ВЫСОКОПОЛИМЕРНАЯ РНК ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ, СВОБОДНАЯ ОТ ПРИМЕСНЫХ АССОЦИАТОВ РНК С БЕЛКАМИ И ПОЛИСАХАРИДАМИ Российский патент 2011 года по МПК C12P19/34 C07H21/02 C12N15/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к применению в лечебных целях новых физиологически активных соединений.

Известен препарат высокополимерной РНК, извлеченный из клеток пекарских дрожжей с помощью додецилсульфата натрия (ДДС-Na) [1]. Он производится по данной методике с 1955 года в препаративных количествах.

Однако, как видно из чертежа (а), опубликованного впервые в работе [2], данный препарат высокополимерной дрожжевой РНК содержит значительное количество примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами. В присутствие этой примеси высокополимерная дрожжевая РНК действует на органы и ткани лабораторных животных весьма неспецифично и практически не стимулирует биосинтез гемоглобина [3].

Целью настоящего изобретения является получение высокополимерной дрожжевой РНК, способной узконаправленно стимулировать гемопоэз.

Поставленная цель достигается удалением из выделяемой РНК примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами методом низкоскоростного центрифугирования на стадии высаливания РНК хлористым натрием и последующих промывок. Проведенные исследования показали, что при центробежном ускорении от 1000 до 3000 g крупные хлопья высоленной высокополимерной РНК осаждаются образуя осадок - шрот, а мелкая муть ассоциатов РНК с белками и полисахаридами остается во взвешенном состоянии и удаляется декантацией; при ускорении более 3000 g они соосаждаются; при ускорении менее 1000 g осадок - шрот образуется рыхлый и тянется за декантируемым супернатантом. Оптимум - 1500 g (10 мин, без охлаждения) был реализован в предлагаемом методе.

Характеристики полученного препарата: выход из 30 г сухих дрожжей - 0,7-1,0 г; цвет лиофилизованного препарата - белый; растворимость в воде - хорошая; весовая экстинкция, ОЕ₂₆₀/мг - 19-21; содержание КРФ, % ≤2,5; прирост КРФ за 1 сут при 22-25°С в дистиллированной воде, % ≤0,5; спектральные отношения: D₂₃₀/D₂₆₀ - 0,35-0,55; D₂₅₀/D₂₆₀ - 0,86-0,94; D₂₈₀/D₂₆₀ - 0,4-0,55.

Пример осуществления предлагаемого метода

30 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) с содержанием влаги ~7,4% суспендировали по порциям в течение 1-2 мин в 0,3 л кипящей воды, содержащей 7,5 г ДДС-Na (Научно-производственной фирмы «ДИА-ФАРМ», г.Белгород), так, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 99°С. Суспензию кипятили 40 мин при 99-102°С периодически перемешивая. По мере упаривания добавляли в нее кипящую воду до 0,3 л. По окончании экстракции суспензию охлаждали до ~40°С, центрифугировали (1500 g, 10 мин, без охлаждения), супернатант сливали в стеклянную емкость на 0,5 л, добавляли в нее 53 г NaCl (ФГУП комбината «СИБСОЛЬ», г.Усолье-Сибирское, Иркутская обл., ГОСТ Р 51574-2000) и свежую дистиллированную воду до 0,3 л. Суспензию интенсивно перемешивали до полного растворения соли и оставляли при комнатной температуре на 22 ч для формирования осадка. Высоленный крупными хлопьями осадок - шрот, содержащий целевой продукт - высокополимерную РНК - отделяли от супернатанта, содержащего в виде мелкой мути примесные ассоциаты РНК с белками и полисахаридами низкоскоростным центрифугированием (1500 g, 10 мин, без охлаждения), промывали 2-мя порциями по 0,2 л 3 М раствора NaCl и 2-мя порциями (0,1 и 0,05 л) 94%-ного этанола (ОАО «Спиртовый комбинат», г.Мариинск, Кемеровская обл., ГОСТ Р 51652-2000); при этом шрот отделяли от 3 М раствора NaCl и этанола низкоскоростным центрифугированием (1500 g, 10 мин, без охлаждения).

Товарную высокополимерную РНК, свободную от примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами, получали экстракцией ее из промытого шрота дистиллированной водой, осветлением экстракта фильтрованием через стеклянный пористый фильтр «ПОР-100» и заключительной лиофилизацией.

Как видно из чертежа (б), полученный препарат высокополимерной дрожжевой РНК (предполагаемое рыночное название «Виталанг-1») свободен от примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами. При внутрибрюшинном введении лабораторным животным он специфически влияет исключительно на клетки красного костного мозга, в которых сильно стимулирует гемопоэз [3].

Источники информации

1. Crestfield A.M., Smith K.C., Alien F.W. The preparation and characterization of ribonucleic acids from yest // J. Biol. Chem., 1955, V.216, N1, P.185-193.

2. Ямковая Т.В., Хомов В.В., Загребельный С.Н., Ямковой В.И. Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей // Прикл. биохимия и микробиология, 2006, Т.42, N1, С.93-97.

3. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Биологическая активность разных препаратов РНК из пекарских дрожжей // Бюлл. Сибирского отделения РАМН, 2006, №3(121), с.117-121.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен препарат высокополимерной РНК из пекарских дрожжей. Высокополимерную РНК выделяют с помощью ДДС-Na. Высаливают РНК хлористым натрием. Затем осуществляют промывки при низкоскоростном центрифугировании при 1000-3000 g в течение 10 мин без охлаждения. Полученный препарат освобожден от примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами и узконаправленно стимулирует гемопоэз. 1 ил.

Выделенный с помощью ДДС-Na препарат высокополимерной РНК из пекарских дрожжей, отличающийся тем, что освобожден от примесных ассоциатов РНК с белками и полисахаридами путем высаливания РНК хлористым натрием и последующих промывок при низкоскоростном центрифугировании при 1000-3000 g в течение 10 мин без охлаждения.