СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ РАЗВИТИЯ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2010 года по МПК A61K39/295 A61K39/12 

Изобретение относится к вирусологии, иммунологии и биотехнологии, в частности к способам профилактики лейкоза крупного рогатого скота.

Известные способы получения инактивированных вакцин, анатоксинов, аллергоидов (толерогенов) предусматривают детоксикацию и полимеризацию токсинов, инактивацию вирусов, бактерий формалином, глутаральдегидом, перекисью водорода и т.д. (Бурчасов П.Н. Руководство по вакцинному и сывороточному производству. М.: Медицина, 1978. - С.72-87; Фрадкин В.А. Диагностические и лечебные аллергены. М.: Медицина. 1990. - 256 с; Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. М.: Медицина. 1999. - С.260-266).

Существующие способы получения инактивированной вакцины для профилактики лейкоза крупного рогатого скота предусматривают выращивание вируса лейкоза на культуре клеток и инактивацию формалином и др. при последующем добавлении адъюванта или изготовление живых вакцин на основе использования вируса осповакцины (Сюрин Н.В., Самуйленко А.Я. и др. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБЛ, 1998. - С.400-406; Бусол В.А., Шаповалова О.В., Нагаева Л.И. и др. Випробувания захисного эффекту рiдкоi. I'нактивованоi вакцины протии лейкозу великоi рогатоi худоби на вiвцах i телицах // Ветеринарна Медицина. // Мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. - К.: 1995. - Вып.70. - С.3-9; Завiрюха А.И., Завiрюха Г.А. и др. Результати застусування вакцини «Лейкозав» у профилактицi i боротьбi з лейкозом великоi рогатоi худоби // Ветеринарна Медицина. Мiжвiдомчий тематичний науковий збiрник. - X., 2003. - Вып.82. - С.240-246; Крикун В.А., Гулюкин М.И. Проблемы оздоровления неблагополучных по лейкозу хозяйств и перспективы разработки специфической профилактики лейкоза крупного рогатого скота // Тр. ВНИИЭВ. - Т.72. - М., 1999. - С.49-52).

Однако применение вакцин для профилактики лейкоза крупного рогатого скота в определенной степени не получило широкого практического использования, в основном, из-за отсутствия средств коррекции иммунологической недостаточности и образования антител с низким титром.

Поэтому совершенствование получения цельновирионных и субвирионных вакцин для профилактики лейкоза должно быть взаимосвязано с одновременным использованием специфических иммуномодуляторов. Решение этой проблемы было и остается актуальной как для ветеринарной, так и гуманной медицины.

За прототип взят «Способ одержання iнактивованоi вакцини протии лейкозу великоi рогатоi худоби» (Бусол В.А., Шаповалава О.В., Мягких Н.В. и др. Патент на винахiд №35439, А61К 39/21, вiд 14.10.1999).

Недостатком указанного способа получения вакцины против лейкоза крупного рогатого скота, как и других подобных вакцин: «Лейкопол», «Лейкозав» и др., является отсутствие технологии изготовления вакцины, процесса и средств полимеризации фрагментов разных структур вируса, контрольной инфицирующей дозы для вакцинированных животных, срока ревакцинации и данных иммунологического состояния животных перед вакцинацией, учета депрессивных факторов экологии, необходимость стимулировать гуморальный или клеточный иммунитет.

Эффективность ряда препаратов, воздействующих на иммунную систему у крупного рогатого скота при лейкозе, таких как левомизол, унитиол, ронколейкин, ликопид, миксоферон, АСД, хитозан, катозал и т.д., не изучено и практического применения они пока не имеют.

В наших исследованиях разработанные и апробированные анатоксин из микобактерий туберкулеза для профилактики туберкулеза, анатоксин-вакцина для профилактики и лечения стафилококкоза в последующем проявили эффективность при онкогенных патологиях у людей и плотоядных как в отдельном применении, так и в сочетанном.

Исходя из того что стафилококковая анатоксин-вакцина и туберкулезный анатоксин обеспечивают в определенной дозировке нормальное состояние гуморальных и клеточных показателей иммунной системы, были проведены исследования в комплексном их применении с инактивированной вакциной против лейкоза для профилактики лейкоза крупного рогатого скота.

Для устранения указанных недостатков прототипа предлагается вакцинация животных подкожным введением 3-5 мл вакцины против лейкоза трехкратно с интервалом 14-15 суток с предварительным, за 20-30 дней, подкожным введением туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины по 4-5 мл в качестве иммуностимуляторов, а через 8-9 месяцев однократная ревакцинация вакциной против лейкоза с предварительным, за 20 дней, введением вышеуказанных иммуностимуляторов в прежних объемах.

Предварительное сочетанное использование туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины повышает эффективность инактивированной цельновирионной вакцины против лейкоза крупного рогатого скота и защиту вакцинированных животных от заражения и препятствует развитию патологий, характерных для лейкоза, при совместном содержании вакцинированных и больных лейкозом коров. При этом титр преципитирующих антител на протяжении 15-16 месяцев находился на уровне 1:16.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота путем его вакцинации инактивированной противолейкозной вакциной и повышение ее протективных свойств предварительным одновременным введением стафилококковой анатоксин-вакцины и туберкулезного анатоксина в качестве иммуностимуляторов.

Поставленная цель достигается введением вакцины, полученной инактивацией культурального вируса лейкоза и полимеризацией структурных фрагментов вируса (гликопротеидов) 0,2% раствором формалина при 39-40°С в течение 7-9 суток, сорбцией на гидроксиде алюминия (3-5 мг гидроксида алюминия на 1 мл суспензии). Полученная вакцина вводится 3-кратно подкожно телочкам, коровам в объеме 3-5 мл с интервалом 14-15 суток с предварительным, за 20-30 суток до вакцинации, подкожным введением туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины в объеме 4-5 мл каждого препарата. Через 8-9 месяцев проводится ревакцинация с помощью однократного введения иммуномодуляторов и через 20 суток вакцины в вышеуказанных объемах. При этом на месте введения иммуномодуляторов и вакцины не образуется гнойных абсцессов, а титр антител в РИД проявляется в разведении 1:16.

