4-(4'-ГИДРОКСИБУТИЛ)-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОН Российский патент 2009 года по МПК C07D487/04 A61P31/12 

Описание патента на изобретение RU2345080C2

1. Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она, обладающего противовирусным действием, предназначенного для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных вирусной природы. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.

2. Уровень техники.

Актуальность проблемы противовирусной терапии в условиях мутации вирусов, выявления новых возбудителей опасных и медленных вирусных инфекций, вызывает потребность в новых эффективных противовирусных средствах. В настоящее время наиболее перспективной группой противовирусных препаратов, эффективных в отношении вирусов герпеса, гепатитов и проч. являются ациклические нуклеозиды - АЦИКЛОВИР, ГАНЦИКЛОВИР, ФАМЦИКЛОВИР и проч. (Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. 14-е изд. М.: Новая волна. 2000. Т.1, 2.; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Под ред. Г.Л.Вышковского. М.: ООО РЛС-2004. 2004. 1503 с.), являющиеся структурными аналогами природных нуклеозидов пуринового ряда и ингибиторами ферментов синтеза нуклеиновых кислот.

В то же время, имеются данные о противовирусном действии 6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (Синтез и противовирусная активность 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидроазоло [5,1-с][1,2,4]триазинов. В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, О.Н.Чупахин, М.М.Зубаиров, А.Б.Капустин, Н.И.Митин и др. / Химико-фармацевтический журнал. №9, 1990, с.41-44), являющихся структурными аналогами пуринов.

Данные о противовирусной активности ациклических нуклеозидов на основе азоло[5,1-с]-1,2,4-триазинов отсутствуют.

3. Сущность изобретения.

Сущность изобретения составляет 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1),

4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

4.1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (1)

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) синтезируют в соответствии со следующей схемой (схема 1).

Исходным соединением для синтеза 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) является 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3). Действием карбоната натрия на соединение (3) получают натриевую соль 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (3), которую затем алкилируют 4-бромбутилацетатом в диметилформамиде (ДМФА) с образованием 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Обработка соединения (2) раствором метилата натрия в метаноле приводит к гидролизу ацетоксильной группы с образованием заявляемого соединения (1).

4.2. Биологическое действие 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)

Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовался вирус простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1) штамм ЕС, полученный из коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Ивановского и культура клеток почки зеленой мартышки - Vero, полученная из Банка клеточных культур НИИ гриппа РАМН.

В качестве контрольного препарата использовали ацикловир в концентрации 50 мкг/мл, который полностью ингибировал развитие вирусного цитопатического действия (ЦПД) во всех разведениях на протяжении всего эксперимента.

Пример 1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (2). 6-Фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3) 2,13 г (0,01 моль) обрабатывают раствором 1,1 (0,01 моль) г Na2СО3 в 7 мл воды. Образовавшуюся суспензию фильтруют, осадок соли (4) сушат. Сухую соль (4) растворяют в 10 мл ДМФА, добавляют 1,95 г (0,01 моль) 4-бромбутилацетата и выдерживают 3 ч при температуре 100°С. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 250 мл воды, выпавший осадок отфильтровывают, кристаллизуют из изопропилового спирта и сушат на воздухе. Выход 2,1 г (64%).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (2) имеет следующие характеристики: ТПЛ 74°С; Rf=0,65 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,69-1,80 (2Н, м, CH2), 1,96-2,10 (2Н, м, СН2), 1,97 (3Н, с, СОСН3), 4,06 (2Н, т, ОСН2), 4,46 (2Н, т, NCH2), 7,45-7,49 (3Н, м, C6H5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,3 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,68, Н - 5,12, N - 21,36%. Брутто-формула - С16Н17N5O3. Вычислено: С - 58,71, Н - 5,23, N - 21,39%.

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4]триазин-7-она (1). К раствору 0,14 г (0,006 моль) металлического натрия в 15 мл абсолютного метанола добавляют 2,1 г (0,006 моль) 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Реакционную массу кипятят 0,5 ч, охлаждают до комнатной температуры, добавляют ледяной уксусной кислоты до нейтральной реакции и упаривают в вакууме при 100°С. Остаток хроматографируют на силикагеле марки Kieselgel 60 с использованием этилацетата (100%) в качестве элюента и выделяют 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с] [1,2,4] триазин-7-он (1). Выход 1,27 г (70%).

