ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ТРИХОМОНАД К ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПРЕПАРАТАМ Российский патент 2010 года по МПК C12N1/10 C12R1/90 

Изобретение относится к области медицины, а именно лабораторной диагностике, и может быть использовано, в частности, для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам с последующим подбором их концентраций, необходимых для уничтожения паразита.

После установления диагноза «трихомоноз» при назначении терапевтических воздействий необходима информация о чувствительности Trichomonas vaginalis к лекарственным препаратам. С этой целью проводят фармакокинетическое исследование. При трихомонозе они носят главным образом исследовательский статус и осуществляются в научно-исследовательских институтах и крупных лабораторных центрах. Как известно, рост трихомонад изучают, как правило, на жидких питательных средах, что осложняет проведение таких исследований: используется так называемый метод титрования, а кроме того, практически единственной группой протистоцидных препаратов являются нитроимидозолы. Вместе с тем появляются сведения о снижении чувствительности трихомонад - нарастании резистентности к протистоцидным средствам (Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. - Москва: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. С.64).

В связи с этим имеется настоятельная необходимость шире использовать культуральное исследование чувствительности трихомонад к воздействию применяемых лекарственных препаратов, особенно при хроническом рецидивирующем инфекционном процессе. Использование для этой цели питательной среды с высокими ростовыми показателями, стандартного состава и простотой приготовления, несомненно, приведет к адекватной терапии такого широко распространенного, отягощенного разнообразными осложнениями заболевания, как мочеполовой трихомоноз.

Наиболее близкой по составу к предлагаемой среде является питательная двухфазная среда для выделения трихомонад (патент 2272834 RU). Недостатком имеющейся среды является отсутствие в ее составе противогрибковых препаратов, в то время как грибки достаточно часто встречаются в материале, выделяемом из мочеполовой системы, кроме того, определение чувствительности трихомонад к лекарственным средствам является первоочередной задачей для практического здравоохранения, в то время как имеющаяся среда не предусматривает введение дополнительных компонентов в свой состав.

Технической задачей является определение чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам.

Она достигается тем, что на коагулированную сыворотку (твердая фаза) наносится жидкая фаза с лекарственным препаратом выбранной концентрации, воздействие которого на трихомонады планируется изучить.

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам, отличающаяся тем, что в качестве жидкой фазы используют среду RPMI-1640 (пр-во «БиолоТ», СПб) с пенициллином, стрептомицином, амфоглюкамином и полимексином М, при следующем соотношении компонентов:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

10000-30000 ЕД /мл натриевой соли бензилпенициллина

1000-3000 мкг/мл стрептомицина

30-50 Ед/мл амфоглюкамина

3000-5000 Ед/мл полимиксина М

Предлагаемая питательная среда была апробирована на кафедре молекулярной биологии, генетики и биохимии Астраханского государственного университета на 40 образцах материала от больных в течение 2008 г.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1.

Для приготовления среды используют компоненты в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640 (пр-во «БиолоТ», СПб)

10000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

1000 мкг/мл стрептомицина

30 Ед/мл амфоглюкамина

3000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например метронидазол 0,1 мг/мл.

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия их и метронидазол асептически вносят в среду RPMI-1640, конечная концентрация метронидазола составила 0,1 мг/мл.

Посев исследуемого материала осуществляют на поверхность коагулированной сыворотки штрихом бактериологической петлей. Затем на сыворотку наслаивают среду RPMI-1640 с антибиотиками и метронидазолом.

В связи с отсутствием чувствительности трихомонад к лекарственному веществу в исследуемой концентрации на границе раздела сред отмечается их обильный рост.

Пример 2.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

20000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

2000 мкг/мл стрептомицина

40 Ед/мл амфоглюкамина

4000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например макмерур 0,1 мг/мл.

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия их и макмерур асептически вносят в среду RPMI-1640, конечная концентрация макмерура составила 0,1 мг/мл.

Посев исследуемого материала осуществляют на поверхность коагулированной сыворотки штрихом бактериологической петлей. Затем на сыворотку наслаивают среду RPMI-1640 с антибиотиками и макмеруром.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С 24 ч. Концентрацию макмерура нельзя считать достаточной, так как имеет место слабый рост трихомонад.

Пример 3.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

30000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

3000 мкг/мл стрептомицина

50 Ед/мл амфоглюкамина

5000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например тинидазол 0,1 мг/мл.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С 24 ч. Концентрация тинидазола достаточная, рост трихомонад отсутствует.

При посеве на предлагаемую среду материала от больных рост сопутствующей бактериальной флоры подавляется. В связи с дополнительным введением в среду противогрибковых антибиотиков амфоглюкамина и полимексина М также отсутствует рост грибковой флоры.

В таблице даны результаты испытания предлагаемой среды при различных видах протистоцидного лекарственного вещества в его составе.

Введение в жидкую фазу среды лекарственного препарата позволяет определить его влияние на рост трихомонад. Подбор оптимальной для лечения концентрации выбранного вещества также возможен при использовании предлагаемой среды. Кроме того, дополнительным преимуществом предлагаемой среды является подавление роста грибковой флоры в связи с дополнительным введением противогрибковых препаратов. Таким образом, использование новой среды при подборе лекарственных препаратов значительно повысит эффективность лечения такого широко распространенного и трудно поддающегося терапии заболевания, как трихомоноз.

Изобретение может быть рекомендовано к применению в практическом здравоохранении в венерологических, урологических и андрологических учреждениях, а также в научной работе лабораторий соответствующего профиля.

  Подавление роста трихомонад различными лекарственными препаратами с использованием предлагаемой среды. Лекарственный препарат Наличие визуального роста Метронидазол Обильный рост трихомонал Макмерур Слабый рост трихомонал Тинидазол Отсутствие роста трихомонад

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой «косячком» в пробирке в количестве 5 мл. Жидкая фаза содержит среду RPMI-1640 в количестве 5 мл, раствор натриевой соли бензилпенициллина и растворы стрептомицина, амфоглюкамина и полимиксина М заданной концентрации. Это повышает точность определения чувствительности трихомонад при подборе лекарственных препаратов для лечения трихомоноза. 1 табл.

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам, характеризующаяся тем, что она содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой «косячком» в пробирке в количестве 5 мл, и жидкую фазу, содержащую среду RPMI-1640 в количестве 5 мл и раствор натриевой соли бензилпенициллина 10000-30000 ед./мл, раствор стрептомицина 1000-3000 мкг/мл, раствор амфоглюкамина 30-50 ед./мл, раствор полимиксина М 3000-5000 ед./мл соответственно.