СРЕДСТВО ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ОРГАНИЗМА К ВИРУСНЫМ И ВИРУС ИНДУЦИРОВАННЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ Российский патент 2008 года по МПК A61K36/258 A61K36/185 A61P43/00 

Изобретение относится к средствам и биологически активным добавкам к пище, способствующим повышению иммунитета, в частности повышению устойчивости организма к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям, содержащим в качестве активного компонента бетулин и его производные в сочетании с вспомогательными веществами.

Изобретение может быть использовано в медицине, пищевой и фармацевтической промышленностях, в частности в производстве и применении биологически активных добавок.

Известно, что многие природные тритерпеноиды и их низкомолекулярные производные обладают разнообразной биологической активностью.

Тритерпеноиды и их гликозиды способствуют нормализации метаболических процессов в печени при вирусном гепатите.

Биомасса культивируемых клеток растений семейства аралиевых - женьшеня, полисциаса содержит тритерпеновые гликозиды и нативные ферменты, работающие в цепи антиоксидантной защиты: супероксиддисмутазу, каталазу, пероксидазу.

Известно, что водно-спиртовые извлечения из вышеупомянутой биомассы проявляют лечебно-профилактический эффект при инфекционных заболеваниях слизистых оболочек полости рта (пат. РФ №№2095052, 2139727, 2123854). Для лечения инфекционных заболеваний полости рта ферментные комплексы из биомассы аралиевых применяют местно, путем смазывания или полоскания.

Недостатком ферментных и биоантиоксидантных комплексов из биомассы женьшеня или полисциаса являются относительно невысокая эффективность и неудобство применения, а также только местное действие.

Известна пищевая добавка на основе ферментного комплекса из биомассы женьшеня и полисциаса, улучшающая вкус пищи, повышающая умственную и физическую работоспособность (пат. РФ №2093045). Эта добавка не проявляет антиинфекционной активности.

Тритерпеноиды бересты также обладают выраженной биологической активностью. Известно, что тритерпеноиды бересты, в частности бетулин, обладают антифунгальной и антидрожжевой активностью (US 2002128210).

Известно, что четвертичные соли тритерпеноидов являются биологически активными ПАВ, подавляющими рост бактерий и дрожжей (US 5182373, WO 03062260).

Бетулин и ряд других тритерпеноидов обладают противоопухолевой активностью (ЕР 1321145).

У вышеперечисленных аналогов не описано противовирусное действие и иммуностимулирующий эффект.

Известно, что экстракт бересты, содержащий более 70% бетулина, проявляет адаптогенную и интерфероногенную активность (RU 2240799, RU 2252775).

Установлена противовирусная активность бетулина. Запатентовано средство для профилактики гриппа, представляющее собой экстракт бересты с содержанием бетулина свыше 80%. Индекс защиты при этом составляет 50-70% при высоких суточных дозах - 150-250 мг/кг при оральном введении. Высокие дозы (12-17 г/чел) говорят об относительно невысокой противовирусной активности препарата.

Известно средство для лечения вирусного гепатита С (пат. RU 2244554). В качестве средства для лечения вирусного гепатита С предлагается экстракт бересты с фармацевтически приемлемым носителем при пероральном введении. Средство предлагается только для лечения гепатита С.

Обычно в ослабленном организме развивается множественная патогенная вирусная и бактериальная микрофлора. Вирусные заболевания, в том числе и гепатиты, сопровождаются ослаблением иммунитета, снижением активности антиоксидантной системы организма, понижением психофизиологического статуса. В указанном аналоге не отмечается системного действия заявленного средства на организм. Кроме того, данный аналог не обладает выраженным профилактическим действием, что объясняется только антивирусной активностью экстракта бересты при, по-видимому, относительно слабом укрепляющем действии на организм в целом.

Наиболее близким техническим решением (прототипом), на наш взгляд, является изобретение «Композиция биологически активных веществ», пат. RU 2254032. Предложенная композиция содержит смесь бетулина, бетулиновой кислоты и сопутствующих веществ в определенных соотношениях, получаемая экстракцией из коры березы. Композиция предлагается к применению в составах косметических изделий, лекарственных препаратов, биологически активных добавок к пище.

При этом заявляется, что указанная композиция проявляет общеукрепляющее, противовирусное, гепатопротекторное, противоопухолевое, антилитогенное действия.

Из литературных данных действительно известно, что экстракт бересты обладает вышеперечисленными эффектами.

В примерах прототипа приведены рецептуры ряда БАД различного назначения, содержащих березовый экстракт сухой и дополнительные вещества.

Однако в описании не содержится экспериментально подтвержденной оценки декларированного действия продуктов. В описательной части прототипа приведены лишь литературные данные о биологических свойствах экстракта бересты, при этом экстракты получены разными авторами по разным технологиям.

