Изобретение относится к биотехнологии. Описаны выделенные молекулы нуклеиновых кислот Corynebacterium glutamicum, которые кодируют полипептиды, обладающие активностью сахароза-специфического компонента II ABC. Изобретение относится также к рекомбинантным экспрессирующим векторам, содержащим описанные молекулы нуклеиновых кислот. Раскрыт способ получения клетки-хозяина, содержащей описанные экспрессирующие векторы. Данное изобретение касается также способа получения описанного полипептида при помощи культивирования указанной клетки-хозяина. Раскрыт способ диагностики Corynebacterium glutamicum у пациента, включающий обнаружение описанных молекул нуклеиновых кислот. Изобретение позволяет расширить ассортимент молекул нуклеиновых кислот, кодирующих белки системы фосфоенолпируват-сахар-фосфотрансферазы. 23 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл.
1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты Corynebacterium glutamicum, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула кодирует полипептид, обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC.2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC, или комплементарная ей последовательность.3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует природный аллельный вариант полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 и обладающего активностью сахароза-специфического компонента II ABC, или комплементарная ей последовательность.4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична полноразмерной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC.5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент из по меньшей мере 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула кодирует полипептид, обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC.6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая в жестких условиях гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-5.7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-6 и нуклеотидную последовательность, кодирующую гетерологичный полипептид.8. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-7 и одну или несколько регуляторных последовательностей.9. Рекомбинантный вектор по п.8, который является плазмидой.10. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, включающий трансфецирование клетки-хозяина вектором экспрессии по пп.8-9.11. Способ по п.10, где указанная клетка является микроорганизмом.12. Способ по п.11, где указанная клетка принадлежит роду Corynebacterium или Brevibacterium.13. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, включающий трансфецирование клетки-хозяина молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, где молекула нуклеиновой кислоты имеет одну или несколько модификаций нуклеиновой кислоты по сравнению с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:1, и где молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC.14. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, включающий трансфецирование клетки-хозяина молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, где регуляторная область молекулы нуклеиновой кислоты модифицирована относительно регуляторной области этой молекулы дикого типа, и где молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий активностью сахароза-специфического компонента II ABC.15. Способ получения полипептида, включающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина, трансфецированной вектором по п.8, в подходящей культуральной среде с получением, таким образом, полипептида, обладающего активностью сахароза-специфического компонента II ABC.16. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, где указанный полипептид обладает активностью сахароза-специфического компонента II ABC.17. Выделенный полипептид, содержащий природный аллельный вариант полипептида, содержащего указанную аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, где указанный природный аллельный вариант обладает активностью сахароза-специфического компонента II ABC.18. Выделенный полипептид, который кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична полноразмерной последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:1, где указанный полипептид обладает активностью сахароза-специфического компонента II ABC.19. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, где указанный полипептид обладает активностью сахароза-специфического компонента II ABC.20. Способ по п.12, где указанная клетка выбрана из группы, включающей Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium herculis, Corynebacterium, lilium, Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium acetoglutamicum, Corynebacterium acetophilum, Corynebacterium ammoniagenes, Corynebacterium fujiokense, Corynebacterium nitrilophilus, Brevibacterium ammoniagenes, Brevibacterium butanicum, Brevibacterium divaricatum, Brevibacterium flavum, Brevibacterium healii, Brevibacterium ketoglutamicum, Brevibacterium ketosoreductum, Brevibacterium lactofermentum, Brevibacterium linens, Brevibacterium paraffinolyticum и штаммы, представленные в таблице 3.21. Способ диагностики Corynebacterium diphtheriae у пациента, включающий обнаружение по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты по пп.1-5 или по меньшей мере одной молекулы полипептида по пп.16-19, 22 или 24, то есть, проведение диагностики или определение активности Corynebacterium diphtheriae у пациента.22. Выделенный полипептид, содержащий фрагмент аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, где указанный фрагмент сохраняет активность сахароза-специфического компонента II ABC.23. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве зонда.24. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеиновую последовательность SEQ ID NO:1, где указанный полипептид обладает активностью сахароза-специфического компонента II ABC.25. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве антисмысловой молекулы.26. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, или комплементарная ей последовательность, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве праймера.27. Выделенный полипептид по любому из пп.16-19, 22 или 24 дополнительно содержащий гетерологичные аминокислотные последовательности.
