ШТАММ БАКТЕРИЙ Lactococcus lactis subsp. cremoris ТК-ОБЛ-К1-1Ф, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ ЛАКТОКОККОВ Российский патент 2009 года по МПК C12N1/20 A23C9/12 

Изобретение относится к технической микробиологии и предназначено, в частности, для использования в молочной промышленности при производстве ферментированных молочных продуктов. Представляет собой новый штамм бактерий лактококков, который может быть широко использован для выявления бактериофагов на молочных предприятиях.

Одним из условий получения качественных молочных продуктов является предотвращение попадания и развития бактериофагов в производстве. Для этого необходимо использовать индикаторные культуры, чувствительные к широкому спектру бактериофагов.

Известны штаммы бактерий лактококков, используемые для выявления бактериофагов (авторское свидетельство СССР №605833, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, 1978; авторское свидетельство СССР №555133, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, 1975). Они различаются набором лизирующих их фагов (фаготипом). Однако известные штаммы имеют относительно невысокую чувствительность к бактериофагам.

Наиболее близким к предлагаемому по свойствам и действию является штамм Streptococcus.cremoris №93-S^r, используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков (авторское свидетельство СССР №557099, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, опубл. 05.05.77, БИ №17).

Недостатком данного штамма является то, что он чувствителен к относительно небольшому количеству бактериофагов, выделенных ранее на молочных предприятиях.

В настоящее время спектр бактериофагов на молочных заводах изменился и расширился. Для их выявления нужны новые штаммы, чувствительные к бактериофагам с измененным спектром литического действия.

Задача состоит в предотвращении попадания и развития бактериофагов в производстве молочной продукции путем их выявления с помощью индикаторных культур.

Технический результат - выявление нового штамма Lactococcus lactis subsp.cremoris ТК-ОБЛ-К1-1Ф, чувствительного к широкому спектру бактериофагов, циркулирующих на молочных предприятиях и обладающего высокой специфичностью по отношению к бактериофагам Lactococcus lactis subsp. cremoris.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф получен из самоквасной сметаны и отобран по спектру чувствительности к 196 бактериофагам, выделенным на молокоперерабатывающих предприятиях СНГ в течение более 20 лет.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф отличается от известных штаммов лактококков набором лизирующих фагов (фаготипом), чувствителен к 33% бактериофагов лактококков (65 из 196 изученных). Обладает специфической чувствительностью к бактериофагам, лизирующим Lactococcus lactis subsp. cremoris.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф хранится в Российской коллекции молочнокислых бактерий для производства сыров и бактериофагов к ним при ВНИИМС, включенной постановлением Правительства Российской Федерации от 24 июня 1996 г. №725-47 в перечень коллекций, депонирующих для государственных нужд микроорганизмы, культивируемые клетки высших растений, перевиваемые соматические клетки позвоночных.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф характеризуется следующими признаками.

Морфологические и культуральные признаки.

Клеточная популяция представлена грамположительными кокками диаметром 0,9-1,0 МКМ, расположенными преимущественно в цепочках разной длины, реже попарно.

На поверхности агара с гидролизованным молоком образует беловатые каплевидные блестящие поверхностные колонии и лодочкообразные глубинные колонии. При выращивании в бульоне из гидролизованного молока образует равномерную густую взвесь. Обезжиренное молоко свертывает при 30°С дозой инокулята 0,1% за 16-18 ч, при внесении 5% инокулята - за 6-7 ч. Количество жизнеспособных клеток при культивировании в обезжиренном молоке 10⁸-10⁹ КОЕ/дм³.

Физиолого-биохимические свойства.

Факультативный анаэроб. Оптимальная температура роста (28±2)°С, рН 6,8-6,9. Не образует каталазу, газа из глюкозы. Ферментирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, арабинозу. Не ферментирует декстрин, маннит, сорбит, раффинозу, инулин, глицерин. Не образует аммиак из аргинина. Не образует углекислый газ из глюкозы и цитратов. Не растет в лакмусовом молоке при 45°С и при концентрации поваренной соли 4,0% при 30°С. Обладает типичными свойствами, характерными для Lactococcus lactis subsp. cremoris.

Условия хранения.

Штамм хранится в лиофилизированном виде при температуре 6-8°С. Среда высушивания - обезжиренное молоко.

Чувствительность к бактериофагам.

Штамм чувствителен к 65 вирулентным бактериофагам из 196 изученных, выделенных на молокоперерабатывающих предприятиях СНГ в течение более 20 лет.

Пример

Выявление бактериофагов лактококков с использованием штамма Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф

1. Подготовка газонов штамма

В чашки Петри разливают 15-20 мл 1,5% агара с гидролизованным молоком и подсушивают 3-4 ч. Предварительно разлитый в пробирки по 2,5 мл 0,6% агар с гидролизованным молоком расплавляют при температуре 100°С, охлаждают до 45°С, вносят в него 1 мл 18-часовой бульонной культуры Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф, перемешивают и выливают на чашки Петри с плотной питательной средой.

2. Подготовка испытуемых проб.

Исследуемые на наличие бактериофага пробы (молоко, закваска, сыворотка и т.д.) предварительно освобождают от белка (действием молочной кислоты) фильтруют через ватно-марлевый, затем бактериальный (диаметр пор 0,2 МКМ) фильтры.

3. Выявление бактериофагов.

На поверхность двухслойного агара с посеянной культурой наносят капли исследуемых на бактериофаг проб, чашки инкубируют при 30°С 18-24 ч. Штамм Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф образует на поверхности чашки равномерный мутный газон. Если на месте нанесения капель образуются прозрачные зоны, то в исследуемой пробе находится бактериофаг, лизирующий штамм Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-K1-1Ф.

Таким образом, выявлен новый индикаторный штамм Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф, чувствительный к широкому спектру бактериофагов лактококков и обладающий высокой специфической чувствительностью к бактериофагам Lactococcus lactis subsp. cremoris.

Предлагаемый штамм бактерий рекомендован для широкого использования в молочной промышленности в целях выявления бактериофагов лактококков, путей и источников их распространения на предприятии. Это позволит предотвратить развитие бактериофагов при производстве ферментированных молочных продуктов, повысить их качество и безопасность для здоровья потребителя, а также увеличить эффективность производства.

Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к производству ферментированных молочных продуктов. Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris ТК-ОБЛ-К1-1Ф, обладающий высокой специфической чувствительностью к бактериофагам Lactococcus lactis subsp. cremoris и чувствительностью к широкому спектру бактериофагов лактококков, используют для выявления бактериофагов лактококков при производстве молочных продуктов. Изобретение позволяет предотвратить развитие бактериофагов при производстве молочной продукции, повысить ее качество и безопасность для здоровья потребителя, а также увеличить эффективность производства.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. cremoris. ТК-ОБЛ-К1-1Ф (депонирован в Российской коллекции молочнокислых бактерий для производства сыров и бактериофагов к ним при ВНИИМС), используемый для выявления бактериофагов лактококков.