ВЫСОКОМЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ [МЕТИЛ-H]МЕТИЛТОЗИЛАТ Российский патент 2009 года по МПК C07C309/73 C07B59/00 

Изобретение относится к органической и аналитической химии и может найти применение в синтезе медицинских и биологических препаратов.

Известно, что замена атомов водорода в органическом соединении на атомы трития не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48) [1].

Известен метилтозилат - соединение формулы:

Он является донором метальной группы и используется для метилирования органических соединений. B.Pelan, M.Milohnoja, M.Pezdirc U.S. Patent 4145528 03.20, 1979 Process for preparing β-methyldigoxin [2].

Однако высокомеченный тритием ([метил-³H]-H]метилтозилат) не описан.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых реагентов.

Достигается указанный технический результат получением высокомеченного тритием метилтозилата формулы I:

На фиг.1 показано: Распределение радиоактивности при анализе методом ВЭЖХ реакционной смеси, образовавшейся при каталитическом дегалоидировании бром-производного по метоксигруппе метилтозилата в атмосфере газообразного трития.

На фиг.2 показано: Распределение оптической плотности (а) и радиоактивности (б) при анализе методом ВЭЖХ смеси, образовавшейся при реакции между [метил-³Н]метилтозилатом и натриевой соли п-фенилбензойной кислоты.

На фиг.3 показано: Распределение оптической плотности и радиоактивности при анализе методом ВЭЖХ смеси, образовавшейся при реакции между [метил-³H]метилтозилатом и фенолятом калия.

На фиг.4 показано: (а) - Хроматографическая подвижность метионина при анализе его методом ВЭЖХ; (б) - распределение радиоактивности [метил-³H]метионина при анализе его методом ВЭЖХ.

Ниже приведены примеры реализации изобретения.

Пример 1. Синтез бром-производного по метоксигруппе метилтозилата

Смесь 1.48 г тозилата серебра и 0.78 г дииодметана в 5 мл сухом ацетонитрила кипятили 3 ч. Выпал осадок йодистого серебра, который отбросили, раствор упарили, после перекристаллизации полученного осадка из абсолютного этанола получено 1.13 г дитозилметана (выход - 60%).

Раствор 0.5 г дитозилметана в 3 мл ацетона смешивали с раствором 0.23 г бромистого лития в 2 мл ацетона, выдерживали при перемешивании при 60°С 5 мин и оставляли на ночь при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли равный объем хлористого метилена и осадок центрифугировали. Выход бром-производного по метоксигруппе метилтозилата - 50%. После очистки бром-производного по метоксигруппе метилтозилата методом ВЭЖХ на колонке Kromasil C₁₈ 7 мкм, 4.6×150 мм, система: 60% метанол в фосфатном буфере (рН 2.8), скорость потока 1 мл/мин, время удерживания - 5.46 мин, выход бром-производного по метоксигруппе метилтозилата - 42%.

Пример 2. Синтез высокомеченного тритием [метил-³H]метилтозилата

Раствор 1.5 мг бром-производного по метоксигруппе метилтозилата в 0.2 мл бензола вносили в ампулу с 30 мг 5% Pd/СаСО₃. Затем ампулу замораживали жидким азотом, вакуумировали до давления 0.1 Па и заполняли газообразным тритием до давления 333 гПа. Реакцию вели при комнатной температуре в течение 4 ч при перемешивании. Затем ампулу вновь замораживали жидким азотом и вакуумировали. Катализатор отфильтровывали и промывали 0.3 мл метанола. [метил-³H]Метилтозилат очищали методом ВЭЖХ на колонке Kromasil C₁₈ 7 мкм, 4.6×150 мм, система 60% метанол-вода-уксусная кислота (600:399:1), скорость потока 0.8 мл/мин, время удерживания - 3.86 мин. Анализ реакционной смеси (фиг.1) проводили методом ВЭЖХ на колонке Kromasil C₁₈ 7 мкм, 4.6×150 мм, система 60% метанол в фосфатном буфере (рН 2.8), скорость потока 1 мл/мин, время удерживания - 2.72 мин. Элюат разбавляли 10 мл воды и [метил-³H]метилтозилат экстрагировали свежеперегнанным эфиром (3×2 мл). Эфир упаривали и [метил-³H]метилтозилат растворяли в растворителе, в котором планировалось проведение метилирования. Выход высокомеченного тритием [метил-³H]метилтозилата - 50-60%, молярная радиоактивность - 15-17 Ки/ммоль.

