СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПАТОЛОГИИ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине и может использоваться для оценки реактивности организма при лечении патологии гепатобилиарной системы.

Известны способы оценки реактивности организма. К числу часто используемых следует отнести тест на реактивность, принцип которого состоит в комплексной оценке основных витальных показателей (частота пульса, дыхания и др.) до и после выполнения физической нагрузки с последующим выявлением взаимосвязи со степенью развивавшейся гипоксии (1). Нередко используются методы оценки реактивности, основанные на анализе основных лабораторных и клинических показателей пациента (2, 3). Однако большинство методов оценки реактивности основаны на субъективном анализе представлений о том или ином звене адаптационных и компенсаторных механизмов организма. Часто для оценки реактивности организма используются громоздкие, сложные подсчеты (схемы), подчас требующие проведения дополнительных дорогостоящих методов исследования, что возможно лишь в специализированных учреждениях.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ оценки реактивности организма, основанный на качественном и количественном анализе гликогена в клетках печени (4). Несмотря на достаточную информативность в вышеназванном способе отсутствует раздельная зональная характеристика гепатоцитов с содержанием гликогена, что является существенным моментом. Согласно литературным данным зональная гетерогенность гепатоцитов есть динамическая функциональная и морфологическая структура как в норме, так и в патологии (5). Гепатоциты, прилегающие к портальному тракту, принадлежат к печеночным клеткам 1-ой зоны, прилегающие к центральной вене, принадлежат к печеночным клеткам 3-ей зоны, а, занимающие промежуточное положение между 1-ой и 3-ей, - ко 2-ой зоне. Данное обстоятельство связано с выполнением клетками разных зон принципиально различных функций, что несомненно отражается на характере распределения гликогена в цитоплазме печеночных клеток. При этом для оценки уровня реактивности имеет значение как процентное соотношение печеночных клеток с различным содержанием гликогена, так и равномерность распределения его в клетках. Так, высокое содержание гликогена в печеночных клетках и равномерное распределение его свидетельствуют о высокой функциональной активности без каких-либо элементов напряженности и соответствуют реакции повышенной активации высоких уровней реактивности, умеренно-высокое с равномерным распределением соответствует реакции спокойной активации высоких уровней реактивности, умеренно-высокое с неравномерным распределением соответствует реакции спокойной активации низких уровней, умеренное содержание с равномерным распределением соответствует реакции тренировки высоких уровней, умеренное содержание с неравномерным распределением соответствует реакции тренировки низких уровней и т.д. (5). Снижение содержания гликогена является признаком снижения адаптационных возможностей и проявляется дисрегуляцией реактивных приспособительных реакций (4). Изменение реактивности организма нередко сопровождается развитием ряда иммунодефицитных состояний, провоцирует целый комплекс гиперергических и неблагоприятных реакций. В этой связи, возникает целесообразность в верификации положительного влияния проводимого лечения на реактивность организма больных хроническим описторхозом, что расценивается как прогностически благоприятный объективный признак.

В клинической практике с целью дегельминтизации сегодня широко используются как препараты растительного происхождения - экорсол (6), так и безмедикаментозные средства (применение вторичных препаратов-аппликаторов, способных формировать информационно-волновой аналог исходного препарата с включением частот КВЧ-диапазона). В экспериментах с моделями токсического гепатита доказано положительное влияние электромагнитного излучения КВЧ-диапазона на морфофункциональное состояние печени (7, 8).

Задачей, поставленной предлагаемым изобретением, является повышение точности и расширение арсенала способов оценки реактивности организма.

Поставленную задачу решают новым способом оценки реактивности организма, заключающимся в определении количественного содержания гликогена в гепатоцитах, причем определяют раздельное содержание гликогена в гепатоцитах первой, второй и третьей зоны и рассчитывают индекс реактивности ИР по формуле:

где А - % гепатоцитов с высоким уровнем гликогена 2 и 3 зоны,

В - % гепатоцитов с высоким уровнем гликогена 1 зоны, и при значении ИР, равном 0,37 и ниже, определяют реакцию стресса-тренировки, а при значении ИР более 0,7 определяют реакцию активации.

Способ осуществлялся следующим образом.

У подопытных животных после лечения патологии гепатобилиарной системы производят забор фрагментов печени и ее морфологическое исследование. Фрагменты печени после забора тотчас фиксировались в 12% нейтральном формалине. Препараты готовились по стандартной методике, заливались в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкн окрашивались ШИК-реакцией по Мак Манусу (9).

Оценивалось количественное содержание гликогена в гепатоцитах 1 и 2, 3 зон. С использованием функции "волшебная палочка" в PhotoShop подсчитывалось содержание гликогена, при этом гепатоциты с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы принимались нами как печеночные клетки с высоким содержанием гликогена (соответствует реакции повышенной активации), от 50 до 75% - с умеренным (соответствует реакции тренировки), менее 50% - с низким (соответствует реакции стресса). Для унификации исследования в пределах каждого микропрепарата оценка проводилась в десяти полях каждого третьего поля зрения. Пять групп фрагментов печени, включая 2 контрольные, прошли "слепое" исследование. Морфологическая оценка проводилась на установке, включающей световой микроскоп "Zeiss Jena", цифровую фотокамеру Epson-200 с использованием программы PhotoShop 6,0. Изображение поля зрения вводилось в компьютер с помощью видеокамеры. Конечное линейное и оптическое увеличение после переноса изображения с помощью видеокамеры в компьютер составило - ×800, 1600. Определяли процент гепатоцитов с высоким уровнем гликогена 1, 2, 3 зон и рассчитывали индекс ИР по формуле:

где А - % гепатоцитов с высоким уровнем гликогена 2 и 3 зоны,

В - % гепатоцитов с высоким уровнем гликогена 1 зоны, и при значении ИР, равном 0,37 и ниже, определяли реакцию стресса-тренировки, а при значении ИР более 0,7 определяли реакцию активации.

Предлагаемые критерии подобраны на основании анализа данных экспериментальных исследований, для проведения которых было взято 5 групп наблюдения. Проведен комплексный сравнительный морфологический анализ ткани печени золотистых хомячков (Crecetus padus), зараженных описторхозом. Заражение проводилось путем кормления хомячков в течение 7 дней рыбой - ельцами (Leuciscus idus), выловленной в реке Томь и исследованной микроскопически на наличие метациркариев. После контрольного вскрытия двух хомячков через 30-35 дней после заражения обнаружено 90 и 95 марит (доказано заражение).

Все зараженные хомячки, в зависимости от получаемого лечения, были разделены на 5 групп. В эксперименте использовано по 20 фрагментов печени из каждой группы.

Нами были просмотрены биоптаты двух групп контроля. Группа контроля №1 была представлена фрагментами печени здоровых (не зараженных, "стерильных" лабораторных животных) хомяков. Группа контроля № 2 - печень хомячков, зараженных описторхозом, но не получавших лечение (забор материала на 35-40 сутки после заражения). Опытные группы (основные): группа № 3 - ткань печени после лечения экорсолом (1,0 мл 1% водного раствора, вводимого через металлический зонд 3 раза в день в течение 7 дней), группа № 4 - ткань печени после лечения безлекарственным средством - информационно-волновым аналогом описторхиса ("О") и группа № 5 - ткань печени после лечения информационно-волновым аналогом экорсола ("Э"). Безмедикаментозные средства для дегельминтизации готовят по утвержденной методике (7) и используют для лечения зараженных хомячков, помещая их (информационно-волновые аналоги) в емкость с питьевой водой на 7 дней.

Фрагменты печени после забора тотчас фиксировались в 12% нейтральном формалине. Препараты готовились по стандартной методике, заливались в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкн окрашивались ШИК-реакцией по Мак Манусу (9).

Оценивалось количественное содержание гликогена в гепатоцитах 1 и 2, 3 зон. С использованием функции "волшебная палочка" в PhotoShop подсчитывалось содержание гликогена, при этом гепатоциты с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы принимались нами как печеночные клетки с высоким содержанием гликогена (соответствует реакции повышенной активации), от 50 до 75% - с умеренным (соответствует реакции тренировки), менее 50% - с низким (соответствует реакции стресса). Для унификации исследования в пределах каждого микропрепарата оценка проводилась в десяти полях каждого третьего поля зрения. Пять групп фрагментов печени, включая 2 контрольные, прошли "слепое" исследование. Морфологическая оценка проводилась на установке, включающей световой микроскоп "Zeiss Jena", цифровую фотокамеру Epson-200 с использованием программы PhotoShop 6,0. Изображение поля зрения вводилось в компьютер с помощью видеокамеры. Конечное линейное и оптическое увеличение после переноса изображения с помощью видеокамеры в компьютер составило - ×800, 1600.

