СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИППА Российский патент 2005 года по МПК A61K35/78 A61P31/12 

Область техники

Изобретение относится к области медицины. Более конкретно оно относится к изысканию новых средств профилактики гриппа.

Уровень техники

Проблема профилактики и лечения инфекционных заболеваний, особенно вирусной этиологии, остается актуальной, несмотря на огромное количество антибиотиков, имеющихся на фармацевтическом рынке. Поскольку пониженный иммунитет является одной из причин, облегчающих развитие инфекций, в последнее время уделяется большое внимание поиску и созданию новых иммуномодуляторов, повышающих неспецифическую защиту организма от различных возбудителей, среди которых вирус гриппа занимает одно из первых мест.

В последние годы все большее признание получают профилактические и лекарственные средства растительного происхождения и гомеопатические препараты. Преимуществом препаратов, производимых на растительной основе, является то, что билогически активные вещества (действующее начало) растений более естественно включаются в обменные процессы организма человека, чем синтетические препараты. Следствием этого является лучшая переносимость, более редкое развитие побочных эффектов и осложнений. Уровень развития современной фармацевтической промышленности дает возможность выпускать многокомпонентные (комбинированные) фитопрепараты.

Так, производимый голландской фирмой “Бионал” препарат “Антисептин”, предназначенный для профилактики и лечения респираторных вирусных инфекций и гриппа, включает в свой состав наряду с прополисом и витамином С тимьян ползучий и экстракт эхинацеи (http://www.bional.ru/infoproduct/antiseptm_article 1.html/.

Украинский препарат “Антигриппин - ARN" включает 4 компонента растительного происхождения: аконитум напеллус, белладонна, бриония и дулькамара (http://www.polykhrest.od.ua/other/years_articles 131.php).

Восемь компонентов растительного происхождения включает средство для лечения гриппа и других острых респираторных заболеваний по авторскому свидетельству СССР №404481.

Несмотря на наличие на фармацевтическом рынке препаратов для профилактики гриппа и растительного происхождения, задача расширения их арсенала продолжает оставаться актуальной.

Сущность изобретения

Авторами изобретения впервые было установлено, что экстракт бересты (белой части коры березы) оказывает активизирующее влияние на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов, то есть повышает неспецифический иммунитет.

Дальнейшие исследования на животных, инфицированных вирусом гриппа, показали, что предшествующее инфицированию введение животным экстракта бересты оказывает иммуномодулирующее действие, повышая индивидуальную активность клеток почти в 2 раза, что позволяет рекомендовать экстракт бересты и препараты на его основе для профилактики такого вирусного заболевания, как грипп.

Примеры осуществления изобретения

Иллюстрирующие сущность и возможности осуществления изобретения нижеследующие результаты были получены авторами изобретения на примере сухого экстракта бересты производства ООО “Березовый мир”, предназначенного для использования в качестве сырья при изготовлении биологически активных пищевых добавок и косметических средств.

Содержание основного компонента экстракта - бетулина в опытах менялось от 82,4 до 91,1%, при этом иммунологическая активность экстракта не менялась.

Исследования влияния экстракта бересты на факторы клеточного иммунитета проведены на белых беспородных мышах массой 15-16 г, самцах. Экстракт вводили per os 1 раз в день в дозах 100 и 50 мг/кг в 0,5 мл 1% крахмального геля за 1 час до инфицирования животных. Мышам контрольной группы (20 штук) вводили в тех же условиях плацебо (0,5 мл 1% крахмального геля). Двум группам животных (по 10 штук) вводили экстракт в дозах 100 и 50 мг/кг по схеме опыта без последующего инфицирования.

Для стимуляции фагоцитоза и выхода перитонеальных макрофагов мышам вводили внутрибрюшинно по 2 мл мясопептонного бульона. Макрофаги выделяли через 48 часов путем промывания брюшной полости раствором Хенкса с гепарином. Полученную взвесь клеток центрифугировали, далее разводили средой 199 с 10% сывороткой КРС до концентрации 30·10⁵ клеток в одном мл.

Для фагоцитоза использовали суточную культуру Staphylococcus aureus (штамм 178) с микробной нагрузкой 1·10⁸ КОЕ/мл. 0,3 мл культуры стафилококка смешивали с 2 мл суспензии клеток макрофагов и добавляли 9,7 мл среды 199. Указанную смесь вносили в емкость, на дне которой находилось покровное стекло. Инкубацию проводили в термостате при 37°С в течение 30 минут. После чего покровные стекла промывали, просушивали, фиксировали в метаноле, далее окрашивали по Романовскому - Гимза и изучали под световым микроскопом.

В макрофагах просчитывали количество бактерий в одной клетке, а также количество макрофагов на препарате. Для оценки фагоцитарной активности использовали следующие показатели:

МФА - активность фагоцитоза, количество макрофагов с поглощенными бактериями при просчете 100 клеток.

ФИ - фагоцитарный индекс, интенсивность фагоцитоза, среднее число микробных клеток в одном макрофаге при просчете 100 клеток.

ФЧ - фагоцитарное число, среднее количество микробов в 1 активном макрофаге.

Результаты исследования

Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2. В таблице 1 показаны результаты изучения влияния экстракта бересты на активность фагоцитоза у здоровых животных.

Установлено, что экстракт бересты значительно повышает активность макрофагов: ФИ возрастает более, чем в 2 раза и ФЧ в 1,5 раза по сравнению с контролем. Значения МФА примерно такие, как у мышей, которым экстракт не вводился.

Таблица 1Доза экстракта берестыМФАФЧФИУсловные единицы%Условные единицы%Условные единицы%50 мг/кг841158,9167,97,5231,4100 мг/кг771058.931686,88212,3Контроль731005,31003,24100

При снижении дозы экстракта бересты до 50 мг/кг активность фагозитоза не уменьшается.

Результаты изучения фагоцитоза у животных, зараженных вирусом гриппа, представлены в таблице 2.

Таблица 2Доза экстракта берестыМФАФЧФИУсловные единицы%Условные единицы%Условные единицы%50 мг/кг7910817,833614,1435100 мг/кг8611819,8237417,05526Контроль (инифицированные мыши, б/п)34463,4641,1736

Установлено, что у мышей, зараженных вирусом гриппа (А/Аiсhi/68/Н₃N₂) и не получавших экстракт бересты, через 1 час после инфицирования резко снижаются (примерно в 2 раза) все показатели фагоцитоза: МФА на 54%, ФЧ - на 36% и ФИ - на 64% по отношению к аналогичным показателям у здоровых животных (таблица 1).

В группе мышей, инфицированных вирусом гриппа и получавших экстракт за 1 час до заражения, при исследовании через 1 час после инфицирования было установлено возрастание всех показателей фагоцитоза. Все показатели за исключением МФА превышали аналогичные показатели у здоровых животных. ФЧ и ФИ у инфицированных животных, получавших экстракт бересты в дозах 50 и 100 мг/кг, примерно в 2 раза выше, чем ФЧ и ФИ у здоровых животных. При снижении дозы экстракта до 50 мг/кг активность фагоцитоза не уменьшается.

Экстракт сильнее повышает индивидуальную активность клеток: среднее количество микробных клеток в 1 макрофаге (ФИ) и среднее количество микробных клеток на 1 активный макрофаг (ФЧ). Общее количество макрофагов с поглощенными клетками (МФА), за исключением инфицированных животных, не получавших экстракт, было на уровне с контролем. Следовательно, экстракт активизирует основную функцию макрофагов - фагоцитоз.

В другом эксперименте экстракт бересты сухой вводили per os 1 раз в день в дозах 150, 200 и 250 мг/кг в 0,5 мл 1% крахмального геля за 48, 24 и 1 час до инфицирования животных. На каждую дозу препарата было использовано по 10 животных. Мышам контрольной группы (20 штук) вводили в тех же условиях плацебо (0,5 мл 1% крахмального геля). Всего в эксперименте использовано 50 животных.

Через 1 час после последнего введения исследуемого экстракта мышей инфицировали интраназально вирусом гриппа А/Аiсhi/68(Н₃N₂) в дозе LD₅₀ 10,0 под легким эфирным наркозом. За животными проводили наблюдение в течение 14 дней после заражения, учитывая гибель мышей от гриппозной пневмонии в группах леченных животных и контроле.

Специфичность гибели животных от гриппозной пневмонии подтверждали осмотром легких павших животных и регистрируя патологоанатомические изменения в них.

Профилактическую активность оценивали, сравнивая летальность в группе леченных экстрактом бересты сухим и контрольной группе мышей. Снижение летальности леченых животных по отношению к контролю выражали в процентах.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя статистический метод Пирсона х² (“хи - квадрат”).

Результаты эксперимента представлены в таблице 3

Таблица 3Доза экстракта бересты (мг/кг)Летальность животных от гриппозной пневмонии (%)Профилактическая защита препарата (%)Р, х²1505050<0,054, 262003070<0,017, 92505050<0,054, 26Контроль (плацебо)100  

Как видно из представленных в таблице данных экстракт бересты оказывает профилактическое действие в отношении вируса гриппа на модели гриппозной пневмонии мышей при заражающей дозе 10 LD₅₀. Был отмечен дозозависимый эффект: так при использовании экстракта бересты сухого в дозе 150 мг/кг выжило 50% животных при 100% гибели мышей в контроле; в дозе 200 мг/кг выжило 70% животных при 100% гибели в контроле. При использовании экстракта в дозе 250 мг/кг ежедневно в течение 3 дней и последующем инфицировании их вирусом гриппа (10 LD₅₀) выживаемость животных составила 50% (при 100% гибели в контроле).

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и используется для профилактики гриппа. Применение экстракта бересты в качестве средства для профилактики гриппа. Применение экстракта бересты для изготовления препаратов для профилактики гриппа. Экстракт содержит бетулин свыше 80%. Средство способствует эффективной профилактике гриппа. 2 с и 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Применение экстракта бересты в качестве средства для профилактики гриппа.2. Применение по п.1 при концентрации бетулина в экстракте свыше 80%.3. Применение экстракта бересты для изготовления препаратов для профилактики гриппа.4. Применение по п.3 при концентрации бетулина в экстракте свыше 80%.