СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕРТОЙ ФОРМЫ ВРОЖДЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ С ДЕФЕКТОМ 11БЕТА-ГИДРОКСИЛАЗЫ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/74 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН) с дефектом 11β-гидроксилазы при вирильных синдромах, аденомах коры надпочечников и у больных с артериальной гипертензией неясного генеза.

Важнейшим биохимическим маркером 11β-гидроксилазной недостаточности является 11-дезоксикортизол. Повышение содержания в крови 11-дезоксикортизола (S) и 11-дезоксикортикостерона (DOC) считается характерным лабораторным признаком недостаточности 11β-гидроксилазы. Диагноз может быть заподозрен при повышении концентраций гормонов после стимуляции адренокортикотропным гормоном (АКТГ) в 3 и более раз над 95-м перцентилем нормы для соответствующего возраста (White P.С. Steroid 11β-hydroxylase deficiency and related disorders // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. - 2001. - Vol.30, №1. - P.61-79.). Наиболее распространенными в нашей стране являются пробы с использованием препарата «Синактен-депо», который является синтетическим аналогом АКТГ с длительностью действия 36 часов (пик через 9 часов после введения).

Ряд авторов обращает внимание на то, что у многих пациентов с дефектом 11β-гидроксилазы повышен уровень 17-ОНП, что вполне объяснимо, так как данный стероид является субстратом для синтеза S. Однако это может привести к ошибочной диагностике дефекта 21-гидроксилазы, что повлечет за собой неправильный выбор тактики лечения.

Задачей изобретения является расширение арсенала средств диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы, включающем проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола (S), согласно изобретению методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Для определения критериев диагностики были обследованы 26 больных со случайно выявленными опухолями коры надпочечников (инциденталомами), 45 женщин с вирильным синдромом и 19 больных с гипоталамическим синдромом, у которых были установлены нарушения надпочечникового стероидогенеза, характерные для дефекта 11β-гидроксилазы, и 30 здоровых людей, которые составили контрольную группу.

На основании изучения данных, полученных при количественном определении в крови кортикостероидов методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при стимуляции кортикотропином пациентов исследуемых групп, были установлены диагностические критерии стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием пакета STATISTICA for WINDOWS (версия 5.11). Количественные показатели представлялись в виде Me (LQ-UQ), где Ме-медиана, LQ-нижний квартиль, UQ-верхний квартиль. В случае распределения, близкого к нормальному, данные представлялись в виде средних значений (М)±стандартное отклонение (STD). Сравнение средних значений количественных показателей осуществлялось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Статистически значимым считался критерий достоверности р<0,05.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

Исследования проводят до пробы и на пробе через 9 часов после введения 1 мг «Синактен-депо». Для анализа берут 1 мл сыворотки крови. Хроматографирование проводят, например, при следующих условиях: хроматограф жидкостный Чехия, насос НРР 4001, УФ детектор LCD 2563 (λ=254 нм), колонка Kromasil С-18 150 мм, 5 мкм, изократический режим элюирования, подвижная фаза 30% и 45% ацетонитрил-вода CH3CN-H2O (1 часть - 26:74 v/v, 2 часть - 41:59 v/v), скорость элюента 0,3 мл/мин. Для улучшения разделения стероидов, имеющих близкие времена удерживания, применяют β-циклодекстрин. Предел обнаружения 1-2 нг/мл.

Определяют уровни 11-дезоксикортизола, кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 на пробе диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

1. Пациентка Н. 32 г., Вирильный синдром, мышечная слабость, акне, гиперандрогения.

Традиционные методы диагностики:

Проба с синактеном: кортизол - 315-600 нмоль/л, 17-ОНП - 0,9-3,5 нг/мл, андростендион - 1,1-0,9 нг/мл, ДЭА - 15 нг/мл. На основании традиционных методов исключен дефект 21-гидроксилазы.

Данные ВЭЖХ кортикостероидов крови:№НаименованиеФонПроба с синактеномЕд. измерения1Кортизол (F)73,6133,6нг/мл2Кортизон (Е)15,432,1нг/мл3Кортикостерон (В)2,411,9нг/мл411-дезоксикортикостерон (DOC)11нг/мл511-дезоксикортизол (S)11,215,7нг/мл6F/E4,74,1 7F/S6,68,5 

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола на пробе с синактеном до 15,7 нг/мл, повышение кортикостерона до 11,9 нг/мл и индексы F/E и F/S свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

2. Пациент Ш. 18 л. 167 см, 46 кг. Слабость, артериальная гипертензия, задержка полового развития.

№НаименованиеФонПроба с синактеномЕд. измерения.1Кортизол (F)24,2160,6нг/мл2Кортизон (Е)14,240нг/мл3Кортикостерон (В)115,4нг/мл411-дезоксикортикостерон (DOC)3,82нг/мл511-дезоксикортизол (S)6,323,5нг/мл6F/E1,74,0 7F/S3,86,8 817-ОНП1,03,0нг/мл9Кортизол2581000Н моль/л10Андростендион2,42,5нг/мл11Тестостерон12 Н моль/л12ДЭА1220Мкг/мл13ЛГ1,7 МЕ/л14ФСГ1,1 МЕ/л

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

3. Пациентка Д. 47 лет. - инциденталома 1,3×1,4 см, артериальная гипертензия с 20 лет, ожирение (ИМТ=53,0), синдром поликистозных яичников.

№НаименованиеФонПроба с синактеномЕд. измерения1Кортизол (F)40,7187,2нг/мл2Кортизон (Е)10,538,2нг/мл3Кортикостерон (В)29,8нг/мл411-дезоксикортикостерон (DOC)11нг/мл511-дезоксикортизол (S)8,428,7нг/мл6F/E3,84,9 7F/S4,86,5 817-ОНП0,52,5нг/мл9Кортизол290872Н моль/л10Андростендион3,73,3нг/мл11ДЭА-сульфат2,4 Мкг/мл

Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.

Заявленный способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы дает дополнительные критерии диагностики, расширяя тем самым арсенал средств.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и лабораторной диагностике и может быть использовано для диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН) с дефектом 11β-гидроксилазы при вирильных синдромах, аденомах коры надпочечников и у больных с артериальной гипертензией неясного генеза. Для этого проводят пробу с адренокортикотропным гормоном и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии определяют в крови уровни 11-дезоксикортизола (S), кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы. Способ обеспечивает дополнительные критерии диагностики.

Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы, включающий проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола, отличающийся тем, что методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона и к уровню 11-дезоксикортизола и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении уровня кортизола к уровню кортизона менее 5 и соотношении уровня кортизола к уровню 11-дезоксикортизола менее 16 диагностируют стертую форму врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы.