СПОСОБ ОСЛАБЛЕНИЯ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ (АСК) С ПОМОЩЬЮ ПЕПТИДА ФОРМУЛЫ Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly Российский патент 2007 года по МПК A61K31/616 A61K38/08 A61P1/04 

Изобретение относится к медицине, в частности, к патологической анатомии и гастроэнтерологии.

Известно, что в ревматологии на фоне применения ацетилсалициловой кислоты (АСК) - нестероидного противовоспалительного препарата (НПВП) развивается эрозивно-язвенное поражение желудка и двенадцатиперстной кишки (НПВП-гастропатия), которое ассоциируется с высоким риском желудочно-кишечных кровотечений (Lichtenstein D.R., Syngal S., Wolfe M.M. Non-steroidal anti-inflammatory drugs and gastrointestinal hetract: the double-edged sword // Arthr. And Reum. - 1995. - Vol.38. - P.5-18). Современная стратегия предупреждения и лечения НПВП-гастропатий предполагает три основных направления:

1. Использование Н2-гистаминоблокаторов (циметидина, фамотидина и других), которые, являясь антисекреторными препаратами, снижают секрецию соляной кислоты и пепсина, однако НПВП-гастропатий могут развиваться на фоне гипоацидных состояний, и даже ахилии;

2. Применение ингибиторов протонного насоса (H⁺, K⁺ - АТФазы), эффективно снижающих желудочную секрецию независимо от природы раздражителя (омепразол), которые, однако, обладают многими побочными эффектами, повышают риск инфекций, маскируют клинику рака желудка;

3. Лечение синтетическими аналогами простгландина Е1 (мизопростол), обладающего цитопротекторным эффектом на слизистую оболочку желудка, но имеющих много побочных эффектов, как-то: боли в животе, диарея, воздействие на сосудистый тонус, и другие.

Следовательно, предложенный арсенал лекарственных препаратов не решает проблемы лечения НПВП-гастропатий, особенно верхних отделов ЖКТ (Насонов Е.Л., Каратеев А.Е. Гастропатия, связанная с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (часть II). Клиническая медицина, № 4, 2000, с.4-9).

В последние годы в качестве ростостимулирующего средства, увеличивающего массу тела и обладающего адаптогенными свойствами, используется олигопептид формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly (Патент RU № 2155064, С1 7 А61K 38/08, 27.08.2000), запатентованный как «седатин». Его применение и послужило наиболее близким аналогом, то есть прототипом в лечении гастропатий, вызванных АСК.

Задачей изобретения является создание эффективной защиты слизистой оболочки желудка (СОЖ) от повреждающего воздействия ацетилсалициловой кислоты (АСК).

Указанная задача достигается тем, что предварительно в эксперименте мышам вводили раствор пептида пятикратно внутрибрюшинно в дозе 100 мкг/кг с последующим введением через зонд ацетилсалициловой кислоты (АСК) в дозе 200 мг/кг, способствующей эрозивно-язвенному повреждению СОЖ. Растворителем АСК служил 30% водный раствор диметилсульфоксида. Эвтаназию осуществляли путем декапитации через 48 часа после зонда с АСК (через 24 часа после последней инъекции пептида), когда отмечались максимальные деструктивные изменения. За 1 час до эвтаназии животным внутрибрюшинно вводили ³H-тимидин из расчета 1,0 мкКюри на 1 г массы (удельная активность 84 Кюри/моль). После декапитации желудок извлекали и вскрывали его по большой кривизне. Поверхность слизистой оболочки изучали с помощью лупы. Площадь язв в слизистой оболочке желудка измеряли с помощью морфометрического анализатора компьютерного изображения «МЕКОС». Кусочки фундального отдела желудка фиксировали в смеси 96% этанол-уксусная кислота (3:1). Изготовление радиоавтографов, определение индекса меченых ядер (ИМЯ, %), интенсивности метки (ИМ, среднее число треков над ядрами) осуществляли по принятой в лаборатории методике. Индекс меченых ядер ИМЯ определяли в генеративной зоне после просмотра 1700-2100 клеток и выражали в процентах. Статистическую обработку материала проводили с помощью программы «Statistika 5.0». Различия между группами считали достоверными при p<0,05. В эксперименте использовано 103 белых лабораторных мыши.

Преимущество предлагаемого способа:

- возможность оценки состояния СОЖ в разных отделах под воздействием АСК, олигопептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly в испытуемых группах и в контроле;

- объективность количественных критериев, имеющих прямую корреляционную связь с воздействием олигопептидла формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly;

- исследование эффекта олигопептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly как препарата нового поколения, не применявшегося раннее в стратегии лечения НПВП-гастропатий;

- возможность в дальнейшем интраназального применения препарата;

Полученные результаты приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1
Влияние пятидневного внутрибрюшинного введения седатина в дозе 100 мкг/кг на репаративные процессы в эпителии слизистой оболочки желудка белых мышей.ГруппыИнтактный контроль (1)АСК зонд (2)Седатин и АСК зонд (3)Изотонический NaCl и АСК зонд (4)Седатин (5)Площадь язв (мкм²)×10³074,31±10,0132,43±8,23*95,13±12,21*, **0Различия достоверны при p<0,05; * - Различия между (2) и (3); (2) и (4)** - Различия между (3) и (4)

Как видно из таблицы 1, препарат достоверно уменьшает площадь язв СОЖ в группе (3) по сравнению с контрольными (1, 4) группами, что говорит о его протективном действии на фоне повреждающего влияния ацетилсалициловой кислоты.

Таблица 2
Влияние пятидневного внутрибрюшинного введения седатина в дозе 100 мкг/кг на процессы синтеза ДНК (ИМЯ, %) в эпителии фундального отдела желудка белых мышей. группыИнтактный контроль (1)АСК зонд (2)Седатин и АСК зонд (3)Изотонический NaCl и АСК зонд (4)Седатин (5)ИМЯ (%)7,09±0,514,72±0,49*8,74±0,79**5,79±0,51***12,56±1,42 *, **ИМ34,33±1,8926,82±2,27*36,08±4,5436,33±1,95**38,50±3,35Различия достоверны при p<0,05; * - Различия между (1) и (2); (1) и (5);** - Различия между (2) и (3); (2) и (4); (2) и (5);*** - Различия между (3) и (4)

Как видно из таблицы 2, у животных, получавших посредством желудочного зонда ацетилсалициловую кислоту, имело место уменьшение количества ДНК-синтезирующих ядер в 1,5 раза. Другим важным показателем расстройства синтеза ДНК в этих условия было почти 1,3 кратное уменьшение ИМ, которое свидетельствует об уменьшении скорости синтеза ДНК под влиянием салицилатов. Предварительное (перед внутрижелудочным зондом АСК) введение пептида животным привело к полной нормализации процессов синтеза ДНК в эпителиоцитах. ИМЯ и ИМ достоверно не отличались от показателей интактного контроля.

Пример 1. Рассмотрим в качестве иллюстрации протективного эффекта олигопетида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly количественные показатели язв СОЖ у мышей из трех подопытных групп (2, 3, 4)

Интактный контроль, группа (1) и седатин, группа (5) - язв нет

АСК зонд, группа (2) - количество язв - 5

Суммарная площадь всех язв - 127821.46 (мкм²)

Длина наибольшей язвы - 262.77 (мкм)

Длина наименьшей язвы - 157.82 (мкм)

Седатин и АСК зонд, группа (3) - количество язв - 1

Суммарная площадь всех язв - 13801.27 (мкм²)

Длина наибольшей язвы - 78.08 (мкм)

Длина наименьшей язвы - 56.69 (мкм)

Изотонический NaCl и АСК зонд, группа (4) - количество язв - 4

Суммарная площадь всех язв - 123394.04 (мкм)

Длина наибольшей язвы - 234.19 (мкм)

Длина наименьшей язвы - 159.73 (мкм)

Пример 2. Оценка влияния пептида на процессы регенерации эпителиоцитов в фундальном отделе желудка белых мышей.

Для демонстрации влияния пептида на процессы регенерации эпителиоцитов фундального отдела желудка приводим величины ИМЯ и ИМ мышей из различных экспериментальных групп

Интактный контроль, группа (1) - ИМЯ - 7,75; ИМ - 40,60

АСК зонд, группа (2) - ИМЯ - 3,95; ИМ - 24,3

Седатин и АСК зонд, группа (3) - ИМЯ - 8,17; ИМ - 37,2

Изотонический NaCl и АСК зонд, группа (4) - ИМЯ - 4,17; ИМ - 29,3

Седатин, группа (5) - ИМЯ - 10,03; ИМ - 36,5

Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и может быть использовано для ослабления эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка при воздействии ацетилсалициловой кислоты (АСК). Для этого перед введением белым мышам через зонд АСК в дозе 200 мг/кг вводят внутрибрюшинно пептид формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly в течение 5 дней в дозе 100 мкг/кг. Способ позволяет создать эффективную защиту слизистой оболочки желудка от повреждающего действия АСК, снизить количество, размеры и суммарную площадь язв. 2 табл.

Способ ослабления эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка при воздействии ацетилсалициловой кислоты (АСК) в эксперименте, включающий введение пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly, отличающийся тем, что пептид вводят белым мышам внутрибрюшинно в течение 5 дней в дозе 100 мкг/кг с последующим введением через зонд АСК в дозе 200 мг/кг.