На основании анализа данных проведенных исследований были сделаны следующие выводы.

Проведение терапии с использованием антигельминтного препарата растительного происхождения экорсола, информационно-волновых аналогов описторхиса и экорсола выявило следующее (см. табл.1).

В зависимости от вида терапии хронического описторхоза процент гепатоцитов первой зоны (В) с высоким содержанием гликогена достоверно не отличался между сравниваемыми 3, 4 и 5 группами, равно как и содержание гликогена (А) во 2, 3 зонах (р<0,05). Хотя изучаемый показатель во 2, 3 зонах во всех изучаемых группах был фактически ниже.

Индекс реактивности по результатам просмотра препаратов печени здоровых хомяков (контрольная группа №1) составил 0,72, тогда как у зараженных описторхозом, но не пролеченных (контрольная группа №2) хомяков - 0,37, что является достоверно различным (р<0,005) и свидетельствует о негативном влиянии описторхозной инвазии на уровень реактивности организма окончательного хозяина. Во всех основных группах (№ 3, 4, 5) после лечения экорсолом, информационно-волновым аналогом описторхиса и информационно-волновым аналогом экорсола индекс реактивности составил 0,75; 0,73; 0,74, соответственно. Показатель реактивности в группах пролеченных не отличался от индекса реактивности "здоровых" хомяков (р>0,05), что свидетельствует о том, что терапия предложенными способами благоприятно влияет на состояние нормальной физиологической реактивности организма в целом.

Отсутствие достоверных различий между показателями индекса реактивности, предложенного нами, в группах "здоровых" и пролеченных хомяков позволяет сделать вывод о том, что противопаразитарное (противоописторхозное) лечение, в том числе безлекарственными средствами (информационно-волновыми аналогами), оказывает благоприятное влияние на показатели реактивности организма окончательного хозяина, что способствует сохранению полноценного морфофункционального состояния печени и предупреждает ее перенапряжение. Это особенно важно, так как от сохранности морфофункционального состояния печени зависит сохранность ее функций, в том числе детоксицирующей.

Предложенный "индекс реактивности" по уровню гликогена в печеночных клетках практически совпадает с "индексом реактивности" по Гаркави-Квакиной, который рассчитывается по отношению лимфоцитов к сегментоядерным нейтрофиллам в крови (<0,3 - реакция стресса; 0,31-0,5 - реакция тренировки; 0,51-0,7 - реакция спокойной активации; >0,7 - реакция повышенной активации), что вероятно позволяет предполагать высокую степень корреляции между этими показателями.

Таким образом предлагаемый способ позволяет оценить реактивность организма до и после проведенного лечения. В ходе проведенного исследования нами было установлено, что терапия хронического описторхоза с использованием информационно-волнового аналога описторхиса, информационно-волнового аналога экорсола и растительного противоописторхозного препарата экорсола сопровождается достоверно положительной динамикой показателя реактивности, что свидетельствует о благоприятном влиянии проводимого лечения как на морфофункциональное состояние печени, так и на реактивность организма в целом.

Таким образом, полученные результаты позволяют судить о влиянии проводимой терапии, в том числе безлекарственной (информационно-волновой аналог), на реактивность организма, переводя организм из состояния стресса и тренировки в состояние повышенной активации, что соответствует физиологической норме с высокой функциональной активностью без каких-либо элементов напряженности. Выявленная в процессе проведенных исследований корелляционная связь между показателями реактивности предложенного нами "индекса реактивности", рассчитываемого по отношению уровня гликогена в печеночных клетках разных зон, и "индексом реактивности", рассчитываемого по отношению лимфоцитов к сегментоядерным нейтрофилам (Гаркави-Квакиной), позволяет ориентировать клиницистов на возможность использования известного и доступного "индекса реактивности" Гаркави-Квакиной для оценки не только реактивности организма в целом, но и для прогнозирования эффективности проводимых лечебных мероприятий при патологии гепатобилиарной системы вообще и при лечении описторхоза в частности.

