Штамм 220-тесткультура для выявления вирулентных и умеренных бактериофагов мезофильных молочнокислых стрептококков Советский патент 1978 года по МПК C12K1/02 A23C9/12 

в диаметре. Форма клеток кокки, диплококки н короткие цепочки по 4-6 сегментов. На поверхности агара с гидролизованным молоком через двое суток образует круглые белые колонии с гладкими краями и размером 1- 2 мм в диаметре. На агаре с гидролизованным молоком и мелом и бромкрезолпурпуром двухсуточные колонии белые, слегка матовые, с ровным краем и зонами. Размер их 1,8- 4,0 мм в диаметре дает обильный рост па жидком гидролизованном молоке, сусле и каиустном отваре, образуя равномерное помутнение культуральиой среды и слабый осадок. Оптимальная темнература роста 28-30° С. За 6-7 ч при росте па молоке образует плотный колющнйся сгусток со слегка крупитчатой консистенцией.

Физиолого-биохимические лр-изпа.ки. Энергия кислотообразования 88-96° Т, предел кислотообразовапия 120° Т. В течение 17 ч культивирования образует 0,9 мл 0,1 N NaOH летучих кислот и незначительное количество (следы) четырехуглеродных соединений. При сбраживании аргинина образует аммиак.

Протеолитическая активность 6,5 мг. % тирозина.

Отношение к источникам углерода.

Сбраживает арабинозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, лактозу и декстрин. Не сбраживает рафинозу, маннит и сорбит.

Для сравнения чувствительности выявленного штамма 220 к фагам были проведены исследования культур из отраслевой коллекции В НИМИ.

Было установлено, что по сравнению со штаммами 553 и 629 он обладает более высокой чувствительностью к внрулентным фагам и в отличие от них снособен лизироваться умеренными фагами, следовательно, выявлять лизогенные культуры. Кроме того, понуляцня указанного штамма отличается тем, что полностью состоит из клеток, чувствительных к фагам. Это свидетельствует о гомогенности популяции штамма, т. е. о его ценности как тест-культуры.

Пример 1. Выявление лизогенного состояния культур мезофильных молочнокислых стрентококков на тест-культуре 220 при селекции культур.

Испытуемую на лнзогенность культуру выращнвают в гидролизованном молоке. После 5-6 ч роста ее обрабатывают хлороформом, внесенным в соотношении 10:1, смесь взбалтывают и центрифугируют при 4-5 тыс. об/мин в течении 30 мин. Наличие фага в надосадочной жидкости исследуют методом агаровых слоев. Нижним слоем является агар из гндролизованного молока (1,5%). Верхний слой готовится следующихм образом: в нробирку с 3,5 мл полужидкого агара с гидролизованным молоком (0,75%) вносят 0,1-0,2 мл 5-6-часовой тест-культуры Str. lactis 220 и 1 мл надосадочной жидкости исследуемого на лизогенпость штамма. Чашки термостатируют

17-19 ч, после этого отмечают наличие или отсутствие негативных колоний фага.

Наличие мелких негативных колоний с мутным центром свндетельствует о лизогенносги культур.

Пример 2. Выявление вирулентных бактериофагов мезофильных молочнокислых стрентококков на тест-культуре Str. lactis 220 в производственных условиях.

Р1сследование вирулентных бактериофагов на тест-культуре Str. lactis 220 нроводят следуюнгим образом. На чашку Петри с подсун енной плотной питательной средой (1,5% агара) наносят 0,1-0,2 мл 5-6-часовой тесткультуры Str. lactis 220, выращенной в гидролизованном молоке, и распределяют шпателем на поверхностн для получения сплошного роста культуры (газона). Образцы, подготовленные для исследования

на наличие фага (лабораторная и производственная закваска, сыворотка, сырое и пастеризованное молоко, смывы с оборудования и т. д.), наносят дорожкой на культуру, засеянную газоном; чашки термостатируют при

30° С 17-19 ч. Если в месте нанесения образна появляется зона лизиса или отдельные негативные колонии круглые нрозрачные d 1,8-2,3 мм, то считают, что в нем имеется бактериофаг. При отсутствии зон лизиса или

отдельных негативных колоний в месте нанесення образца считают, что в нем (образце) бактериофаг отсутствует.

Использование предлагаемого шта.мма Str. lactis 220 в качестве тест-культуры для онределения вирулентных фагов с широким спектром литического действия и умеренных фагов, продуцируемых лизогеннымн культурами, позволяет достаточно нолно выявлять вирулентные фаги и лизогенные культуры (носнтели

умеренных фагов) и тем самым своевременно нредунреждать случаи нарушения кисломолочного процесса на производстве, вызываемого бактериофагом.

Формула изобретения

Штамм Streptococcus lactis 220 - тест-культура для выявления вирулентных и умеренных бак1ериофагов мезофильных молочнокислых стрентококков. Хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института молочной промышленности.

Морфологические нризнаки. Величина клеток 0,8-1,1 мм. Форма - кокки, диплококки н короткие цепочки по 4-6 сегментов. Органические среды.

Агар с гидролизованным молоком. Образует двухсуточные колонии, белые с гладкими краями и размером 1-2 мм в диаметре.

Агар с гидролизованным молоком, мелом м

бромкрезолнурпуром-двухсуточные колонии

белые, слегка матовые, с ровным краем

и с зонами. Размер 1,8-4,0 м.м в диаметре.

Жидкое гидролизованное молоко. Сусло. Капустный отвар. Образует равномерное помхтнение и слабый осадок.

Молоке. Образует плотный колющийся сгусток со слегка крупитчатой консистенцией. Время сквашивания молока 6-7 ч. Оптимальная температура роста 28-30° С.

Физиолого-биохимические признаки.

Отношение к источникам углерода.

Сбраживает арабпнозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, лактозу и декстрин. Не сбраживает рафинозу, маннит и сорбит.

Энергия кислотообразования 88-96° Т, предел кислотообразования 120°Т. Образует 0,9 мл 0,1 N NaOH летучих кислот и незначительное количество четырех углеродных соединений.

При сбраживании аргинина образует аммиак. Протеолитическая активность 6,5 мг.% тирозина.

Обладает высокой чувствительностью к вирулентным и умеренным фагам. Популяция

штамма является высокогомогенной по чувствительности клеток к фагам (на 100% состоит из чувствительных клеток).

Источники 1нформации, принятые во внимание при экиертизе

1.Авторское свидетельство СССР Л 557099 С 12К 1/02, 1975.

2.Авторское свидетельство ио заявке Л9 2357583/28-13, кл. С 12К 1/02, 1976, но которой принято решение о выдаче авторского свидетельства.

3.Von G. Engel, К- Е. von Milczewski und А. Lembke. Versuche zur Differenzierung von Phagen der Streptococcus lactis- und creinorisGruppe: Bakterienspektrum, serologische Beziehungen und morphologische Kriterien.- «Kiel rnilchwirtschaftliche Forschungsberichte, 1975, V. 27, No. 1, S. 25-48.