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) имеет следующие характеристики: ТПЛ 84°C; Rf=0,25 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,50-1,61 (2Н, м, СН2), 1,96-2,07 (2Н, м, CH2), 3,46 (2Н, к, ОСН2), 4,19 (1Н, т, ОН), 4,44 (2Н, т, NCH2), 7,44-7,47 (3Н, м, С6Н5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,25 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,94, Н - 5,33, N - 24,57%. Брутто-формула - С14Н15N5O2. Вычислено: С - 58,94, Н - 5,30, N - 24,55.

Заявляемое соединение (1) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ацетоне, хлороформе, этилацетате, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, малорастворимое в воде, метаноле, этаноле, нерастворимое в бензоле и большинстве апротонных растворителей.

Пример 2. Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) проводили на культуре клеток MDCK в культуре, которая определялась по состоянию клеточного монослоя в инвертированном микроскопе после 3-суточной инкубации с препаратом. В результате была определена МТД (минимальная токсическая дозы) 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1). Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовали половинную концентрацию от МТД.

Пример 3. Определение противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

1. Клетки Vero и 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) культивировали в 96-луночных планшетах для клеточных культур при 37°С в атмосфере 5% CO2 до состояния монослоя. Вещество в удвоенной концентрации в объеме 100 мкл/лунка было добавлено к клеткам, через 20 минут был внесен ВПГ-1 в разведения 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 в том же объеме. Клетки инкубировали с вирусом 72 часа, после чего учитывали развитие вирусного ЦПД.

2. По истечении 120 часов количество живых клеток было подсчитано при помощи микротетразолиевого теста (МТТ), характеризующего митохондриальную активность клеток. С этой целью клетки дважды отмывали фосфатно-солевым буфером и в лунки добавляли по 100 мкл раствора (0,2 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифинилтетразолия бромида в 0,15М NaCl. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 часов до появления характерного фиолетового осадка и затем трижды отмывали фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в ДМСО (10 мкл/лунка), после чего измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра при длине волны λ=535 нм.

Наблюдение развития цитопатического действия ВПГ-1 показало, что через 72 часа во всех планшетах в контроле вируса в разведении 10-3 более 90% клеток имели характерные изменения, в разведении 10-4 около 60% клеток, в разведении 10-5 - менее 20% и в разведении 10-6 цитопатическое действие вируса не наблюдалось.

Через 120 часов наблюдалась массовая гибель клеток в контроле вируса, что позволило провести МТТ-тест.

Во всех планшетах с добавлением заявляемого соединения (4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)) наблюдалось снижение цитапатогенного действия ВПГ-1. Так, в эксперименте в разведении вируса в 10-3 75% клеток имели характерные изменения, разведение 10-4 - 38%, разведение 10-5 - 20% (таблица 1).

Таблица 1Результаты испытаний противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с]{1,2,4]триазин-7-он в отношении вируса простого герпеса. Среднее значения оптической плотности (интенсивности клеточного дыхания) по результатам МТТ-теста.ПрепаратКонцентрация препарата, мкг/млТитр вируса, lg (ТЦД50)/мл10-310-410-510-64-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он300,1240,2520,2840,287Ацикловир500,3070,3150,3160,303Контроль вируса0,0440,0750,1520,343Контроль клеток0,347

