СЕЛЕКТИВНАЯ ДОБАВКА К ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Neisseria gonorrhoeae Российский патент 2010 года по МПК C12N1/20 C12R1/36 

Описание патента на изобретение RU2380407C1

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике гонореи.

Уровень заболеваемости гонококковой инфекцией в 2007 году (60,8 случаев на 100000 населения) в Российской Федерации в настоящее время остается высоким, что определяет актуальность проведения исследований, направленных на развитие как первичной, так и вторичной профилактики этих инфекций.

В Российской Федерации селективные питательные среды для диагностики гонореи не производятся. В связи с этим важной задачей является разработка таких сред и их регистрация в установленном порядке как изделий медицинского назначения.

В настоящее время известны различные добавки к питательным средам для культивирования и выделения гонококка. К числу таких добавок относятся следующие:

- селективная добавка с антибиотиками V.C.N.T., номер по каталогу FD 024, содержащая на 500 мл среды:

ванкомицин - 1,50 мг,

колистина метансульфонат - 3,75 мг,

триметоприм - 2,50 мг,

нистатин 6,25 мг;

- селективная добавка с антибиотиками для основы гонококкового агара, номер по каталогу FD 021, содержащая на 500 мл среды:

дрожжевой аутолизат - 5,0 г,

глюкоза - 0,75 г,

натрия гидрокарбонат 0,075 г,

ванкомицин - 1,50 мг,

колистина метансульфонат - 3,75 мг,

триметоприм - 2,50 мг,

нистатин 6,25 мг.

Также известна селективная добавка с антибиотиками V.C.N., номер по каталогу FD 023, содержащая на 500 мл среды:

ванкомицин - 1,50 мг,

колистина метансульфонат - 3,75 мг,

нистатин 6,25 мг.

Кроме того, известны питательные среды, содержащие в качестве ингибитора посторонней микрофлоры такие антибиотики как полимиксина-В сульфат и линкомицина гидрохлорид (см. RU 2076904 С1, 10.04.1997). Данная питательная среда выбрана в качестве ближайшего аналога. Культивирование N. gonorrhoeae на данной питательной среде с добавками из антибиотиков позволяет достичь обильного роста микроорганизма только после 24-48 часов.

Недостатки известных селективных добавок заключаются в том, что часть гонококков может проявлять чувствительность к входящим в их состав антибактериальным препаратам, вследствие чего рост гонококка подавляется компонентами, входящими в состав селективной добавки и определенный процент заболевания остается нераспознанным. Кроме того, селективные добавки не всегда полностью подавляют рост сопутствующей микрофлоры. В связи с вышеизложенным одной из актуальных проблем практической венерологии является разработка новых селективных добавок, позволяющих устранить вышеуказанные недостатки, что является задачей настоящего изобретения.

Поставленная задача решается путем создания селективной добавки, содержащей:

нистатин в концентрации 327,7 ед./мл среды - 399,3 ед./мл среды,

полимиксина-В сульфат в концентрации 3,6 ед./мл среды - 44 ед./мл среды,

гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед./мл среды - 4,4 ед./мл среды.

Технический результат изобретения заключается в ускорении роста гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.

Селективную добавку к питательной среде для выделения и культивирования N. gonorrhoeae получают путем смешивания компонентов.

Для проведения экспериментов была использована питательная среда для выделения гонококка ФГУП «НПО Микроген», г.Ставрополь, представляющая собой набор, состоящий из 2 лиофилизированных компонентов: основы питательной среды и добавки к основе питательной среды.

Основа питательной среды содержит: экстракт кроличьего мяса, экстракт языков крупного рогатого скота, пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, натрий хлористый, аутолизат хлебопекарных дрожжей, кислота оротовая и агар микробиологический.

Добавка к основе питательной среды: сыворотка крупного рогатого скота, аутолизат хлебопекарных дрожжей, гидролизат казеина для парентерального белкового питания.

Заявленное изобретение может быть проиллюстрировано следующими примерами.

Пример 1

К питательной среде для культивирования N. gonorrhoeae ФГУП «НПО Микроген» добавляли селективную добавку, содержащую:

нистатин в концентрации 327,7 ед./мл среды,

полимиксина-В сульфат в концентрации 3,6 ед./мл среды,

гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед./мл среды. Производили посев лабораторного штамма N. gonorrhoeae и культивировали в течение 16-18 часов в атмосфере 5-10% СO2 при 36-37°С.

Учет результатов культивирования микроорганизмов осуществляли визуально с использованием стериомикроскопа - лупы - прибора, позволяющего оценивать количество колоний инструментальным методом. Рост микроорганизмов оценивали по 4-балльной системе:

4+ - обильный сливной рост микроорганизмов (более 500 колоний) по всей поверхности среды;

3+ - обильный рост (более 300 колоний);

2+ - более 40 колоний (от 40 до 100 колоний) - умеренный рост;

1+ - более 10 колоний (от 10 до 30 колоний) - скудный рост.

В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.

Пример 2

Эксперимент проводили аналогично примеру 1, используя компоненты селективной добавки в следующих количествах:

нистатин в концентрации 358,7 ед./мл среды,

полимиксина-В сульфат в концентрации 40 ед./мл среды,

гидрохлорид линкомицина в концентрации 4,0 ед./мл среды.

В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 17 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.

Пример 3

Эксперимент проводили аналогично примеру 1, используя компоненты селективной добавки в следующих количествах:

нистатин в концентрации 399,3 ед./мл среды,

полимиксина-В сульфат в концентрации 44 ед./мл среды,

гидрохлорид линкомицина в концентрации 4,4 ед./мл среды.

В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 16 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.

Пример 4

На указанную в примере 1 питательную среду с селективной добавкой производили посев следующих лабораторных штаммов следующих микроорганизмов: S. epidermidis, Е. coli, С.albicans, N. gonorrhoeae. Через 24 часа производили оценку наличия и роста штаммов микроорганизмов. Анализ показал, что в результате эксперимента был полностью подавлен рост сопутствующей микрофлоры (S. epidermidis, Е. coli, С.albicans), при обильном росте штамма N. gonorrhoeae.

Как видно из представленных примеров, изобретение позволяет ускорить рост гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.

