1. Область техники, к которой относится изобретение.
Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она, обладающего противовирусным действием, предназначенного для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных вирусной природы. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.
2. Уровень техники.
Актуальность проблемы противовирусной терапии в условиях мутации вирусов, выявления новых возбудителей опасных и медленных вирусных инфекций, вызывает потребность в новых эффективных противовирусных средствах. В настоящее время наиболее перспективной группой противовирусных препаратов, эффективных в отношении вирусов герпеса, гепатитов и проч. являются ациклические нуклеозиды - АЦИКЛОВИР, ГАНЦИКЛОВИР, ФАМЦИКЛОВИР и проч. (Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. 14-е изд. М.: Новая волна. 2000. Т.1, 2.; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Под ред. Г.Л.Вышковского. М.: ООО РЛС-2004. 2004. 1503 с.), являющиеся структурными аналогами природных нуклеозидов пуринового ряда и ингибиторами ферментов синтеза нуклеиновых кислот.
В то же время, имеются данные о противовирусном действии 6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (Синтез и противовирусная активность 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидроазоло [5,1-с][1,2,4]триазинов. В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, О.Н.Чупахин, М.М.Зубаиров, А.Б.Капустин, Н.И.Митин и др. / Химико-фармацевтический журнал. №9, 1990, с.41-44), являющихся структурными аналогами пуринов.
Данные о противовирусной активности ациклических нуклеозидов на основе азоло[5,1-с]-1,2,4-триазинов отсутствуют.
3. Сущность изобретения.
Сущность изобретения составляет 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1),
4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
4.1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (1)
4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) синтезируют в соответствии со следующей схемой (схема 1).
Исходным соединением для синтеза 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) является 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3). Действием карбоната натрия на соединение (3) получают натриевую соль 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (3), которую затем алкилируют 4-бромбутилацетатом в диметилформамиде (ДМФА) с образованием 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Обработка соединения (2) раствором метилата натрия в метаноле приводит к гидролизу ацетоксильной группы с образованием заявляемого соединения (1).
4.2. Биологическое действие 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)
Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовался вирус простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1) штамм ЕС, полученный из коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Ивановского и культура клеток почки зеленой мартышки - Vero, полученная из Банка клеточных культур НИИ гриппа РАМН.
В качестве контрольного препарата использовали ацикловир в концентрации 50 мкг/мл, который полностью ингибировал развитие вирусного цитопатического действия (ЦПД) во всех разведениях на протяжении всего эксперимента.
Пример 1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).
4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (2). 6-Фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3) 2,13 г (0,01 моль) обрабатывают раствором 1,1 (0,01 моль) г Na2СО3 в 7 мл воды. Образовавшуюся суспензию фильтруют, осадок соли (4) сушат. Сухую соль (4) растворяют в 10 мл ДМФА, добавляют 1,95 г (0,01 моль) 4-бромбутилацетата и выдерживают 3 ч при температуре 100°С. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 250 мл воды, выпавший осадок отфильтровывают, кристаллизуют из изопропилового спирта и сушат на воздухе. Выход 2,1 г (64%).
4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (2) имеет следующие характеристики: ТПЛ 74°С; Rf=0,65 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,69-1,80 (2Н, м, CH2), 1,96-2,10 (2Н, м, СН2), 1,97 (3Н, с, СОСН3), 4,06 (2Н, т, ОСН2), 4,46 (2Н, т, NCH2), 7,45-7,49 (3Н, м, C6H5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,3 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,68, Н - 5,12, N - 21,36%. Брутто-формула - С16Н17N5O3. Вычислено: С - 58,71, Н - 5,23, N - 21,39%.
4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4]триазин-7-она (1). К раствору 0,14 г (0,006 моль) металлического натрия в 15 мл абсолютного метанола добавляют 2,1 г (0,006 моль) 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Реакционную массу кипятят 0,5 ч, охлаждают до комнатной температуры, добавляют ледяной уксусной кислоты до нейтральной реакции и упаривают в вакууме при 100°С. Остаток хроматографируют на силикагеле марки Kieselgel 60 с использованием этилацетата (100%) в качестве элюента и выделяют 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с] [1,2,4] триазин-7-он (1). Выход 1,27 г (70%).
4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) имеет следующие характеристики: ТПЛ 84°C; Rf=0,25 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 δ, м.д.: 1,50-1,61 (2Н, м, СН2), 1,96-2,07 (2Н, м, CH2), 3,46 (2Н, к, ОСН2), 4,19 (1Н, т, ОН), 4,44 (2Н, т, NCH2), 7,44-7,47 (3Н, м, С6Н5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H5), 8,25 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,94, Н - 5,33, N - 24,57%. Брутто-формула - С14Н15N5O2. Вычислено: С - 58,94, Н - 5,30, N - 24,55.
Заявляемое соединение (1) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ацетоне, хлороформе, этилацетате, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, малорастворимое в воде, метаноле, этаноле, нерастворимое в бензоле и большинстве апротонных растворителей.
Пример 2. Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).
Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) проводили на культуре клеток MDCK в культуре, которая определялась по состоянию клеточного монослоя в инвертированном микроскопе после 3-суточной инкубации с препаратом. В результате была определена МТД (минимальная токсическая дозы) 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1). Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовали половинную концентрацию от МТД.
