СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ ФЕРТИЛЬНОСТИ У МУЖЧИН Российский патент 2008 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики и лечения мужского бесплодия.

По данным литературы классическим методом оценки мужской фертильности является лабораторная оценка концентрации, морфологии и подвижности сперматозоидов по детально разработанным критериям ВОЗ [WHO laboratory manual for the examination of human sperm and semen-cervical mucus interaction. - WHO, 4-th edn.: Cambridqe univerciti pres; 1999. - 128 p.]. Однако механистическая трактовка клинической спермограммы далеко не всегда соответствует реальному состоянию мужской фертильности. Известны случаи бесплодия при нормозооспермии [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 1. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.72-77]. Кроме того, констатация состоявшихся нарушений спермограммы свидетельствует об уже произошедших процессах и не имеет большого прогностического значения на практике.

Божедомов В.А. с соавт. (2001) [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 2. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.78-87] предлагал использовать в качестве прогностического критерия определение относительного количества подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами (АСАТ). По их мнению, негативный прогноз фертильности констатируется при превышении указанным показателем уровня в 10%. В качестве методов детекции сперматозоидов, покрытых АСАТ, предлагалось применение проточной цитофлуорометрии или MAR (mixer agglutination reaction) [Jager S., Kremer J., van Sloshteren-Draaisma T.A simple method of screening for antisperm antibodies in the human male. Int. J. Fertil. - 1978. - V.23. - P.12-21]. Однако нарушение фертильности вследствие появления АСАТ в сперме является частной причиной мужского бесплодия, встречается при ряде заболеваний и не носит универсального характера.

По мнению Fujisawa М. и Ishikawa Т. (2003) [Fujisawa M, Ishikawa T. Soluble forms of Fas and Fas ligand concentrations in the seminal plasma of infertile men with varicocele. J. Urol. 2003 Dec; 170 (6 Pt 1): 2363 - 5], ключевым физиологическим регулятором, лимитирующим размер популяции герминативных клеток в яичке, является апоптоз. Имеется высокая достоверная корреляция между апоптозом спермы и мужским бесплодием. Наиболее распространенный метод идентификации клеток, вступивших на путь апоптоза, состоит в обнаружении свободных 3-ОН концов в разорванных молекулах фрагментированной ДНК с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT). Известный по сокращенному названию TUNEL (TdT-mediated nick end labeling), этот метод дает возможность определять апоптотические клетки не только in vivo, но и подсчитывать их в суспензиях с помощью проточной цитофлуорометрии или радиометрии [Gavrivlly Y., Shrman Y., Bensasson S.A. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. J. Cell. Biol. - 1992, vol.119, p.493-501].

Этот способ был избран в качестве прототипа.

Предлагаемый способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин основан на иммунологическом исследовании спермы и заключается в вычислении специального индекса, рассчитываемого как отношение относительного количества лимфоцитов эякулята с фенотипом CD25+ к лимфоцитам с фенотипом CD95+, определяемых методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител анти-СD25 и анти-СD95.

Технический результат предлагаемого способа заключается в повышении точности прогнозирования результатов консервативного лечения бесплодия у мужчин на основе анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте. Позитивный прогноз мужской фертильности констатируется при значении данного соотношения от 0,71 до 1,20. При выходе показателя за указанные пределы прогноз фертильности неблагоприятен.

Предлагаемый способ использован в процессе обследования 24 мужчин, обратившихся по поводу бесплодного брака. Результаты исследований сведены в таблицу.

После применения предлагаемого способа прогнозирования мужского бесплодия, точный прогноз результатов лечения был определен у всех обратившихся, причем прогноз, установленный на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте (заявляемый способ), совпал с прогнозом, базирующимся на основании контрольного обследования пациентов после лечения.

Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте предлагается способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин.

Примеры из практики клинического применения способа.

Пример 1

Больной Ж., 32 года.

Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности, мошонке, нижних отделах живота.

Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2 лет, ранее не лечился. Супруге 28 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.

Объективно: Гиперстеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы без особенностей.

Осмотр per rectum: Простата нормальных размеров и формы, несколько тестоватой консистенции, умеренно болезненная при пальпации.

УЗИ простаты, мочевого пузыря, семенных пузырьков и мошонки: Мочевой пузырь с ровным внутренним контуром, физиологической емкости. Простата с четкими контурами, размеры 28×40×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры: левый 11 мм, правый 9 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна, эхоплотность равномерная. Размеры яичек: правое 37×20 мм, левое 39×23 мм.