Похожие патенты RU2345080C2

название год авторы номер документа
4-((Z)-4'-ГИДРОКСИБУТЕН-2'-ИЛ)-2-R-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОНЫ 2008
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Шестакова Татьяна Сергеевна
  • Деев Сергей Леонидович
  • Русинова Лариса Ивановна
  • Андронова Валерия Львовна
  • Галегов Георгий Артемьевич
  • Карпенко Инна Леонидовна
  • Ясько Максим Владимирович
  • Куханова Марина Константиновна
RU2376307C1
6-(2'-АМИНО-2'-КАРБОКСИЭТИЛТИО)-2-МЕТИЛТИО-4-ПИВАЛОИЛОКСИМЕТИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]1,2,4-ТРИАЗИН-7(4Н)-ОН 2011
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Медведева Наталья Розыевна
  • Киселев Олег Иванович
  • Деева Элла Германовна
RU2455304C1
2-R-4-(АЛЛИЛОКСИМЕТИЛ)-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-С]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4Н)-ОНЫ И 2-R-4-(ПРОПАРГИЛОКСИМЕТИЛ)-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-С]-1,2,4-ТРИАЗИН7(4Н)-ОНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ 2006
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Деев Сергей Леонидович
  • Русинова Лариса Ивановна
  • Шестакова Татьяна Сергеевна
  • Киселев Олег Иванович
  • Деева Элла Германовна
RU2340614C2
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-ПРОПИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ И НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-БУТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ 2008
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Медведева Наталья Розыевна
  • Киселев Олег Иванович
  • Деева Элла Германовна
  • Синяшин Олег Герольдович
  • Мамедов Вахид Абдулла-Оглы
RU2402552C2
3-Нитро-4-гидрокси-7-пропаргилтио-[1,2,4]триазоло[5,1c][1,2,4]триазин и 3-нитро-4-гидрокси-7-этилтио-[1,2,4]триазоло[5,1c][1,2,4]триазин, обладающие противовирусной активностью 2019
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Дрокин Роман Александрович
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Саватеев Константин Валерьевич
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Зарубаев Владимир Викторович
  • Волобуева Александра Сергеевна
  • Ланцева Кристина Сергеевна
RU2775551C2
Диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат и диметил 7-метил-2-(4-R-фенил)-4-(4-R-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты, обладающие противовирусной активностью 2021
  • Мочульская Наталия Николаевна
  • Котовская Светлана Константиновна
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Зарубаев Владимир Викторович
  • Волобуева Александрина Сергеевна
RU2790376C1
КОНЪЮГАТЫ 2-МЕТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4I')-ОНА С ГЛУТАТИОНОМ И ДРУГИМИ ПЕПТИДАМИ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2012
  • Киселев Олег Иванович
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Деева Элла Германовна
RU2516936C2
3-Бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол, синтез, противогерпесвирусное действие 2023
  • Константинова Ирина Дмитриевна
  • Фатеев Илья Владимирович
  • Андронова Валерия Львовна
  • Есипов Роман Станиславович
  • Мирошников Анатолий Иванович
  • Сасмаков Собирджан Анарматович
  • Азимова Шахноз Садыковна
  • Абдурахманов Жалолиддин Мирджамильевич
  • Зияев Абдухаким Анварович
  • Долимов Хаётжон Хакимжон Угли
RU2815137C1
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-ЭТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ 2008
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Чарушин Валерий Николаевич
  • Медведева Наталья Розыевна
  • Киселев Олег Иванович
  • Деева Элла Германовна
  • Логинова Светлана Яковлевна
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Бондарев Владимир Петрович
RU2404182C2
2-МЕТИЛСУЛЬФАНИЛ-6-НИТРО-7-ОКСО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c] [1,2,4]ТРИАЗИНИД L-АРГИНИНИЯ ДИГИДРАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА 2013
  • Чупахин Олег Николаевич
  • Русинов Владимир Леонидович
  • Уломский Евгений Нарциссович
  • Саватеев Константин Валерьевич
  • Борисов Степан Сергеевич
  • Новикова Наталья Александровна
  • Логинова Светлана Яковлевна
  • Борисевич Сергей Владимирович
  • Сорокин Павел Владимирович
RU2536874C1

Реферат патента 2009 года 4-(4'-ГИДРОКСИБУТИЛ)-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОН

Описывается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1), обладающий противовирусным действием,

который может найти применение в медицине и сельском хозяйстве. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 345 080 C2

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2009 года RU2345080C2

RU 2058307 C1, 20.04.1996
АММОНИЕВАЯ СОЛЬ 2-(4- ПИРИДИЛ)-6- НИТРО-7-ОКСО -4,7-ДИГИДРО- 1,2,4-ТРИАЗОЛО [5,1-C] [1,2,4] ТРИАЗИНА, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 1987
  • Чупахин О.Н.
  • Русинов В.Л.
  • Уломский Е.Н.
  • Львов Д.К.
  • Березина Л.К.
SU1473303A1
ФУНГИЦИДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ПРОИЗВОДНЫЕ ТРИАЗОЛОПИРИМИДИНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ БОРЬБЫ С ГРИБКАМИ 1994
  • Клаус-Юрген Пеес
  • Хайнц-Манфред Бехер
RU2130459C1
Русинов В.Л
и др
Химико-фармацевтический журнал, №9, 1990, с.41-44.

RU 2 345 080 C2

Авторы

Русинов Владимир Леонидович

Чупахин Олег Николаевич

Уломский Евгений Нарциссович

Чарушин Валерий Николаевич

Шестакова Татьяна Сергеевна

Лукьянова Людмила Сергеевна

Деев Сергей Леонидович

Киселев Олег Иванович

Деева Элеонора Германовна

Русинова Лариса Ивановна

Даты

2009-01-27Публикация

2007-02-16Подача