Уместно отметить и другое положительное действие указанных препаратов до или после удаления простаты, молочной железы, при раке мочевого пузыря и фиброме при подкожном введении с интервалом 5-7 суток в течение 1,5-2,0 месяцев.

Высокая протективная эффективность при профилактике лейкоза крупного рогатого скота и положительные результаты иммунотерапии отдельных форм рака у людей с помощью вакцины против лейкоза со стафилококковой анатоксин-вакциной и туберкулезным анатоксином вместо БЦЖ создают перспективу их использования в ветеринарной и гуманной медицине.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявленному, с использованием стафилококковой анатоксин-вакцины и туберкулезного анатоксина.

Использование инактивированной культуральной вакцины для профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота со стафилококковой анатоксин-вакциной и туберкулезным анатоксином позволяет достичь протективного эффекта вакцины, указанного в цели изобретения.

Установленная возможность инактивации культурального вируса лейкоза и полимеризация структурных фрагментов вируса (гликопротеидов) 0,2% раствором формалина при 39-40°С в течение 7-9 суток, сорбция на гидроксиде алюминия (3-5 мг/мл) может быть использована для производства вакцины против лейкоза крупного рогатого скота в промышленных условиях.

Результаты получения и применения инактивированной вакцины против лейкоза крупного рогатого скота с предварительным введением стафилококковой анатоксин-вакцины и туберкулезного анатоксина, ранее нами разработанных и апробированных, представлены в следующих примерах.

Пример 1. Способ получения вакцины против лейкоза

Вакцина против лейкоза крупного рогатого скота получена путем инактивации 1 литра суспензии культурального вируса лейкоза и полимеризации гликопротеидов вируса 0,2% раствором формалина при 39-40°С в течение 9 суток, сорбции на гидроксиде алюминия (3-5 мг/мл) с последующей расфасовкой в стерильные флаконы и стерилизацией при 75-80°С в течение 30-40 минут.

Пример 2. Испытание вакцины на безвредность

Испытание безвредности вакцины проведено путем 3-кратного подкожного введения вакцины 12 бычкам и 14 телочкам 4-6-месячного возраста в объеме 5 мл с интервалом 10 суток.

У вакцинированных животных не отмечено повышения температуры и беспокойства при отсутствии образования гнойных абсцессов на месте введения.

Пример 3. Испытание вакцины на протективные свойства

В исследованиях использовано 25 нетелей и 18 коров неблагополучного хозяйства по лейкозу, у которых титр антител в РИД составлял 1:2 и 1:4, но не было выраженных патологических изменений в органах и клинических признаков, характерных для лейкоза.

Перед вакцинацией всем животным были введены подкожно по 5 мл стафилококковой анатоксин-вакцины и туберкулезного анатоксина, а затем через 20 суток животные были вакцинированы вакциной против лейкоза в объеме 4-5 мл трехкратным подкожным введением в область средней трети шеи с интервалом 14-15 суток с последующей ревакцинацией через 9 месяцев, при которой однократно подкожно вводилась вакцина против лейкоза с предварительным, за 20 суток до вакцинации, подкожным введением туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины в прежних объемах.

На протяжении 15 месяцев у вакцинированных животных не выявлено гематологических изменений и патологических поражений в лимфоузлах, селезенке и проявления клинических признаков, характерных для лейкоза. На месте введения препаратов не отмечено образования гнойных абсцессов. При этом у вакцинированных животных титр преципитирующих антител в РИД находился на постоянном высоком уровне 1:8-1:16, а у больных лейкозом коров этот титр составлял 1:2-1:4.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает вакцинацию животных вакциной, полученной инактивацией культурального вируса лейкоза и полимеризацией его гликопротеидов 0,2% раствором формалина при 39-40°С в течение 7-9 суток и сорбцией полученной суспензии на гидроксиде алюминия 3-5 мг/мл. Вакцину вводят подкожно, трехкратно, с интервалом 14-15 суток, в объеме 3-5 мл. При этом предварительно, за 20-30 суток до вакцинации, подкожно вводят туберкулезный анатоксин и стафилококковую анатоксин-вакцину по 4-5 мл. Через 8-9 месяцев проводят ревакцинацию путем однократного введения лейкозной вакцины с предварительным, за 20 суток, введением туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины в прежних объемах. Способ повышает эффективность защиты вакцинированных от лейкоза животных. 1 з.п. ф-лы.

1. Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота, включающий введение инактивированной вакцины против лейкоза, отличающийся тем, что вакцинацию животных проводят вакциной, полученной инактивацией культурального вируса лейкоза и полимеризацией его гликопротеидов 0,2%-ным раствором формалина при 39-40°С в течение 7-9 суток и сорбцией полученной суспензии на гидроксиде алюминия 3-5 мг/мл, вакцину вводят подкожно, трехкратно, с интервалом 14-15 суток, в объеме 3-5 мл, при этом предварительно за 20-30 суток до вакцинации подкожно вводят туберкулезный анатоксин и стафилококковую анатоксин-вакцину по 4-5 мл, а через 8-9 месяцев проводят ревакцинацию путем однократного введения лейкозной вакцины с предварительным за 20 суток введением туберкулезного анатоксина и стафилококковой анатоксин-вакцины в прежних объемах.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что вакцинации подвергают инфицированных животных с уровнем титра преципитирующих антител 1:2-1:4.