СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО СИНБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА Российский патент 2009 года по МПК A61K35/66 A23K1/165 

Изобретение относится к области биотехнологии, синбиотикам, препаратам для профилактики дисбактериозов и различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека.

Известен способ получения сухого бактериального препарата путем сублимационной сушки биопрепарата на основе ацидофильных бактерий и бифидобактерий (Патент РФ №2083666, кл. 6 С12N 1/20, А23С 9/12, С12N 1/20, опубл. 01.07.1997 г.). К недостаткам данного способа относится применение дорогостоящей сублимационной сушки, требующей больших капиталовложений в производство препарата.

Известен способ получения сухого пробиотического препарата, предусматривающий получение маточной культуры штаммов микроорганизмов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. BKПM В 4625, совместное культивирование маточной культуры на подсолнечном шроте при температуре 30-45°С в течение 4-8 суток, с последующим смешиванием получившийся полувлажной формы с сухим шротом в соотношении 1:10-1:12 до получения влажности в готовом препарате 8-10% (патент РФ №2280464, А61К 35/66, А23К 1/165, опубл. 27.07.2006 г.). К недостаткам данного способа относится отсутствие в препарате компонентов, стимулирующих рост и развитие собственной микрофлоры хозяина.

Техническим результатом изобретения является следующее: полученный препарат обладает выраженным синбиотическим эффектом за счет использования муки из семян амаранта, в качестве источника пребиотиков - пектиновых веществ и биологически активных веществ - сквалена с радиопротекторными свойствами; токоферолов с антиоксидантными, иммуномоделирующими свойствами с одной стороны, и комплекса молочнокислых микроорганизмов, обладающих высокой антагонистической активностью (в отношении патогенной микрофлоры кишечника), высокой выживаемостью в кислой среде желудка и обеспечивающих своими метаболитами улучшение микробиоценоза кишечника с другой стороны. Препарат, полученный по заявляемому способу, оказывает рост-стимулирующее воздействие на нормофлору организма и поэтому показан для профилактики и лечения не только дисбактериоза кишечника, но и при различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека (атеросклероз, в том числе ишемическая болезнь сердца, стенокардия, гипертоническая болезнь, лучевое и другие негативные воздействия).

Технический результат достигается предложенным способом. Готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции на питательной среде, состоящей из смеси молока коровьего, глюкозы, сахарозы, агара и воды при следующем соотношении компонентов, мас%:

Молоко коровье 50 Глюкоза 5-15 Лактоза 5-15 Агар 3-4 Вода остальное

осуществляют твердофазную ферментацию маточной культуры на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1 при 35-40°С в течении 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·10⁹ КОЕ/г, перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2·10⁸ КОЕ/г.

Штамм Lactobacillus acidophilus В 3235 является антагонистом бактерий кишечной группы и используется для получения лечебно-профилактического кормового продукта и как пробиотик в медицине и ветеринарии, продуцент молочной кислоты.

Штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788 применяется в качестве лечебно-профилактического препарата медицинского и ветеринарного назначения.

Штаммы бактерий Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 являются пробиотиками и активными продуцентами витаминов группы В.

Семена амаранта являются высокобелковым продуктом со сбалансированным аминокислотным составом, высоким содержанием кальция, витамина С и пищевых волокон, являющихся стимулириующим фактором роста молочнокислых бактерий в кишечнике.

Таким образом, получен комбинированный синбиотический препарат сообщества доминантных молочнокислых микроорганизмов с семенами амаранта, содержащими компоненты-пребиотики, стимулирующие рост представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Пример 1. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50 Глюкоза 6 Лактоза 14 Агар 3 Вода остальное

Культивирование проводят при 35°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4,5. Тверд офазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на цельно смолотой муке из семян амаранта, стерилизованной при 121°С в течение 40 мин, при температуре 35°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 1·10⁹ КОЕ/г и рН 4,0. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·10⁸ КОЕ/г и влажности в готовом препарате 12%.

Пример 2. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50 Глюкоза 10 Лактоза 10 Агар 3,5 Вода остальное

Культивирование проводят при 37°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 3,5. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 37°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 2·10⁹ КОЕ/г и рН 3,6. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 2·10⁸ КОЕ/г и влажности в готовом препарате 9%.

Пример 3. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50 Глюкоза 14 Лактоза 6 Агар 4 Вода остальное

Культивирование проводят при 40°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 40°С в течение 5 суток с получением в полувлажном препарате 1,5·10⁹ КОЕ/г и рН 4,3. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·10⁸ КОЕ/г и влажности в готовом препарате 10%.

Цельно смолотая мука амаранта содержит в своем составе не менее 5,5 г/100 г пищевых волокон, которые не перевариваются эндогенными секретами желудочно-кишечного тракта, стимулируют рост и метаболизм микроорганизмов, обитающих в толстом кишечнике, обеспечивая нормальный состав кишечной микрофлоры. Защитные компоненты, входящие в состав питательной среды для маточной культуры, обеспечивают лучшую выживаемость и сохранность микроорганизмов в сухом препарате.

В лабораторном опыте на белых мышах было сформировано 3 группы по 25 голов в каждой. Мыши контрольной 1-й группы получали стандартный рацион согласно нормам, изложенным в Приказе по Министерству здравоохранения СССР за №163 от 10 марта 1966 г. О нормах кормления лабораторных животных и продуцентов. Мышам 2-й и 3-й групп добавляли 0,05 и 0,1 г синбиотического препарата соответственно. Продолжительность опыта 56 суток.

Контролируемый показатель Группы 1 2 3 Количество мышей на начало опыта 25 25 25 На конец опыта 20 24 25 Сохранность, % 80 96 100 Живая масса одной мыши на начало опыта, г 9,90 9,91 9,86 На конец опыта 22,9 26,3 31,9 Прирост живой массы тела, г 13 16,39 22,04

Исследования показали, что применение препарата повысило сохранность мышей и увеличило прирост живой массы тела во 2-й и 3-й группах на 26 и 69,5% соответственно. Препарат не оказывает неблагоприятных воздействий на организм, каких-либо патологических изменений в ходе приема препарата не обнаружено.

Готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции на питательной среде, состоящей из компонентов, мас.%: молоко коровье 50, глюкоза 5-15, лактоза 5-15, агар 3-4, вода остальное. Твердофазную ферментацию маточной культуры проводят на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1 при 35-40°С в течение 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·10⁹ КОЕ/г. Перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2-10⁸ КОЕ/г. Это обеспечивает выраженный синбиотический эффект препарата, оказывает рост-стимулирующее воздействие на микрофлору организма и улучшает микробиоценоз кишечника организма. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ получения сухого синбиотического препарата, характеризующийся тем, что готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции, на питательной среде, состоящей из смеси молока коровьего, глюкозы, сахарозы, агара и воды при следующем соотношении компонентов, мас.%:
молоко коровье 50 глюкоза 5-15 лактоза 5-15 агар 3-4 вода остальное

осуществляют твердофазную ферментацию маточной культуры на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1, при 35-40°С в течение 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·10⁹ КОЕ/г, перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2·10⁸ КОЕ/г.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что стерилизацию муки из семян амаранта осуществляют при 121°С в течение 40 мин.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что твердофазную ферментацию проводят до достижения pH 3,5-4,5.