Таблица №1.
Содержание гликогена в гепатоцитах 1 и 2, 3 зон в исследуемых группах (в %, М±m)группаГепатоциты 1 зоны с высоким содержанием гликогенаГепатоциты 2, 3 зон с высоким содержанием гликогена"индекс реактивности" 2, 3 зоны / 1 зона1 группа (здоровые)89,9±965,0±6,70,722 группа (зараженные, не леченные)40,0±5,3*15±6,9*0,373 группа (леченные Экорсолом)77,0±8,5*58,0±6,0*0,754 группа (леченные "О")75,0±8,1*55,0±5,9*0,735 группа (леченные "Э")71,0±7,9*53,0±6,3*0,74Примечание: * - при р<0,05; при отсутствии р - результат недостоверен.
Сравниваемые группы: 2 группа с 1 группой; 3, 4 и 5 группы пролеченных со 2 группой (не леченных).

Список литературы

1. А.Ш.Зайчик, Л.П.Чуриков. "Основы общей патологии". ЭЛСБИ-СПБ, 2002, 618 с.

2. Л.Х.Гаркави, Е.Б.Квакина, М.А.Уколова. Роль адаптационных реакций в патологических процессах и простые критерии этих реакций у людей. // Регуляция энергетического обмена и устойчивость организма. Пущино, 1975, с.172-190.

3. Л.Х.Гаркави, Е.Б.Квакина, М.А.Уколова, Ф.М.Захарюта и др. Повышение сопротивляемости организма с помощью адаптационных реакций тренировки и активации на разных уровнях реактивности организма (активационная терапия). Методические рекомендации. Ростов н/Д, 1983, 34 с.

4. Л.Х.Гаркави, Е.В.Квакина, Т.С.Кузьменко. Антистрессорные реакции и активационная терапия. М., "ИМЕДИС", 1998, 656 с.

5. А.С.Логинов, Л.И.Аругин. "Клиническая морфология печени". М., "Медицина", 1985, 240 с.

6. Мозжелин М.Е, Кадуков Д.В. Экорсол. Томск, ООО "Гарт", 2001, 20 с.

7. Использование терапии фоновым резонансным излучением для купирования болевого синдрома при нейровертеброгенных заболеваниях. Методические рекомендации. М., 1994, 24 с.

8. Рудин М.В., Рыжов А.И. Белоусов Е.В., Кожемякин А.М. Способ профилактики повреждений печени, вызываемых эфирным наркозом в эксперименте. Патент № 2153904, Москва, 2000.

9. Э.Пирс "Гистохимия". Изд-во иностранной литературы. М., 1962, 964 с.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для оценки реактивности организма при лечении патологии гепатобилиарной системы. Сущность способа: определяют раздельное содержание гликогена в гепатоцитах, прилежащих к портальному тракту, прилегающих к центральной вене и занимающих промежуточное положение между указанными зонами. Рассчитывают индекс реактивности ИР=А/В, где А - % гепатоцитов с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы, прилегающих к центральной вене и гепатоцитов, занимающих промежуточное положение между зонами, В - % гепатоцитов с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы, прилежащих к портальному тракту. При значении ИР, равном 0,37 и ниже, определяют реакцию стресса-тренировки, а при значении ИР более 0,7 определяют реакцию активации. Использование способа позволяет повысить точность оценки реактивности организма при лечении патологии гепатобилиарной системы. 1 табл.

Способ оценки реактивности организма при лечении патологии гепатобилиарной системы в эксперименте, заключающийся в определении количественного содержания гликогена в гепатоцитах, отличающийся тем, что определяют раздельное содержание гликогена в гепатоцитах, прилежащих к портальному тракту, прилегающих к центральной вене и занимающих промежуточное положение между указанными зонами, и рассчитывают индекс реактивности ИР по формуле

где А - % гепатоцитов с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы, прилегающих к центральной вене, и гепатоцитов, занимающих промежуточное положение между зонами;

В - % гепатоцитов с содержанием субстрата более 75% от площади цитоплазмы, прилежащих к портальному тракту,

и при значении ИР, равном 0,37 и ниже, определяют реакцию стресса-тренировки, а при значении ИР более 0,7 определяют реакцию активации.