Похожие патенты RU2380407C1

название год авторы номер документа
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГОНОКОККА 1994
  • Храмов М.В.
  • Савельева Г.М.
  • Ажермачева Н.И.
  • Васильев М.М.
  • Беднова В.Н.
  • Дмитриев Г.А.
RU2077576C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГОНОКОККА 1994
  • Храмов М.В.
  • Савельева Г.М.
  • Ажермачева Н.И.
  • Васильев М.М.
  • Беднова В.Н.
  • Дмитриев Г.А.
RU2076904C1
КОНТРОЛЬНЫЙ ШТАММ N.Gonorrhoeae ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКИ ГОНОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ КУЛЬТУРАЛЬНЫМ МЕТОДОМ 2010
  • Кубанова Анна Алексеевна
  • Фриго Наталия Владиславовна
  • Полевщикова Светлана Алексеевна
  • Кубанов Алексей Алексеевич
  • Соломка Виктория Сергеевна
  • Лесная Ирина Николаевна
RU2440411C1
СПОСОБ КОНТРОЛЯ ИНГИБИРУЮЩИХ СВОЙСТВ В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ФЛОРЫ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛ 2019
  • Ковтун Юрий Сергеевич
  • Куличенко Александр Николаевич
  • Курилова Анна Алексеевна
  • Катунина Людмила Семёновна
  • Пономаренко Дмитрий Григорьевич
  • Русанова Диана Владимировна
  • Бердникова Татьяна Васильевна
  • Василенко Екатерина Игоревна
RU2733431C2
СПОСОБ СЕЛЕКТИВНОЙ ИЗОЛЯЦИИ ПРОПАНОКИСЛЯЮЩИХ РОДОКОККОВ 1996
  • Ившина И.Б.
  • Куюкина М.С.
RU2106407C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА И СЕЛЕКТИВНАЯ ДОБАВКА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Trichomonas vaginalis 2008
  • Кубанова Анна Алексеевна
  • Кубанов Алексей Алексеевич
  • Полевщикова Светлана Алексеевна
  • Фриго Наталия Владиславовна
  • Лесная Ирина Николаевна
  • Полетаева Ольга Александровна
RU2381269C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ К КОМПЛЕКСНЫМ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ 2013
  • Шабунин Сергей Викторович
  • Манжурина Ольга Алексеевна
  • Степанов Андрей Вениаминович
RU2529711C1
СЕЛЕКТИВНАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И БЛИЗКОРОДСТВЕННЫХ БАЦИЛЛ ГРУППЫ Bacillus cereus 2010
  • Рязанова Алла Геннадьевна
  • Ерёменко Евгений Иванович
  • Буравцева Нина Пантелеймоновна
  • Аксёнова Людмила Юрьевна
  • Цыганкова Ольга Ивановна
  • Цыганкова Елена Анатольевна
  • Головинская Татьяна Михайловна
RU2425869C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ LEGIONELLA PNEUMOPHILA 2015
  • Шелохович Александр Иванович
  • Харабаджахян Георгий Давидович
  • Терентьев Александр Николаевич
  • Люкшина Елена Юрьевна
  • Савельева Ирина Константиновна
  • Ульрих Елена Павловна
  • Булахова Ольга Георгиевна
RU2580227C1
Штамм энтерококков SтRертососсUS FаесIUм, используемый для приготовления бактерийных препаратов 1988
  • Коршунов Валерий Михайлович
  • Иванова Наталья Петровна
  • Логадырь Татьяна Алексеевна
  • Ефимов Борис Алексеевич
SU1497211A1

Реферат патента 2010 года СЕЛЕКТИВНАЯ ДОБАВКА К ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Neisseria gonorrhoeae

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике гонореи. Селективная добавка содержит нистатин в концентрации 327,7 ед/мл среды - 399,3 ед/мл среды, полимиксина-В сульфат в концентрации 36 ед/мл среды - 44 ед/мл среды и гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед/мл среды - 4,4 ед/мл среды. Изобретение позволяет ускорить рост гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.

Формула изобретения RU 2 380 407 C1

Селективная добавка к питательной среде для выделения и культивирования Neisseria gonorrhoeae, включающая антибиотик, отличающаяся тем, что в качестве антибиотика содержит нистатин в концентрации 327,7 - 399,3 ед./мл среды, полимиксина-В сульфат в концентрации 36 - 44 ед./мл среды и гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 - 4,4 ед./мл среды.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2010 года RU2380407C1

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГОНОКОККА 1994
  • Храмов М.В.
  • Савельева Г.М.
  • Ажермачева Н.И.
  • Васильев М.М.
  • Беднова В.Н.
  • Дмитриев Г.А.
RU2076904C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГОНОКОККА 1994
  • Храмов М.В.
  • Савельева Г.М.
  • Ажермачева Н.И.
  • Васильев М.М.
  • Беднова В.Н.
  • Дмитриев Г.А.
RU2077576C1
ВОРОНИНА Л.Г
и др
Препарат человеческого лейкоцитарного интерферона - селективная добавка к питательной среде для выделения Neisseria gonorrhoeae
Вестник дерматологии и венерологии, №4, 1999, с.53-56
БЕДНОВА В.Н
и др
Применение селективной добавки к питательной среде для выделения

RU 2 380 407 C1

Авторы

Кубанова Анна Алексеевна

Кубанов Алексей Алексеевич

Полевщикова Светлана Алексеевна

Фриго Наталия Владиславовна

Лесная Ирина Николаевна

Полетаева Ольга Александровна

Даты

2010-01-27Публикация

2008-10-23Подача