АММОНИЕВАЯ СОЛЬ 2-(4- ПИРИДИЛ)-6- НИТРО-7-ОКСО -4,7-ДИГИДРО- 1,2,4-ТРИАЗОЛО [5,1-C] [1,2,4] ТРИАЗИНА, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Советский патент 1994 года по МПК C07D487/04 A61K31/41 

Изобретение относится к классу производных триазоло-[5,1-c] [1,2,4]-триазина, конкретно к новой аммониевой соли 2-(4-пиридил)-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4- триазоло[5,1-c] [1,2,4]-триазина формулы I
NH+4

Целью изобретения является новое производное 1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4] -триазина, обладающее иным спектром действия по сравнению со структурным аналогом - натриевой солью 2-(4-пиридил)-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4]-триазина (II), конкретно противовирусной активностью в отношении вируса лихорадки долины Рифта (ВЛДР) - новым видом активности в классе производных 1,2,4-триазина.

П р и м е р. Растворяют 4,96 г (0,03 моль) 3-(4-пиридил)-5-амино-1,2,4-триазола в 10 мл концентрированной соляной кислоты и 5 мл воды, охлаждают до 0^оС и прикапывают раствор 2,2 г нитрита натрия в 10 мл воды в течение 5 мин, поддерживая температуру 0-5^оС. После 10 мин выдержки раствор соли диазония смешивают с раствором 3,4 г (0,03 моль) этилового эфира нитроуксусной кислоты и 10 г бикарбоната аммония в 20 мл изопропилового спирта и 5 мл воды. Перемешивают 2 ч при комнатной температуре и отфильтровывают осадок, который растворяют в 200 мл метанола, фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме до 30 мл и отделяют отсадок соединения I. Выход 5 г (60%). Т.пл. 300^оС.

Найдено, %: C 39,2; H 3,0.

C₉H₈N₈O₃.

Вычислено, %: C 39,1; H 2,9.

УФ-спектр в спирте, λ_макс (Ig ε): 242 (4,30); 360 (3,9).

ИК-спектр в вазелиновом масле, см^-1: 1340, 1520 (NO₂); 1700 (С=O).

ПМР-спектр в ДМСО, δ: уш.с. 7,1, м.д., д., 8,15 м.д., д., 8,80 м.д.

Изучение противовирусной активности соединения I и сопоставление со структурным аналогом - соединением II или базовым объектом - ремантадином проводили в опытах ин витро на перевиваемой культуре клеток почек обезьян - Vero, зараженных ВЛДР, штамм Энтеббе (сем. Буньявириде), а также ин виво в опытах на подкожно инфицированных этим вирусом белых беспородных мышах.

В каждый опыт по испытанию противовирусной активности на культуре клеток или мышах включали три группы:
инфицированные культуры клеток (мыши), которым вводили соединение I;
инфицированные культуры клеток (мыши), которым вводили структурный аналог или ремантадин;
инфицированные культуры клеток (мыши), которым вводили плацебо-физиологический раствор.

Проведенные исследования показали, что испытуемое соединение I ин витро обладает противовирусной активностью в отношении ВЛДР: тормозит репродукцию вируса в инфицированных культурах клеток на 2 lg БОЕ/0,1 мл.

В опытах на мышах испытуемое соединение I защищает на 80% животных от развития инфекции ВЛДР, вызывающей 100%-ную гибель белых мышей в контроле. При этом средняя продолжительность жизни животных увеличивается с 8,2 дня в контроле до 18,4 дня в опыте. Препарат вводили по профилактической схеме (24 ч) в концентрации 100 мг/кг (табл.1,2). Структурный аналог - соединение II - не активен в отношении инфекции ВЛДР (снижение титра вируса составляет лишь 0,1 lg БОЕ/0,1 мл, а индекс защиты в опытах на животных равен нулю). Не активен в отношении изучаемой инфекции и применяемый в медицине противовирусный препарат ремантадин (снижение инфекционного титра вируса в опытах на культуре клеток составляет 0,2 lg БОЕ/0,1 мл).

Токсичность соединений проверяли на 7-8-граммовых белых мышах при подкожном и внутримышечном введении препарата в концентрации 65; 125; 250; 500; 1000; 1500; 2000 мг/кг. Соединение малотоксично. ЛД₅₀ при подкожном введении равно 1500 мг/кг, при внутримышечном - 1000 мг/кг.

Из приведенных данных видно, что соединение I обладает новым видом активности. Соединение I сопоставимо по токсичности со структурным аналогом и менее токсично, чем ремантадин (ЛД₅₀ ремантадина 330 мг/кг). (56) Авторское свидетельство СССР N 1104828, кл. C 07 D 487/04, 1982.

Авторское свидетельство СССР N 1210416, кл. C 07 D 487/04, 1984.

Авторское свидетельство СССР N 1086739, кл. C 07 D 203/08, 1982.

Изобретение касается производных гетероциклических веществ, в частности аммониевой соли 2-(4- пиридил) -6-нитро-7-оксо- 4,7-дигидро-1,2, 4-триазоло[5,1-с] [1,2,4]триазина, обладающей противовирусной активностью. Цель - создание нового вещества указанного класса, обладающего новым для данного класса видом активности. Синтез ведут реакцией 3-(4- пиридил)-5- диазо-1,2,4- триазола, полученного диазотированием 3-(4- пиридил) -5-амино -1,2,4- триазола, с этиловым эфиром нитроуксусной кислоты в водно-спиртовом растворе биокарбоната аммония. Выход 60%, т.пл. > 300°С, брутто-формула C₉H₈N₈O₃ . Новое соединение тормозит репродукцию вируса лизорадки долины. Рифта в инфицированных культурах клеток на 2 lg БОЕ /0,1 мл и защищает на 80% белых мышей от развития указанной инфекции, вызывающей 100%-ную гибель животных в контроле. 2 табл.

Аммониевая соль 2-(4-пиридил)-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло [5,1-с] [1,2,4] триазина формулы
NH+4