RG1 АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2009 года по МПК C07K16/18 C07K16/30 C07K19/00 A61K39/395 A61P35/00 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложено выделенное антитело человека к RG1 полипептиду. Описаны варианты антител, в том числе одноцепочечное антитело, а также иммуноконъюгат на основе указанных антител. Раскрыты способы избирательного разрушения клетки, ингибирования клетки, лечения болезненного состояния, выявления болезненного состояния, обнаружения RG1, контроля течения рака простаты, определения прогноза у субъекта с использованием антител и иммуноконъюгата. Использование изобретения обеспечивает новые антитела к RG1 полипептиду, что может найти применение для лечения опухолей со сверхэкспрессией RG1. 16 н. и 19 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл.

1. Выделенное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит вариабельный участок легкой цепи:
а) включающий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:26 или SEQ ID NO: 29, или
б) кодируемый нуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO:20 или SEQ ID NO:23,
и причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2.

2. Выделенное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит вариабельный участок тяжелой цепи:
а) включающий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30 или SEQ ID NO:31,
б) кодируемый нуклеотидной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:25, и причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2.

3. Выделенное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит:
а) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:26, и вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:27 или SEQ ID NO:28, или
б) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:29, и вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:30 или SEQ ID NO:31,
и причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2.

4. Антитело по п.3, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:27.

5. Антитело по п.3, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:28.

6. Антитело по п.3, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:30.

7. Антитело по п.3, в котором вариабельный участок тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:31.

8. Выделенное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающее полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, и содержащее:
а) CDR3 последовательность легкой цепи, включающую аминокислотные остатки 110-117 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:26,
б) CDR3 последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотные остатки 117-132 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:27,
в) CDR1 последовательность и CDR2 последовательность легкой цепи, включающие аминокислотные остатки 44-55 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:26, и 71-77 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:26, соответственно,
г) CDR1 последовательность и CDR2 последовательность тяжелой цепи, включающие аминокислотные остатки 50-54 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:27, и 69-84 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:27 соответственно.

9. Выделенное антитело человека или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающее полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, и содержащее:
а) CDR3 последовательность легкой цепи, включающую аминокислотные остатки 110-117 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:29,
б) CDR3 последовательность тяжелой цепи, включающую аминокислотные остатки 117-126 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:30,
в) CDR1 последовательность и CDR2 последовательность легкой цепи, включающие аминокислотные остатки 44-55 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:29, и 71-77 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:29, соответственно,
г) CDR1 последовательность и CDR2 последовательность тяжелой цепи, включающие аминокислотные остатки 50-54 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 30, и 69-84 аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO:30 соответственно.

10. Фрагмент антитела по любому из пп.1, 2, 3, 8 или 9, где фрагмент антитела выбран из группы фрагментов, включающей Fv-, F(ab')-, F(ab')2-, scFv-фрагменты, фрагменты минител и диател.

11. Иммуноконъюгат, содержащий антитело или фрагмент антитела по любому из пп.1, 2, 3, 8 или 9, в котором антитело или фрагмент антитела конъюгирован с молекулой, которая представляет собой терапевтическое средство или выявляемый маркер.

12. Иммуноконъюгат по п.11, в котором терапевтическое средство представляет собой цитотоксическое средство.

13. Иммуноконъюгат по п.12, в котором цитотоксическое средство выбирают из группы, включающей рицин, доксорубицин, даунорубицин, паклитаксел, этидийбромид, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, дигидроксиантрациндион, актиномицин D, дифтерийный токсин, эндотоксин Pseudomonas (РЕ) А, РЕ40, рицин, абрин, глюкокортикоид и радиоактивные изотопы.

14. Иммуноконъюгат по п.12, в котором цитотоксическое средство представляет собой радиоактивный изотоп, который выбирают из группы, включающей ⁴⁶Sc, ⁴⁷Sc, ⁴⁸Sc, ⁷²Ga, ⁷³Ga, ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁰⁹Pd, ¹¹Ag, ¹⁴⁹Pm, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ²¹¹At, ²¹¹Bi, ²¹²Bi, ²¹³Bi и ²¹⁴Bi.

15. Иммуноконъюгат по п.11, в котором выявляемый маркер представляет собой радиоактивную метку, фермент, хромофор или флуоресцирующее средство.

16. Иммуноконъюгат по п.15, в котором выявляемый маркер представляет собой радиоактивный изотоп, выбранный из группы, включающей ⁴³Sc, ⁴⁴Sc, ⁵²Fe, ⁵⁵Co, ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu, ⁸⁶Y, ^94mTc, ¹¹¹In и ^99mTc.

17. Иммуноконъюгат по п.11, в котором конъюгацию антитела или фрагмента антитела с терапевтическим средством или выявляемым маркером осуществляют с помощью хелатного соединения, выбранного из группы, включающей n-SCN-бензил-ВРТА и ее производные, 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N",N'''-тетрауксусную кислоту (DOTA) и ее производные, и 1,4,7-триазациклононан-N,N',N''-триуксусную кислоту (NOTA) и ее производные.

18. Иммуноконъюгат по п.17, в котором используемое хелатное соединение представляет собой циклогексил-DTPA (СНХ-A''-DTPA) или MX-DTPA(1B4M-DTPA).

19. Антитело по любому из пп.1, 2, 3, 8 или 9, где антитело является моноклональным антителом.

20. Одноцепочечная молекула антитела, связывающая полипептид RG1, который имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, где одноцепочечная молекула антитела включает антигенсвязывающий участок антитела по пп.1, 2, 3, 8 или 9.

21. Полипептид, который связывает RG1 полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, где указанный полипептид включает антигенсвязывающий участок антитела по пп.1, 2, 3, 8 или 9.

22. Способ избирательного разрушения клетки, экспрессирующей полипептид RG1 человека, имеющей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, который включает взаимодействие клетки с эффективным количеством иммуноконъюгата по любому из пп.11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18, где избирательно разрушаемая клетка экспрессирует полипептид RG1 человека, имеющей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2.

23. Способ ингибирования клетки, экспрессирующей полипептид RG1 человека, имеющей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, который включает взаимодействие клеток с эффективным количеством антитела по любому из пп.1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 19 или 20, где ингибируемая клетка экспрессирует полипептид RG1 человека, имеющей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2.

24. Способ лечения болезненного состояния у человека, связанного с экспрессией полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, который предусматривает введение пациенту терапевтически эффективного количества иммуноконъюгата по любому из пп.11, 12, 14, 15, 16, 17 или 18, таким образом осуществляется лечение указанного состояния человека.

25. Способ выявления болезненного состояния у субъекта, которое связано с экспрессией полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, причем способ включает:
(а) введение субъекту иммуноконъюгата по любому из пп.11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 или 18;
(б) определение связывания иммуноконъюгата в организме субъекта и
(в) определение того факта, является ли уровень связывания иммуноконъюгата у субъекта повышенным по сравнению с уровнем связывания, определенным у контрольных субъектов без заболевания, и, таким образом, выявление болезненного состояния у субъекта.

26. Способ обнаружения присутствия полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, в биологическом образце, который включает:
(а) получение биологического образца у субъекта;
(б) контактирование биологического образца с антителом по любому из пп.1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 19 или 20, которое специфически связывает полипептид RG1, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2; и
(в) обнаружение связывания моноклонального антитела или его фрагмента в биологическом образце
и, таким образом, обнаружение присутствия полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, в биологическом образце.

27. Способ по п.26, где обнаружение включает:
(а) контактирование моноклонального антитела или его фрагмента, которые связываются с полипептидом RG1, со вторым антителом, меченным выявляемым маркером так, что формируется комплекс, где комплекс включает моноклональное антитело или его фрагмент, связанные с полипептидом RG1, и второе антитело, и
(б) обнаружение сформированного таким образом комплекса и присутствия полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, в биологическом образце.

28. Способ выявления болезненного состояния у субъекта, которое связано с экспрессией полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, предусматривающий обнаружение присутствия полипептида RG1 способом по п.27, при котором повышение уровня связывания моноклонального антитела по сравнению с уровнем связывания, определенным у контрольных субъектов без заболевания, указывает на болезненное состояние у субъекта.

29. Способ контроля течения рака простаты у субъекта, включающий количественное определение в первом биологическом образце субъекта присутствия полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, с помощью способа по п.27 и сравнение определенного таким образом количества с количеством, которое присутствует во втором биологическом образце субъекта, причем эти образцы были взяты в разное время, и различие в определяемом количестве является показателем течения рака простаты.

30. Способ по п.25, где способ выявления представляет собой иммуносцинтиграфию или позитронную эмиссионную томографию.

31. Способ по пп.24, 25 или 28, в котором болезненное состояние представляет собой злокачественное новообразование.

32. Способ по п.31, в котором злокачественное новообразование представляет собой рак предстательной железы или запущенный метастазирующий рак.

33. Способ определения прогноза у субъекта, страдающего раком простаты, включающий контроль над течением рака простаты с помощью способа по п.29, где увеличение количества полипептида RG1, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, у одного и того же субъекта в различное время является показателем плохого прогноза.

34. Способ по п.26 или 29, где биологическим образцом является сыворотка, кровь, моча, ткань простаты или ткань, которая не является тканью простаты.

35. Способ по п.27, где выявляемым маркером, который обнаруживается, является радиоизотоп, флуоресцентное соединение, биолюминесцентное соединение, хемилюминесцентное соединение, хелатирующее металлическое соединение или фермент.