Поэтому достаточно трудно объективно оценить эффективность предлагаемых композиций.

Задачей данного изобретения является создание средства для повышения устойчивости организма к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям, таким как грипп, гепатит, ОРЗ и др. на основе продуктов природного растительного происхождения с использованием сухого экстракта бересты.

Поставленная задача реализуется путем создания композиции, включающей в качестве действующих веществ сухой экстракт бересты и экстракт биомассы женьшеня, а также фармацевтические вспомогательные вещества, позволяющие изготавливать препарат в гранулированной, капсулированной или таблетированной формах.

Способ получения средства заключается в смешении водно-спиртового извлечения из биомассы женьшеня с сухим экстрактом бересты. В зависимости от партии, жидкий ЭБЖ может содержать от 2 до 5% сухого остатка. При этом массовое отношение сухого остатка экстракта биомассы корня женьшеня к сухому экстракту бересты составляет 1:(20-50).

При необходимости получения той или иной готовой формы выбирают подходящие вспомогательные фармацевтические вещества, например:

- для получения гранул применяют микрокристаллическую целлюлозу и крахмально-сахарный клейстер,

- для получения таблеток к гранулам добавляют стеарат кальция и тальк.

Массу тщательно перемешивают, гранулируют и высушивают известными способами. Готовые гранулы фасуют в твердые желатиновые капсулы или из гранулята прессуют таблетки.

Пример 1.

В смеситель с планетарной мешалкой загружают 2,5 кг СЭБ и 1,25 кг микрокристаллической целлюлозы (МКЦ). Массу перемешивают и приливают 2,5 л ЭБЖ, содержащего 0,062 кг сухого остатка. Тщательно перемешивают и прибавляют крахмально-сахарный клейстер При перемешивании прибавляют 0,05 кг твина 80.

Массу высушивают в сушильном шкафу и гранулируют на ситовом грануляторе.

Готовые гранулы фасуют на капсульной машине в твердые желатиновые капсулы по 170 мг, капсулы упаковывают в банки пластмассовые по 30 или 60 шт.

Пример 2.

В смеситель загружают 2,5 кг СЭБ и 1,25 кг микрокристаллической целлюлозы (МКЦ). Массу перемешивают и приливают 2,5 л ЭБЖ, содержащего 0,0502 кг сухого остатка. Влажную массу тщательно перемешивают, высушивают и протирают через сито с размером отверстий 1,0 мм.

К сухому грануляту прибавляют 1% стеарата кальция и 1% талька, перемешивают в смесителе типа «пьяная бочка» и прессуют таблетки средней массой 0,2 г.

Таблетки фасуют в контурную ячейковую упаковку из фольги и полимерной пленки на блистерной машине. Блистеры упаковывают в пеналы картонные по 30 или 60 табл./уп.

Пример 3.

В миксере смешивают 0,3 кг СЭБ и 0,2 кг МКЦ. К смеси прибавляют 0,2 кг ЭБЖ, содержащего 0,009 кг сухого остатка, и перемешивают в миксере. Массу высушивают на поддонах в сушильном шкафу; сухую массу просеивают через сито. К порошку прибавляют 0,05 кг высушенного крахмала и 0,01 кг аэросила, тщательно перемешивают и фасуют в твердые желатиновые капсулы на опытно-промышленном капсуляторе и упаковывают в банки, как описано в примере 1.

Пример 4.

В миксере смешивают 0,3 кг СЭБ и 0,1 кг МКЦ. Массу перемешивают.0,3 л ЭБЖ, содержащего 0,015 кг сухого остатка, приливают к сухой смеси СЭБ и МКЦ. Тщательно перемешивают и прибавляют крахмально-сахарный клейстер до консистенции влажного гранулята. Массу высушивают в сушильном шкафу и гранулируют на ситовом грануляторе.

Готовые гранулы фасуют в твердые желатиновые капсулы по 170 мг, капсулы упаковывают в банки пластмассовые по 30 или 60 шт.

Исследование противовирусной активности

1. Изучение противовирусной активности заявляемого средства было проведено на модели хорионаллантоисных оболочек куриных эмбрионов. Исследуемые препараты растворяли в диметилсульфоксиде в концентрации 50 мг/л и готовили серийные двукратные разведения. Конечные концентрации препаратов имели следующие значения:

- предлагаемое средство (состав по примеру 1) -500-125 мкг/мл,

- сухой экстракт бересты (СЭБ) -500-125 мкг/мл,

- экстракт биомассы культуры корня женьшеня (ЭБЖ) -500-125 мкг/мл,

- ремантадин 25 мкг/мл.

Вирусингибирующее действие оценивали по снижению титра вируса в опыте по сравнению с контролем. На основании полученных данных рассчитывали 50% ингибирующую дозу ED₅₀, т.е. концентрацию препарата, снижающую уровень вирусной репликации вдвое.

