3-МЕТИЛ-2-ПИРИДИЛАМИД МАЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРЯМОЕ АНТИКОАГУЛЯНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ Российский патент 2007 года по МПК A61K31/44 A61P7/02 C07D213/75 

Изобретение относится к применению биологически активных соединений, а, именно, 3-метил-2-пиридиламида малеиновой кислоты (I) формулы

в качестве средства, обладающего прямым антикоагулянтным действием, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве антикоагулянта прямого действия.

Известен 2-пиридиламид малеиновой кислоты формулы

полученный и описанный нами ранее [Колотова Н.В., Козьминых В.О., Долженко А.В., Козьминых Е.Н., Котегов В.П., Година А.Т., Сыропятов Б.Я., Новоселова Г.Н., Хим.-фарм. журнал, Т.35, №3, с.26-30 (2001); Долженко А.В., Колотова Н.В., Козьминых В.О., Сыропятов Б.Я., Хим.-фарм. журнал, Т.36, №3, С.17-19 (2001)].

Соединение II проявляет слабое гипертензивное действие, данных о его антикоагулянтной активности в литературе не имеется.

Известен и применяется в лечебной практике только один антикоагулянт прямого действия - гепарин [Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей), М.: "Издательство Медицина", Т.2, С.73, (1985)], который взят нами в качестве эталона сравнения антикоагулянтной активности соединения I.

Целью предлагаемого изобретения является поиск среди известных гетериламидов малеиновой кислоты соединений с прямой антикоагулянтной активностью. Поставленная цель достигается применением 3-метил-2-пиридиламида малеиновой (I) кислоты [Долженко А.В., Сыропятов Б.Я., Козьминых В.О., Колотова Н.В., Захматов А.В., Бородин А.Ю. Хим.-фарм. журнал, Т.37, №8, С.12-13 (2003)], который получают ацилированием 2-амино-3-метилпиридина малеиновым ангидридом.

Методика получения 3-метил-2-пиридиламида малеиновой кислоты. К раствору 1,08 г (0,01 моль) 2-амино-3-метилпиридина в 30 мл диоксана добавляют при перемешивании 0,98 г (0,01 моль) малеинового ангидрида в 40 мл диоксана при комнатной температуре. Через 1 ч выпавший осадок отфильтровывают, высушивают и кристаллизуют из этанола. Выход 1,65 г (80%). Т_пл.=136-137°С.

Соединение (I) представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, этаноле, ДМСО, ДМФА. В спектре ЯМР ¹Н ("РЯ-2310" (60 МГц) в ДМСО-d₆, внутренний стандарт - ГМДС) соединения I имеются: синглет трех протонов метильной группы при 2,18 м.д., синглет двух протонов группы СН=СН при 6,22 м.д., мультиплет трех протонов системы пиридинового кольца и сигнал протона амидной группы CONH в области 6,58-8,05 м.д. и уширенный сигнал одного протона карбоксильной группы в области 13,58 м.д.

Соединение I исследовали на наличие прямой антикоагулянтной активности. Опыты по изучению антикоагулянтного действия проводили с помощью коагулометра "Минилаб 701". Для исследования использовали цитратную (3,8%) кровь (9:1) собаки. Влияние соединения I изучали в концентрациях 1 мг/мл, 0,5 мг/мл и 0,25 мг/мл крови. Гепарин испытывали в концентрации 1 ЕД/мл крови. В каждой серии опытов было использовано восемь животных. Степень антикоагулянтной активности исследуемого соединения определяли по изменению времени свертывания цитратной крови и проценту изменения свертываемости в контроле и опыте и статистически обрабатывали с использованием коэффициента Стьюдента [Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии, М., С.312-313, (2000)]. Результаты испытаний представлены в таблице.

Как видно из таблицы, исследуемое соединение проявляет дозозависимое прямое антикоагулянтное действие, т.к. достоверно увеличивает время свертывания цитратной крови в зависимости от его концентрации в концентрациях 1 мг/мл и 0,5 мг/мл и снижает свертывание, соответственно, на 502,4% и 92,2%. Эталон сравнения гепарин в концентрации 1 ЕД/мл крови тормозит свертывание на 22,4%.

Острую токсичность при внутривенном введении определяли на нелинейных белых мышах массой 20-25 г. Исследуемое вещество вводили в хвостовую вену в виде водного раствора из расчета 0,1 мл на 10 г массы животного в возрастающих дозах. Результаты обрабатывали по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы (ЛД₅₀) при Р=0,05 [Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. токсикол., T.41, №4, С.497-502 (1978)].

Острая токсичность заявляемого соединения составила 20,5 (12,2-31,3) мг/кг.

Таким образом, 3-метил-2-пиридиламид малеиновой кислоты (I) проявляет дозозависимое прямое антикоагулянтное действие и может найти применение в медицине в качестве антикоагулянта прямого действия.

Литература

1. Долженко А.В., Колотова Н.В., Козьминых В.О., Сыропятов Б.Я., Хим.-фарм. журнал, Т.36, №3, С.17-19 (2001).

2. Колотова Н.В., Козьминых В.О., Долженко А.В., Козьминых Е.Н., Котегов В.П., Година А.Т., Сыропятов Б.Я., Новоселова Г.Н., Хим.-фарм. журнал, Т.35, №3, C.26-30 (2001).

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей), М.: "Издательство Медицина", Т.2, С.73 (1985).

4. Долженко А.В., Сыропятов Б.Я., Козьминых В.О., Колотова Н.В., Захматов А.В., Бородин А.Ю. Хим.-фарм. журнал, Т.37, №8, С.12-13 (2003).

5. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии, М., С.312-313, (2000).

6. Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. токсикол., Т.41, №4, С.497-502 (1978).

ТаблицаВлияние на свертывающую систему крови различных концентраций заявляемого соединения (I) и эталона сравнения (гепарина)Концентрация соединенияВремя свертывания, сек. КонтрольВремя свертывания, сек.
Опыт% изменения свертываемостиРСоединение I41,4±3,90247,6±39,62-502,4<0,0011 мг/мл(n=8)   Соединение I32,2±4,1561,9±6,89-92,2<0,0010,5 мг/мл(n=8)   Соединение I22,2±2,2926,8±1,95-20,7>0,050,25 мг/мл(n=8)   Гепарин29,9±0,4836,6±1,82-22,4<0,011 ЕД/мл(n=8)   Примечание: Р - в сравнении с контролем

Изобретение относится к применению 3-Метил-2-пиридиламида малеиновой кислоты формулы

в медицине в качестве антикоагулянта прямого действия. Соединение получают взаимодействием 2-амино-3-метилпиридина с малеиновым ангидридом. Оно представляет собой белое кристаллическое вещество с Т_пл.=136-137°С, растворимое в воде, этаноле, ДМФА, ДМСО. Технический результат - увеличение времени свертывания нитратной крови и процента изменения свертываемости в концентрациях соединения 1 мг/мл и 0,5 мг/мл на 502,4% и 92,2% соответственно. ЛД₅₀ при внутривенном введении белым мышам составила 20,5 (12,2-31,3) мг/кг. 1 табл.

Применение 3-Метил-2-пиридиламида малеиновой кислоты в качестве средства, обладающего прямым антикоагулянтным действием.