ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOCOCCUS LACTIS SUBSP. DIACETILACTIS ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ ЛАКТОКОККОВ Российский патент 2008 года по МПК C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к производству ферментированных молочных продуктов, и представляет собой новый штамм бактерий лактококков, который может быть широко использован для выявления бактериофагов на молочных предприятиях.

Одним из условий получения качественных молочных продуктов является предотвращение развития бактериофагов в производстве. Для этого необходимо использовать набор индикаторных культур, чувствительных к широкому спектру бактериофагов.

Известны штаммы бактерий лактококков, используемые для выявления бактериофагов (авторское свидетельство СССР №605833, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, 1978; авторское свидетельство СССР №555133, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, 1975). Они различаются набором лизирующих их фагов (фаготипом). Однако известные штаммы имеют относительно невысокую чувствительность к бактериофагам.

Наиболее близким к предлагаемому (выбранным в качестве прототипа) является штамм Streptococcus lactis №3938-S^r, используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков (Авторское свидетельство №605833, кл. С12К 1/02, А23С 9/12, 1978).

Недостатком данного штамма является то, что он чувствителен к относительно небольшому количеству бактериофагов, выделенных ранее на молочных предприятиях.

В настоящее время спектр бактериофагов на молочных заводах изменился и расширился. Для их выявления нужны новые штаммы, чувствительные к бактериофагам с измененным спектром литического действия.

Задача состоит в предотвращении развития бактериофагов в производстве молочной продукции путем их выявления с помощью индикаторных культур.

Технический результат - выявление нового штамма Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, чувствительного к широкому спектру бактериофагов, циркулирующих на молочных предприятиях.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф получен из самоквасной сметаны и отобран по спектру чувствительности к 250 бактериофагам, выделенным на молокоперерабатывающих предприятиях СНГ в течение более 20 лет.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф отличается от известных штаммов лактококков набором лизирующих фагов (фаготипом), чувствителен к 44% бактериофагов лактококков (110 из 250 изученных).

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф хранится в Российской коллекции молочнокислых бактерий для производства сыров и бактериофагов к ним при ВНИИМС, включенной постановлением Правительства Российской Федерации от 24 июня 1996 г. №725-47 в перечень коллекций, депонирующих для государственных нужд микроорганизмы, культивируемые клетки высших растений, перевиваемые соматические клетки позвоночных.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф характеризуется следующими признаками.

Морфологические и культуральные признаки.

Клеточная популяция представлена грамположительными кокками диаметром 0,8-0,9 мкм, расположенными парами и в коротких цепочках (по 3-4 клетки).

На поверхности агара с гидролизованным молоком образует беловатые каплевидные блестящие поверхностные колонии и лодочкообразные глубинные колонии. На агаре с гидролизованным молоком и цитратом кальция вокруг колоний наблюдаются зоны просветления. При выращивании в бульоне из гидролизованного молока образует равномерную густую взвесь. Обезжиренное молоко свертывает при 30°С дозой инокулята 0,1% за 16-18 ч, при внесении 5% инокулята - за 5-7 ч. Количество жизнеспособных клеток при культивировании в обезжиренном молоке 10⁸-10⁹ КОЕ/дм³.

Физиолого-биохимические свойства. Факультативный анаэроб. Оптимальная температура роста (30±2)°С, рН питательной среды 6,8-6,9. Не образует каталазу, газа из глюкозы. Ферментирует глюкозу, галактозу, лактозу, маннит, декстрин, мальтозу, сахарозу, арабинозу. Не ферментирует сорбит, раффинозу, инулин, глицерин. Утилизирует цитраты в присутствии углеводов с образованием диоксида углерода, диацетила + ацетоина. Образует аммиак из аргинина. Не растет в лакмусовом молоке при 45°С и при концентрации поваренной соли 6,5% при 30°С. Обладает типичными свойствами, характерными для Lactococcus lactis subsp. diacetilactis.

Условия хранения. Штамм хранится в лиофилизированном виде при температуре 6-8°С. Среда высушивания - обезжиренное молоко.

Чувствительность к бактериофагам. Штамм чувствителен к 110 вирулентным бактериофагам из 250 изученных, выделенных на молокоперерабатывающих предприятиях СНГ.

Пример

Выявление бактериофагов лактококков с использованием штамма Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф.

1. Подготовка газонов штамма

В чашки Петри разливают 15-20 мл 1,5% агара с гидролизованным молоком и подсушивают 3-4 ч. Предварительно разлитый в пробирки по 2,5 мл 0,6% агар с гидролизованным молоком расплавляют при температуре 100°С, охлаждают до 45°С, вносят в него 1 мл 18-часовой бульонной культуры Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, перемешивают и выливают на чашки Петри с плотной питательной средой.

2. Подготовка испытуемых проб.

Исследуемые на наличие бактериофага пробы (молоко, закваска, сыворотка и т.д.) предварительно освобождают от белка (действием молочной кислоты), фильтруют через ватно-марлевый, затем бактериальный (диаметр пор 0,2 мкм) фильтры.

3. Выявление бактериофагов.

На поверхность двухслойного агара с посеянной культурой наносят капли исследуемых на бактериофаг проб, чашки инкубируют при 30°С 18-24 ч. Штамм Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф образует на поверхности чашки равномерный мутный газон. Если на месте нанесения капель образуются прозрачные зоны, то в исследуемой пробе находится бактериофаг, лизирующий штамм Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф.

Таким образом, выявлен новый индикаторный штамм Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, чувствительный к широкому спектру бактериофагов лактококков.

Предлагаемый штамм бактерий рекомендован для широкого использования в молочной промышленности в целях выявления бактериофагов лактококков, путей и источников их распространения на предприятии. Это позволит предотвратить развитие бактериофагов при производстве ферментированных молочных продуктов, повысить их качество и безопасность для здоровья потребителя, а также увеличить эффективность производства.

Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к производству ферментированных молочных продуктов. Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф (Российская коллекция молочнокислых бактерий для производства сыров и бактериофагов к ним при ВНИИМС) получен из самоквасной сметаны и отобран по спектру чувствительности к 250 известным бактериофагам. Используется как индикаторный штамм для выявления бактериофагов лактококков, путей и источников их распространения на предприятии. Изобретение позволяет предотвратить развитие бактериофагов при производстве молочной продукции, повысить ее качество и безопасность для здоровья потребителя, а также увеличить эффективность производства.

Штамм бактерий Lactococcus lactis subsp. diacetilactis Российская коллекция молочнокислых бактерий для производства сыров и бактериофагов к ним при ВНИИМС, рег. № ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, используемый для выявления бактериофагов лактококков.