Установлено, что наиболее активным из исследованных препаратов является предлагаемое средство, которое показало более широкий спектр и высокий уровень противовирусной активности в сравнении с СЭБ и проявило противовирусные свойства в отношении вируса гриппа A (H3N2), по силе действия сопоставимые с ремантадином, а также более высокую активность против гриппа В, что является его преимуществом перед ремантадином.

Результаты этого исследования приведены в таблице 1.

2. Изучение терапевтического действия

Проведено сравнительное изучение терапевтического действия ряда препаратов на модели мышей, зараженных летальной дозой патогенного вируса гриппа А/Pr/8/34 (H0N1) (таблица 2).

Были исследованы 4 партии заявляемого средства с различными соотношениями СЭБ и ЭБЖ; СЭБ (без ЭБЖ); ЭБЖ (без СЭБ); ремантадин:

- партия 1 - СЭБ: сухой ЭБЖ=1:40;

- партия 2 - СЭБ: сухой ЭБЖ=1:50;

- партия 3 - СЭБ: сухой ЭБЖ=1:33;

- партия 4 - СЭБ: сухой ЭБЖ=1:25.

В опыте белые беспородные мыши были инфицированы летальной дозой патогенного вируса гриппа шт. A/Pr/8/34 (H0N1). Введение средства проводили внутрижелудочно в течение 7 дней. Через 1 час после введения препарата мышей заражали интраназально патогенным штаммом вируса гриппа A/Pr/8/34 (H0N1) в объеме 0,05 мл на мышь. Введение препаратов продолжали в течение 7 дней. Результаты опыта оценивали на 7 и 14 сутки, регистрируя летальность мышей в контрольной и опытных группах (табл.2).

Как видно из результатов, представленных в таблице 2, введение заявляемого средства обеспечивает защиту мышей от гибели на уровне ремантадина - признанного антивирусного лекарственного средства.

Противовирусная активность прототипа (сухого экстракта бересты с наполнителями) и отдельно взятого экстракта биомассы женьшеня значительно ниже.

Таким образом, заявляемая композиция проявляет более высокий противовирусный и общеукрепляющий эффекты, чем отдельно взятые сухой экстракт бересты или экстракт биомассы женьшеня.

3. Клинические испытания заявляемого средства в капсулированной форме обнаружили его свойства, способствующие повышению устойчивости организма к вирусным инфекциям.

Исследования влияния на иммунитет были проведены на группе больных 30 человек, причем 20 принимали предлагаемое средство, а 10 - плацебо. В группы были включены мужчины и женщины в возрасте от 18 до 60 лет. Критериями включения в группы были снижение в сыворотке крови иммуноглобулинов классов А, М, G; снижение уровня сывороточного интерферона, повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов.

Прием предлагаемого средства способствовал достоверному повышению уровня иммуноглобулинов А у 57,2% пациентов; уровней иммуноглобулинов М и G - у 21% пациентов. Сниженный уровень сывороточного интерферона нормализовался у 18% больных. Полученные клинические данные характеризуют высокую иммуностимулирующую активность заявляемого средства.

Установлено, что предлагаемое средство за короткий период применения положительно влияет на защитную антиоксидантную систему больных ИВС, снижает интенсивность процессов перекисного окисления липидов и значительно повышает активность антиоксидантной системы. Хороший клинический эффект достигнут у 69% больных 1-й группы, тогда как у 2-й (плацебо) эффекты «удовлетворительный» и «хороший» были равноценны.

Клинические испытания гепатопротекторного действия предлагаемого средства проводились на больных хроническим вирусным гепатитом С (21 больной), а также при заболеваниях печени смешанной этиологии (9 больных). Установлено его позитивное влияние на клинические проявления поражений гепатобилиарной системы при хроническом вирусном гепатите, стеатогепатитах алкогольной и смешанной этиологии; отмечено улучшение показателей функций печени. Оценивая положительную динамику показателей клинического и лабораторно-биохимического исследований результат терапевтического применения заявляемого средства при хроническом гепатите С можно оценить как «хороший» у 27 пациентов (90%) и как «удовлетворительный» у 3 больных (10%).

Доказательством стойкого положительного эффекта при лечении хронического гепатита в клинике является нормализация биохимических показателей.

Изменение показателей биохимического анализа крови в группе больных после монотерапии приведены в таблице 3.

Эффективность найденного экспериментально сочетания экстракта бересты (прежде всего бетулина) и экстракта биомассы женьшеня обусловлена синергетическим комплексным иммуностимулирующим, противовирусным, антиоксидантным воздействием, что повышает устойчивость организма человека к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям - гриппу, вирусным гепатитам, респираторным заболеваниям и т.п.