Пример 3. Определение противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).
1. Клетки Vero и 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) культивировали в 96-луночных планшетах для клеточных культур при 37°С в атмосфере 5% CO2 до состояния монослоя. Вещество в удвоенной концентрации в объеме 100 мкл/лунка было добавлено к клеткам, через 20 минут был внесен ВПГ-1 в разведения 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 в том же объеме. Клетки инкубировали с вирусом 72 часа, после чего учитывали развитие вирусного ЦПД.
2. По истечении 120 часов количество живых клеток было подсчитано при помощи микротетразолиевого теста (МТТ), характеризующего митохондриальную активность клеток. С этой целью клетки дважды отмывали фосфатно-солевым буфером и в лунки добавляли по 100 мкл раствора (0,2 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифинилтетразолия бромида в 0,15М NaCl. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 часов до появления характерного фиолетового осадка и затем трижды отмывали фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в ДМСО (10 мкл/лунка), после чего измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра при длине волны λ=535 нм.
Наблюдение развития цитопатического действия ВПГ-1 показало, что через 72 часа во всех планшетах в контроле вируса в разведении 10-3 более 90% клеток имели характерные изменения, в разведении 10-4 около 60% клеток, в разведении 10-5 - менее 20% и в разведении 10-6 цитопатическое действие вируса не наблюдалось.
Через 120 часов наблюдалась массовая гибель клеток в контроле вируса, что позволило провести МТТ-тест.
Во всех планшетах с добавлением заявляемого соединения (4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)) наблюдалось снижение цитапатогенного действия ВПГ-1. Так, в эксперименте в разведении вируса в 10-3 75% клеток имели характерные изменения, разведение 10-4 - 38%, разведение 10-5 - 20% (таблица 1).
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
4-((Z)-4'-ГИДРОКСИБУТЕН-2'-ИЛ)-2-R-6-ФЕНИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c][1,2,4]ТРИАЗИН-7-ОНЫ | 2008 |
|
RU2376307C1 |
6-(2'-АМИНО-2'-КАРБОКСИЭТИЛТИО)-2-МЕТИЛТИО-4-ПИВАЛОИЛОКСИМЕТИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]1,2,4-ТРИАЗИН-7(4Н)-ОН | 2011 |
|
RU2455304C1 |
2-R-4-(АЛЛИЛОКСИМЕТИЛ)-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-С]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4Н)-ОНЫ И 2-R-4-(ПРОПАРГИЛОКСИМЕТИЛ)-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-С]-1,2,4-ТРИАЗИН7(4Н)-ОНЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ | 2006 |
|
RU2340614C2 |
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-ПРОПИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ И НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-н-БУТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-с]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ | 2008 |
|
RU2402552C2 |
3-Нитро-4-гидрокси-7-пропаргилтио-[1,2,4]триазоло[5,1c][1,2,4]триазин и 3-нитро-4-гидрокси-7-этилтио-[1,2,4]триазоло[5,1c][1,2,4]триазин, обладающие противовирусной активностью | 2019 |
|
RU2775551C2 |
Диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат и диметил 7-метил-2-(4-R-фенил)-4-(4-R-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты, обладающие противовирусной активностью | 2021 |
|
RU2790376C1 |
КОНЪЮГАТЫ 2-МЕТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]-1,2,4-ТРИАЗИН-7(4I')-ОНА С ГЛУТАТИОНОМ И ДРУГИМИ ПЕПТИДАМИ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 2012 |
|
RU2516936C2 |
3-Бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол, синтез, противогерпесвирусное действие | 2023 |
|
RU2815137C1 |
НАТРИЕВАЯ СОЛЬ 2-ЭТИЛТИО-6-НИТРО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c]-1,2,4-ТРИАЗИН-7-ОНА ДИГИДРАТ | 2008 |
|
RU2404182C2 |
2-МЕТИЛСУЛЬФАНИЛ-6-НИТРО-7-ОКСО-1,2,4-ТРИАЗОЛО[5,1-c] [1,2,4]ТРИАЗИНИД L-АРГИНИНИЯ ДИГИДРАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА | 2013 |
|
RU2536874C1 |
Описывается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1), обладающий противовирусным действием,
который может найти применение в медицине и сельском хозяйстве. 1 табл.
4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он
RU 2058307 C1, 20.04.1996 | |||
АММОНИЕВАЯ СОЛЬ 2-(4- ПИРИДИЛ)-6- НИТРО-7-ОКСО -4,7-ДИГИДРО- 1,2,4-ТРИАЗОЛО [5,1-C] [1,2,4] ТРИАЗИНА, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 1987 |
|
SU1473303A1 |
ФУНГИЦИДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ПРОИЗВОДНЫЕ ТРИАЗОЛОПИРИМИДИНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ БОРЬБЫ С ГРИБКАМИ | 1994 |
|
RU2130459C1 |
Русинов В.Л | |||
и др | |||
Химико-фармацевтический журнал, №9, 1990, с.41-44. |
Авторы
Даты
2009-01-27—Публикация
2007-02-16—Подача