Мазок из уретры:

Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения

Эпителий полиморфный - ++

Tr - не выявлено

Gn - не выявлено

Секрет простаты:

Лейкоциты: 20-25 в поле зрения,

Эритроциты - нет

Лецитиновые зерна - ++

Спермограмма:Объем эякулята3,5 млВязкостьNЛейкоцитыЕдиничныеСперматогенный эпителий1%Количество сперматозоидов в 1 мл150000000Подвижность категории А0%Подвижность категории В40%Подвижность категории С35%Подвижность категории D25%Патологические формы75%Иммунограмма эякулята.ПоказательЛимфоциты, %CD25+8,2CD95+8,86CD25+/CD95+0,93

ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.

Бактериологический анализ секрета простаты:

Sthaemolit. - <10² - КОЕ\мл.

Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.

Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, нимесулид, доксазозин, эскузан, массаж простаты).

Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения):Количество спермы5 млВязкостьNЛейкоцитыЕдиничныеСперматогенный эпителий2%Количество сперматозоидов в 1 мл155000000Подвижность категории А15%Подвижность категории В38%Подвижность категории С30%Подвижность категории D17%Патологические формы71%

Из эпикриза:

Больной Ж., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения достигнута положительная динамика показателей спермограммы.

Из катамнеза: через 8 мес после завершения курса лечения в семейной паре наступило спонтанное зачатие.

Пример 2

Больной К., 29 лет.

Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности и мошонке, учащение мочеиспусканий.

Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2,5 лет, ранее не лечился. Супруге 27 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.

Объективно: Нормостеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы развиты правильно, без особенностей.

Осмотр per rectum: Простата умеренно увеличена, несколько тестоватой консистенции, болезненная при пальпации.

УЗИ простаты, семенных пузырьков и мошонки: Простата с четкими контурами, размеры 35×36×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры:

левый 10 мм, правый 8 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна. Размеры яичек: правое 35×22 мм, левое 34×23 мм.

Мазок из уретры:

Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения

Эпителий полиморфный - ++

Tr - не выявлено

Gn - не выявлено

Секрет простаты:

Лейкоциты: 20-25-30 в поле зрения,

Эритроциты - нет

Лецитиновые зерна - ++

Спермограмма: Объем эякулята3,5 млВязкостьNЛейкоцитыЕдиничныеСперматогенный эпителий1%Количество сперматозоидов в 1 мл145000000Подвижность категории А5%Подвижность категории В30%Подвижность категории С40%Подвижность категории D25%Патологические формы76%

ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.

Бактериологический анализ секрета простаты:

St.epidermid. - <10² - КОЕ\мл

Иммунограмма эякулята.ПоказательЛимфоциты, %CD25+7,91CD95+3,05CD25+/CD95+2,59

Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.

Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, доксазозин, эскузан, свечи с индометацином, массаж простаты).

Из эпикриза:

Больной К., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения несмотря на клиническое улучшение, не достигнута положительная динамика показателей спермограммы.

Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения):Количество спермы4 млВязкостьNЛейкоцитыЕдиничныеСперматогенный эпителий2%Количество сперматозоидов в 1 мл153000000Подвижность категории А5%Подвижность категории В28%Подвижность категории С32%Подвижность категории D35%Патологические формы77%

Из катамнеза: через 12 мес. после завершения курса лечения зачатие не наступило. Рекомендована консультация врача-репродуктолога для решения вопроса о направлении семейной пары на ВРТ.

Таблица 1Способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин. Величина соотношения CD25+/CD95+ в эякуляте у наблюдаемых мужчин и взаимосвязь этого показателя с результатами лечения.№CD25+/CD95+Характеристика спермограммы после леченияФертильность10,28без измененийбесплодный брак20,42ухудшениебесплодный брак30,45ухудшениебесплодный брак40,48без измененийбесплодный брак50,50без измененийбесплодный брак60,52без измененийбесплодный брак70,65без измененийбесплодный брак80,71улучшениефертилен90,73улучшениефертилен100,74улучшениефертилен110,76улучшениефертилен120,84улучшениефертилен130,88улучшениефертилен140,92улучшениефертилен150,93улучшениефертилен161,00улучшениефертилен171,20улучшениефертилен181,22без измененийбесплодный брак191,36ухудшениебесплодный брак201,63ухудшениебесплодный брак211,77без измененийбесплодный брак222,04без измененийбесплодный брак232,48ухудшениебесплодный брак243,75без измененийбесплодный брак

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для прогнозирования нарушений фертильности у мужчин. Сущность способа: у мужчин путем проточной цитометрии спермы исследуют соотношение лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+. При его значениях менее 0,71 и более 1,20 прогноз фертильности признается неблагоприятным. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования результатов консервативного лечения бесплодия у мужчин. 1 табл.

Способ прогнозирования мужского бесплодия путем проточной цитометрии спермы, отличающийся тем, что исследуют соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте, и при его значениях менее 0,71 и более 1,20 прогноз фертильности признается неблагоприятным.