Ниже приведены примеры, иллюстрирующие применение высокомеченного тритием [метил-³H]метилтозилата.

Пример 3. Синтез [метил-³H]метил-п-фенилбензоата

Натриевую соль п-фенилбензойной кислоты получали обработкой раствора 2 мг кислоты в 0.3 мл метанола 10 мкл 1 М NaOH. Раствор упаривали и лиофилизировали.

В реакционную ампулу помещали раствор высокомеченного тритием [метил-³H]метилтозилата в 0.2 мл DMFA и 1.5 мг натриевой соли п-фенилбензойной кислоты. Ампулу запаивали, грели в течение 10 мин при 70°С при перемешивании и оставляли на 15 ч при 20°С. Практически вся метка содержалась в образовавшемся [метил-³H]метил-п-фенилбензоате. Анализ реакционной смеси (фиг.2) проводили методом ВЭЖХ на колонке Kromasil C₁₈ 7 мкм, 4.6×150 мм, система 60% метанол в фосфатном буфере (рН 2.8), скорость потока 1 мл/мин, время удерживания [метил-³H]метил-п-фенилбензоата - 18.19 мин (время удерживания п-фенилбензойной кислоты - 11.14 мин).

Пример 4. Синтез [метил-³H]анизола

Раствор фенола (30 мг) в 1.2 мл DMSO перемешивали с 40 мг К₂СО₃ в течение 30 мин. К аликвоте этой смеси (120 мкл) прибавляли 0.3 мг высокомеченного тритием [метил-³Н]метилтозилата и грели 10 мин при 70°С. Анализ реакционной смеси (фиг.3) проводили методом ВЭЖХ на колонке Kromasil C₁₈ 7 мкм, 4.6×150 мм, система: 60% метанол в фосфатном буфере (рН 2.8), скорость потока 1 мл/мин, время удерживания анизола - 4.67 мин (время удерживания фенола - 1.93 мин). Практически вся метка содержалась в образовавшемся [метил-³H]анизоле.

Пример 5. Синтез (метил-³H]метионина

В ампулу вносили раствор 0.5 мг гомоцистеина в смеси 125 мкл тетрагидрофурана и 50 мкл воды, затем добавляли 7 мкл 1 М NaOH и 0.25 мг высокомеченного тритием [метил-³H]метилтозилата. Ампулу запаивали, грели при 70°С 10 мин, затем нагревание прекращали и через 60 мин растворители удаляли лиофилизацией. Анализ реакционной смеси (фиг.4) проводили методом ВЭЖХ на колонке Supelcosil ABZ+Plus 5 мкм, 4.6×250 мм, система: 50 mM аммоний фосфатный буфер, рН 2.8, скорость потока 1 мл/мин, время удерживания метионина - 4.10 мин (время удерживания гомоцистеина - 3.30 мин).

Таким образом, получено новое высокомеченное тритием соединение - высокомеченный тритием [метил-³H]метилтозилат, при использовании которого можно синтезировать меченные тритием соединения.

Настоящее изобретение относится к высокомеченному тритием [метил-³H]метилтозилату формулы:

Соединение может найти применение в синтезе меченных тритием соединений, используемых в биологических исследованиях. 4 ил.

Высокомеченный тритием [метил-³H]метилтозилат формулы: