками способа является его длительность и визуальный подсчет клеток.

Задачей изобретения является сокращение длительности способа и исключение визуального подсчета клеток.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что анализируемую пробу крови подвергают воздействию калиброванного пробойного импульсного электрического тока напряженностью 1800 В/см² и длительностью импульса 5-6 мс и при увеличении скорости гемолиза по сравнению с нормой выявляют повреждение мембран эритроцитов.

В качестве повреждающего агента используют калиброванный электрический импульс, вызывающий электропорацию эритроцитов, с напряженностью 1800 В/см² и длительностью импульса 5-6 мс. Пробойному калиброванному электрическому воздействию подвергают как контрольную суспензию (нативную), так и исследуемую (повергшуюся действию физико-химических факторов или измененную в результате заболевания) суспензию.

При проведении исследования в стандартных условиях, в частности при комнатной температуре (20-25°С), нет необходимости каждый раз определять электропорацию контрольной суспензии, можно сразу определять электропорацию исследуемой суспензии.

Оценку степени повреждения эритроцитов проводят на основе вычисления скорости уменьшения числа эритроцитов

Пример 1.

В качестве иллюстрации нами выбрана модель воздействия диэтилового эфира (концентрация эфира 0,1 мл эфира на 1 мл суспензии).

На фиг.1 представлены кинетические кривые уменьшения численности эритроцитов в результате гемолиза после воздействия калиброванного импульсного электрического поля.

Как следует из анализа этих кривых, в случае суспензии крови, контактировавшей с эфиром гемолиз происходит существенно быстрее.

На фиг.2 представлена диаграмма относительной скорости уменьшения численности эритроцитов в результате калиброванного электрического воздействия. В каждой серии из четырех опытов столбец слева - скорость гемолиза в контрольной суспензии (без добавления эфира). Данная скорость принята за единицу. Справа - скорость гемолиза в суспензии с эфиром относительно этой скорости.

Пример 2.

Больной В.В., 40 лет, наследственный сфероцитоз. Пробу крови 1 мл подвергают калиброванному воздействию. Анализируются кривые для суспензии крови больного и здорового человека (норма). В норме в результате гемолиза погибло 11% эритроцитов, в пробе крови больного 42%, что позволило выявить повреждение мембран эритроцитов у данного больного.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам в гематологии. Для выявления повреждения мембран эритроцитов анализируемую пробу подвергают воздействию калиброванного импульсного электрического поля с пробойной напряженностью 1800 В/см и длительностью импульса 5-6 мс и при увеличении скорости гемолиза по сравнению с нормой выявляют повреждение мембран эритроцитов. Способ по изобретению позволяет выявить повреждение мембран эритроцитов в короткие сроки. 2 ил.

Способ выявления повреждения мембран эритроцитов путем воздействия на исследуемую пробу крови физического фактора, отличающийся тем, что анализируемую пробу крови подвергают воздействию калиброванного импульсного электрического поля с пробойной напряженностью 1800 В/см и длительностью импульса 5-6 мс и при увеличении скорости гемолиза по сравнению с нормой выявляют повреждение мембран эритроцитов.