Таким образом, предлагаемое средство

- малотоксично;

- эффективно в отношении вируса гриппа A (H3N2), причем по силе действия сопоставимо с ремантадином, а против гриппа В имеет более высокую активность;

- против вируса гриппа A/Pr/8/34 (H0N1) обеспечивает защиту мышей от гибели на уровне ремантадина;

- клинические испытания продемонстрировали способность средства повышать устойчивость организма к вирусным инфекциям, в том числе и к гепатитам различной этиологии.

Учитывая низкую токсичность предлагаемого средства и его высокий химиотерапевтический индекс, его можно использовать в качестве биологически активной добавки к пище.

Таблица 1.
Результаты сравнительного изучения противовирусной активности на модели куриных эмбрионовПрепаратИспытанные концентрации, мкг/млED₅₀, мкг/мл для вируса A/Victoria/35/ 72 (H3N2)ED₅₀, мкг/мл для вируса B/Lee/40Предлагаемое средство500; 250; 12536±1263±21Сухой экстракт бересты (СЭБ)500; 250; 125>500375±55Экстракт биомассы культуры корня женьшеня (ЭБЖ)500; 250; 125>500450±55Ремантадин25>25>25

Таблица 2.
Результаты сравнительного изучения противовирусной активности на мышах при внутреннем введении
Постановка опыта: белые беспородные мыши были инфицированы летальной дозой патогенного вируса гриппа шт.A/Pr/8/34 (H0N1). Введение БАД проводили внутрижелудочно в течение 7 дней. Результаты испытания оценивали на основе следующих показателей:
- коэффициент защиты (КЗ)
КЗ=% погибших мышей в контроле / % погибших мышей при
введении испытуемых БАД;
- индекс защиты (ИЗ) ИЗ=(К3-1)×100%/КЗ; Кол-воГибельКоэфф.ИндексПрепаратзараж.животных,защитызащиты мышей в%(КЗ)(ИЗ), % группе   Вода (контроль)2080--Ремантадин20402,05075 мг/кг    Предлагаемое20352,2856средство, СЭБ/сухой    ЭБЖ-1:40    доза 100 мг/кг    Предлагаемое20382,153средство СЭБ/сухой    ЭБЖ=1:50    доза 50 мг/кг    Предлагаемое20441,8245средство СЭБ/сухой ЭБЖ=1:33 доза 50 мг/кг    Предлагаемое средство СЭБ/сухой ЭБЖ=1:25 доза 100 мг/кг20372,1653,7Сухой экстракт бересты20721,1110Экстракт биомассы культуры корня женьшеня20761,055

Таблица 3.
Изменение показателей биохимического анализа крови в группе больных после монотерапии предлагаемым средством
Состав группы по этиологическому фактору: хронический вирусный гепатит С - 21 чел; злоупотребление алкоголем - 5 чел;
смешанная этиология - 4 чел; всего группа - 30 чел.Показательнормадо леченияпосле лечения   (28 дней)Общий белокN 65-85 г/л57,3±7,675,5±6,1*Билирубин общийN 8,5-20,5 мкмоль/л32,5±4,118,7±2,3*АлАТ (аланинаминотрансфераза)N 1-41 Ед/л74,2±2,541,2±1,28*АсАТ (ацетиламинотрансфераза)N 1-37 Ед/л56,3±3,836,2±1,3** - различия между группами сравнения достоверны, р<0,05.

Изобретение относится к фармацевтической и пищевой промышленности, в частности к производству и применению биологически активных добавок, и касается средств, способствующих повышению устойчивости организма к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям, содержащим в качестве активного компонента вещества растительного происхождения, а именно бетулин и его производные и женьшень. Предлагаемое средство для повышения устойчивости организма к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям на основе сухого экстракта бересты в отличие от известного дополнительно содержит экстракт биомассы культуры корня женьшеня. При этом массовое отношение сухого экстракта биомассы культуры корня женьшеня к сухому экстракту бересты составляет 1:(20-50). Оно эффективно в отношении вируса гриппа A (H3N2), причем по силе действия сопоставимо с ремантадином, а против гриппа В имеет более высокую активность; против вируса гриппа A/Pr/8/34 (H0N1) обеспечивает защиту мышей от гибели на уровне ремантадина; клинические испытания продемонстрировали способность средства повышать устойчивость организма к вирусным инфекциям, в том числе и к гепатитам различной этиологии. 4 табл.

Средство для повышения устойчивости организма к вирусным и вирусиндуцированным заболеваниям на основе сухого экстракта бересты, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит экстракт биомассы культуры корня женьшеня при массовом отношении экстракта биомассы культуры корня женьшеня (в пересчете на сухой остаток) к сухому экстракту бересты 1:(20-50).