МЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ 2-АРАХИДОНОИЛ-[1,3-H]-ГЛИЦЕРИН Российский патент 2006 года по МПК C07C69/587 

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии, биоорганической химии, биохимии и прикладной медицине.

При изучении метаболизма и механизма действия физиологически активных соединений необходимы их меченые аналоги.

Известно, что замена атомов соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48).

Известен 2-арахидоноилглицерин формулы:

СН₃(СН₂)₄(СН=СНСН₂)₄(СН₂)₂СООСН(СН₂OH)₂

Данное соединение способно связываться и активировать каннабиноидные рецепторы (Sugiura Т., Kondo S., Kishimoto S., Miyashita Т., Nakane S., Kodaka Т., Suhara Y., Takayama H., Waku K. J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.605-612), что делает актуальным исследование механизмов его действия и метаболизма. Проведение таких исследований эффективно лишь при использовании меченного тритием такого соединения, в котором метка содержаться в глицериновом остатке молекулы. Это требование обусловлено тем, что образующаяся в результате гидролиза 2-арахидоноилглицерина арахидоновая кислота способна превращаться в другие биологически активные вещества (например, оксилипины) или быстро встраиваться в мембранные липиды. При использовании меченного по арахидоновой кислоте 2-арахидоноилглицерина, эти превращения высвобождающейся метки существенно искажают картину поведения самого 2-арахидоноилглицерина. Кроме того, при изучении метаболизма 2-арахидоноилглицерина важна определенность положения тритиевой метки.

До настоящего времени 2-арахидоноил-[1,3-³H]-глицерин не описан.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента селективно меченных тритием аналогов физиологически активных соединений.

Достигается указанный технический результат получением меченного тритием 2-арахидоноил-[1,3-³H]-глицерина формулы:

СН₃(СН₂)₄(СН=СНСН₂)₄(СН₂)₂СООСН(С³HHOH)₂

Ниже приведен пример реализации изобретения.

Пример 1.

а) Синтез меченного тритием 1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина.

В одну из двух секций 2-х секционной реакционной ампулы помещали катализаторы: 12 мг PdO, 11 мг 5% PdO/Al₂О₃. В другую секцию помещали 110 мкл раствора 2 мг дибензилоксиацетона в смеси диоксана с триэтиламином (10:1) и замораживали жидким азотом. Затем реакционную ампулу вакуумировали до давления 0.1 Па, заполняли газообразным тритием до давления 333 гПа. При нагревании секции, в которой находились катализаторы (70°С 10 мин), происходило восстановление окиси палладия с образованием изотопномеченной воды, которая конденсировалась в секции, охлаждаемой жидким азотом. Затем удаляли избыток трития вакуумированием. Охлаждение переносили на секцию, содержащую катализаторы, и переливали в нее раствор бензилоксиацетона с изотопномеченной водой. Секцию ампулы с реакционной смесью запаивали и выдерживали в термостате при 115°С в течение 60 мин. Потом ампулу вновь замораживали жидким азотом, вскрывали, растворители и изотопно-меченную воду отгоняли в специальный приемник, а остаток растворяли в 1 мл метанола. Катализаторы отфильтровывали, промывали метанолом (5×1 мл), лабильный тритий удаляли упариванием фильтратов с метанолом (5×1 мл). Остаток, содержащий около 1 мг меченого дибензилоксиацетона, обрабатывали в течение 20 мин 2 мл метанольного раствора натрий борогидрида (1 мг/мл). Восстановление было стопроцентным. Хроматографическую очистку и анализ проводили следующим образом. ТСХ проводили на силикагельных пластинках в системах: хлороформ-эфир (4:1) R_f 1,3-дибензилглицерина - 0.59, R_f - дибензилоксиацетона - 0.86; хлороформ-эфир (10:1) R_f 1,3-дибензилглицерина - 0.30, R_f - дибензилоксиацетона - 0.66. ВЭЖХ проводили на колонке Inertsil ODS2, 5 мкм, 4.6×125 мм, v - 1.0 мл/мин, в системе метанол-вода (70:30), время удерживания - 5.37 мин (дибензилоксиацетона) и 5.61 мин (1,3-дибензилглицерина); в системе ацетонитрил-вода (50:50), время удерживания - 6.03 мин (дибензилоксиацетона) и 8.55 мин (1,3-дибензилглицерина); на колонке Kromasil C₁₈, 7 мкм, 4×150 мм, v - 0.8 мл/мин, в системе ацетонитрил-вода (50:50), время удерживания - 11.38 мин (дибензилоксиацетона); на колонке Kromasil C₁₈, 7 мкм, 4×150 мм, v - 0.8 мл/мин, в системе метанол-хлороформ (90:10), время удерживания - 2.41 мин (1,3-дибензилглицерина). После хроматографической очистки выход меченного тритием 1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина составил 40%, молярная радиоактивность препарата - 55-59 Ки/ммоль.

б) Синтез меченного тритием 2-арахидоноил-1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина проводили конденсацией фторангидрида арахидоновой кислоты с 1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерином. Фторангидрид арахидоновой кислоты был получен обработкой арахидоновой кислоты цианурфторидом в присутствии пиридина в абсолютном ацетонитриле; соотношение кислота-цианурфторид-пиридин 2 мг: 0,9 мкг:1.0 мкг; время реакции 1.5 ч. Реакцию фторангидрида арахидоновой кислоты с 1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерином (0.7 мг) вели в присутствии диметиламинопиридина (2 мг) в ацетонитриле (0.3 мл), в течение 24 ч. Выход меченного 2-арахидоноил-1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина в расчете на вступивший в реакцию меченный реагент - 50-70%.

в) 2-Арахидоноил-[1,3-³H]-глицерин получали после снятия защитных групп с 2-арахидоноил-1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина. Раствор 2-арахидоноил-1,3-дибензил-[1,3-³H]-глицерина (1 мг) в хлористом метилене обрабатывали в атмосфере инертного газа раствором бромкатехолборана (0.58 М) в течение суток. Продукт выделяли экстракцией этилацетатом. Выход 2-арахидоноил-[1,3-³H]-глицерина в расчете на вступивший в реакцию меченный реагент - 40-50% с молярной радиоактивностью 45-50 Ки/ммоль.

Очистку и анализ проводили методом ВЭЖХ на колонках Inertsil ODS2 и Kromasil C₁₈ в водно-метанольных и водно-ацетонитрильных системах с использованием соответствующих стандартов. Для приема и обработки хроматографических данных использовалась система "МультиХром" (ЗАО "Амперсенд", Россия) на базе IBM PC/AT. Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике с эффективностью регистрации трития 30% в диоксановом сцинтилляторе.

Таким образом получено новое меченное тритием физиологически активное соединение.

Изобретение относится к новому меченному тритием 2-арахидоноил-[1,3-³H]-глицерину формулы: СН₃(СН₂)₄(СН=СНСН₂)₄(СН₂)₂СООСН(С³ННОН)₂, способному связывать и активировать каннабиноидные рецепторы, которое может найти применение в аналитической, биоорганической химии, биохимии и прикладной медицине.

Меченный тритием 2-арахидоноил-[1,3-³Н]-глицерин формулы

СН₃(СН₂)₄(СН=СНСН₂)₄(СН₂)₂СООСН(С³ННОН)₂.