Способ оценки степени тяжести вирусного гепатита Советский патент 1991 года по МПК G01N33/49 

I

.С

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных болезней, и может использоваться в клинике для определения степени тяжести вирусного гепатита. Цель изобретения - ускорение способа при одновременном повышении его точности. Определяют антиокислительную активность мембраны эритроцитов в модели железоиндуцируемого окисления олеиновой кислоты по изменению быстрой вспышки хемилюминесценции. При величине антиокислительной активности более 27% степень тяжести вирусного гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26% - как среднюю, менее 16% - как тяжелую. Способ позволяет повысить точность оценки на 14 - 24% и ускорить способ в 1,5 - 2 раза.

Изобретени относится к медицине, в частности к. диагностике инфекционных болезней и может быть использовано в клинике гхля определен.я степени тяжести вирусного гепатита

Цель изобретения - ускорение способа при одновременном повышении его точности.

Способ осуществляют следующим образом

Берут 5 мл венозной крови и выделяют из HSt эритроциты центрифугированием при 300 g в течение 5 мин. при этом в каче- стье антикоагулянта используют гепарин (200 ед/мл) Плазму и верхний слой эритроцитов, содержащий лейкоциты, удаляют Полученные эритроциты отмывают, добав- ля1. четырехкратный обьем охлажденного ф| ииологичесюго раствора и осаждая клетки центрифугированием при 300 g в течение 15 мин Надогадочную жидкость вместе с верхним фитроциюв удаляют

Мембраны эритроцитов выделяют путем гипоосмотического гемолиза испспьзуя а качества гемэлизирующей сред.э1 5 мМ , содержащей 1 мМ ЗДТА 1 мл осужденных эритроцитов быстро и энергично перемешивают с 20 мл охлажденной до 4°С гемолизирующей среды и выдерживают при этой температуре, постоянно поме- шивая, в течение 5 мин ГРМОТИЗЭТ центрифугируют при 20 ОООд в течение 10 мин Надосадочную жидкость удаляют, а осадок мембран эритроцитов отмывают 20 объемами 10 мМ триг HCI-буфера (рН 7,4), осаждая мембраны центрифугированием при 20000 g в течение 10 мин Осадок отмытых мембран эритроцитов переносят в мерные центрифужные пообирки и доводят трис-НС -буфером (10 мм рН 7 4) обьем до 1 мл Полуменн/ю суспензию мембра 1 эритроцитов обрабэ1 упьт- развуком в течение 20 г при частоте 44 кГц С выходной электрической мощностью reг-

К

VJ

3

VJ

.,«

ь

нератора в рабочем диапазоне частоты на активной нагрузке 360 Вт. Обработка ультразвуком повышает доступность мембран эритроцитов для действия реагентов при определении антиокислительной знивно- сти (АОА).

0,1 мл озвученной суспензии мемСран эритроцитов добавляют к 1,9 мл 0,14%-ного спиртового раствора окисленной олеиновой кислоты и после добавления 1.0 мл рас- твора сульфата двухвалентного железа (конечная концентрация в кювете 5 10 М) на хемилюминометре ХЛМ1Ц-01 регистрируют высоту быстрой вспышки хемилю- минесценции В качестве контроля берут 2,0 мл 0,14%-ного спиртового раствора окисленной олеиновой кислоты. Отношение разницы высот быстрой вспышки в контроле и опыте к высоте быстрой вспышки в контроле (умноженное на 100%) и является показателем АОА мембран эритроцитов.

Изучение АОА мембран эритроцитов у 18 практически здоровых доноров показало, что она равна 54,42 ±2,07%.

У больных вирусным гепатитом обнару- жено снижение АОА мембран эритроцитов, причем величина ее снижения зависит от степени тяжести вирусного гепатита. При АОА более 27% степень тяжести гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26% - как среднюю, менее 16% - как тяжелую.

Пример 1. Больная П., поступила в инфекционную больницу на 8-й день болезни с жалобами на боли в эпигастральной области, рвоту, снижение аппетита, темный цвет мочи, желтушную окраску склер.

При поступлении общее состояние удовлетворительное. Кожные покровы и склеры глаз с желтушным оттенком. В легких и сердце - без патологических измене- ний. Пульс 76 уд/мин, АД 110/60 мм рт.ст. Язык влажный, чистый. Живот мягкий, безболезненный при пальпации. Печень выступает из-под правой реберной дуги на 1 см. Моча темная.

Определяют в мембранах эритроцитов АОА. У больной она равна 33,3% (определение заняло 53 мин). Данный уровень АОА позволяет диагностировать вирусный гепатит легкой степени тяжести. Кроме этого, концентрация общего билирубина крови равна 66,8 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 7 ед. (норма 4), АлАТ 6,7 мМ/л -ч (норма 0,68).

В соответствии с установленной сте- пенью тяжести вирусного гепатита больной проводят лечение.

Пример 2. Больная Ж., поступила на 3-й день заболевания с жалобами на головную боль, недомогание, слабость, снижение апптита, темную мочу, желтушность кожи и склер.

При поступлении состояние средней тяжести. Кожные покровы и склеры глаз жел- тушны. В легких везикулярное дыхание. Тоны сердца чистые, ритмичные. Пульс 80 уд./мин, АД 100/70 мм рт.ст. Язык обложен белым налетом. Живот при пальпации мягкий, болезненный в эпигастральной области. Печень выступает из-под края правой реберной дуги на 2 см. Кал ахоличный, моча темная.

АОА мембран эритроцитов больной равна 21,0%, что позволяет диагностировать среднюю степень тяжести вирусного гепатита (определение заняло 47 мин). Уровень общего билирубина крови равен 100,0 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 18 ед. (норма 4), АлАТ 7,0 мМ/л -ч (норма 0,68),

В соответствии с установленной степенью тяжести вирусного гепатита больной назначают адекватное лечение.

Пример 3. Больной А., поступил на 5-й день болезни с жалобами на желтушность кожи, слизистых, темный цвет мочи.

При поступлении общее состояние средней тяжести. Кожные покровы и склеры глаз интенсивно желтые. В легких везикулярное дыхание. Сердечные тоны ясные, чистые. Пульс 68 уд./мин, АД 120/70 мм рт.ст, Язык обложен белым налетом. Живот мягки, безболезненный. Печень выступает из-под края правой реберной дуги на 4 см. Моча темная.

Определяют АОА мембран эритроцитов, которая равна 16,6%, что указывает на тяжелую степень тяжести вирусного гепатита у больного (определение АОА заняло 51 мин). Концентрация общего билирубина крови равна 196,6 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 17 ед. (норма 4), АлАТ 6,6 мМ/л -ч (норма 0,68),

С учетом выставленного диагноза больному проводят интенсивную дезинтоксика- ционную терапию.

Пример 4. Больная В., поступила в инфекционную больницу с жалобами на слабость, тошноту, желтую окраску кожи и склер глаз.

При поступлении общее состояние удовлетворительное Кожные покровы м видимые слизистые умеренно желтушны. В легких везикулярное дыхание. Пульс 68 уд./мин АД 100/70 мм рт.ст. Тоны сердца приглушены. Живот мягкий, болезненный в эпигастрии. Печень выступает из-под края правой реберной дуги на 1 см Моча темная.

Определяют в мембранах эритоциты ОА. У больной она равна 27.1 % (определеие заняло 48 мин). Данный уровень АОА озволяет диагностировать вирусный гепаит легкой степени тяжести. Концентрация бщего билирубина крови равна 51,3 мкМ/л норма 20,5), тимоловая проба 8 ед. (норма ), АлАТ 5,6 мМ/л -ч (норма 0,68).

В соответствии с установленной степенью тяжести вирусного гепатита больной проводят лечение.

Пример 5. Больная X., поступила в стационар на 5-й день болезни с жалобами на снижение аппетита и иктеричность склер.

При поступлении состояние удовлетворительное. Кожные покровы обычной окраски, склеры субиктеричны. В легких и сердце - без патологических изменений. Пульс 86 уд /мин, ад 100/60 мм рт.ст. Живот мягкий, безболезненный. Печень пропаль- пировать не удалось. Моча со слов больной темного цвета.

Определяют АОА мембран эритроцитов у больной, которая равна 37,0%, что указывает на легкую степень тяжести вирусного гепатита (определение АОА заняло 51 мин). Концентрация общего билирубина крови равна 22,2 мкМ/л (норма 20,5), тимоловая проба 7 ед. (норма 4), АлАТ 6,44 мкМ/л-ч (норма 0,68).

Больной проводят адекватную терапию.

Примеры, доказывающие возможность осуществления изобретения в граничных значениях АОА у больных вирусным гепатитом средней степени тяжести.

Пример 6. Больная Р., поступила в инфекционную больницу с жалобами на снижение аппетита, желтушную окраску кожи и склер глаз, слабость.

Общее состояние средней тяжести. Кожа и склеры глаз желтушны. В легких и сердце - без патологии, Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает из-под правой реберной дуги на 2 см. Моча тем- ная, кал светлый.

АОА мембран эритроцитов данной больной равна 17,90%, определение заняло 50 мин. Выставляется диагноз: вирусный гепатит средней степени тяжести. Общий билирубин крови равен 115,4 мкМ/л, тимоловая проба 2,5 ед., АлАТ 6,7, мМ/л -ч.

Больной назначено соответствующее лечение.

Пример 7. Больной Ж., поступил в стационар с жалобами на тошноту, рвоту, снижение аппетита, потемнение мочи.

При поступлении общее состояние средней тяжести. Кожа и видимые слизистые желтушны. Живот мягкий, безболезненный. Печень выступает из-под правой

реберной дуги на 2 см. Моча темная.

Определяют АОА мембран эритроцитов, которая у больного равна 26,0 (определение заняло 47 мин), что позволяет выставить диагноз вирусного гепатита средней степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 96,6 мкМ/л, тимоловая проба 12 ед., АлАТ 6,8 мМ/л -ч.

В соответствии с выставленным диагнозом проводят необходимое лечение.

Примеры, доказывающие возможность

осуществления изобретения в граничных значениях АОА у больных вирусным гепатитом тяжелой степени тяжести.

Пример 8. Больной М., поступил в

стационар с жалобами на отсутствие аппетита, тошноту, ноющие боли в правом подреберье, темную мочу, желтушность кожи и склер.

Общее состояние тяжелое. Кожные покровы и видимые слизистые интенсивно желтушны. В легких везикулярное дыхание. Пульс 72 уд./мин, АД 115/60 мм рт.ст. Сердечные тоны приглушены. Живот мягкий, болезненный в эпигастрии, печень выступает из-под правой реберной дуги на 5 см. Моча темная.

АОА мембран эритроцитов у больного составила 9,5% (опредоление заняло 49 МРИ), что указывает на вирусный гепатит тяжелой

степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 34,0 мкМ/л, тимоловая пооба 5,0 ед. АлАТ 7 2с мМ/л ч

Больному назначается соотектствую- щзя терапия.

П р и м е р 9. Больной Г,, поступил с

жалобами на тошноту, рвоту, общую слабость, головную боль, желтушность кожи и склер глаз, снижение аппетита.

При поступлении общее состояние тяжелое. Кожа и склеры глаз желтушиы. В легких и сердце - без патологических изменений. Живот мягкий, безболезненный при пальпации. Печень выступает из-под правого края реберной дуги на 4 см. Моча

темная.

Определяют АОА мембран эритроцитов у больного, которая равна 16,6% (определение заняло 50 мин), что позволило выставить диагноз: вирусный гепатит тяжелой

степени тяжести. Концентрация общего билирубина крови равна 188.1 мкМ/л, тимоловая проба 27 ед., АлАТ 6,72 мМ/л -ч.

В соответствии с выставленным диагнозом проводят адекватную терапию.

Предлагаемым способом произведено определение степени тяжести вирусного гепатита у 52 больных. Контролем служили показатели у 18 практически здоровых лиц. Полученные результаты сравнивали с результатами при использовании известного способа. Результаты представлены в таблице.

Повышение точности предлагаемого способа обусловлено тем, что соотношение показателей между легкой и средней степени тяжести вирусного гепатита в предлагаемом способе на 14,4% превышает аналогичное соотношение в известном способе, а между средней и тяжелой степенями заболевания - на 23,6%.

Достигается также сокращение времени определения степени тяжести вирусного гепатита: при использовании известного требуется не менее 1,5-2 ч, в то время как по предлагаемому способу определяют степень тяжести вирусного гепатита в пределах 40-50 мин, т.е. в 1,5-2 раза скорее.

0

5

0

5

Таким образом, преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что существенно ускоряется диагностика и повышается ее точность.

Благодаря быстрому и точному установлению степени тяжести вирусного гепатита по АОА мембран эритроцитов больным своевременно назначают необходимое лечение.

Формула изобретения

Способ оценки степени тяжести вирусного гепатита, включающий исследование крови больных гепатитом, отличающий- с я тем, что, с целью ускорения способа при одновременном повышении его точности, получают мембраны эритроцитов, определяют их антиокислительную активность в модели железоиндуцируемого окисления олеиновой кислоты по изменению быстрой вспышки хемилюминесценции и при величине антиокислительной активности более 27% степень тяжести вирусного гепатита оценивают как легкую, от 17 до 26% - как среднюю, менее 16% - как тяжелую.