СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГАСТРОЗАЩИТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2011 года по МПК A61K36/484 A61K35/74 A61P1/04 

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства, обладающего гастрозащитным действием.

Одной из важнейших проблем медицинской науки и практики здравоохранения является профилактика и лечение заболеваний органов пищеварительной системы, имеющих большой удельный вес среди заболеваний внутренних органов. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки встречается у 3-13% лиц с заболеваниями органов пищеварения и поражает людей наиболее активного трудоспособного возраста, обусловливая временную, а иногда и стойкую утрату трудоспособности. Язвенная болезнь характеризуется образованием язвы желудка или двенадцатиперстной кишки вследствие расстройства общих и местных механизмов нервной и гуморальной регуляции основных функций гастродуоденальной системы [4, 8, 12, 14, 19, 20].

В настоящее время определены основные и предрасполагающие факторы заболевания. К основным факторам относятся: 1) нарушения гуморальных и нейрогуморальных механизмов, регулирующих пищеварение и регенерацию тканей; 2) расстройства местных механизмов пищеварения; 3) изменения структуры слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Несмотря на значительные успехи в изучении патогенеза язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, разработки новых лекарственных средств для ее профилактики и лечения, уровень заболеваемости среди населения остается достаточно высоким. Это обуславливает большое социальное и медицинское значение создания и применения новых лекарственных средств для профилактики и лечения заболеваний органов пищеварительной системы, среди которых особого внимания заслуживают лекарственные средства природного происхождения, обладающие антиульцерогенным и гастрозащитным действием [2].

Дисбиотические состояния, связанные с микроэкологическими изменениями кишечника, в настоящее время стали интересовать практически всех клиницистов, а пробиотические препараты, корригирующие нарушенную нормальную микрофлору, широко используются при комплексной терапии как энтеральных, так и парентеральных инфекционных процессов [7]. Дисбактериозы кишечника различной этиологии остаются важной медико-социальной и экологической проблемой и выявляются практически у всех больных с гастроэнтерологической патологией. Так, 90% россиян страдают заболеваниями органов системы пищеварения, которые характеризуются хроническим и рецидивирующим течением. Известно, что желудочно-кишечная экосистема человека и животных рассматривается как одна из важных систем защиты организма. В физиологических условиях микрофлора, главным образом анаэробные представители индигенной микрофлоры, обеспечивают колонизационную резистентность пищеварительного тракта, антитоксическое действие, поддержание оптимального уровня метаболических и ферментативных процессов, иммунный статус, антимутагенную и антиканцерогенную активности [32]. Природные, техногенные и другие экстремальные факторы негативно воздействуют на организм, его микрофлору и приводят к синдрому нарушений микроэкологии пищеварительного тракта - дисбактериозам. Кишечную микрофлору можно характеризовать как индикаторный показатель благополучия организма, который реагирует на все агенты, вызывающие нарушения гомеостаза [31, 33]. Кишечная микрофлора - один из дезинтоксикационных факторов, осуществляющих защиту организма от токсических соединений посредством восстановительных процессов в кишечнике. В условиях чрезмерного экзогенного и эндогенного «загрязнения» кишечная микрофлора не может выполнять присущие ей функции [5, 10, 13, 15, 25, 35, 36].

Известно, что в фармакотерапии заболеваний органов пищеварительной системы определенное место занимают лекарственные средства растительного происхождения, которые являются биогенетически сложившимися комплексами и обладают большим сродством к живым системам, в частности сок подорожника (Succus Plantaginis), плантаглюцид (Plantaglucidum), представляющие собой смесь полисахаридов из листьев подорожника большого (Plantago major L.), семейства (Plantaginaceae), произрастающего по всей территории России [21], недостатком которых является то, что при их использовании не учитывается состояние микробиоценоза кишечника, которое также претерпевает патологические изменения.

Следовательно, среди наиболее актуальных проблем современной медицины и практического здравоохранения остаются изучение вопросов профилактики и разработка методов лечения дисбактериозов кишечника.

Таким образом, актуальным является создание комплексного средства, которое положительно влияло бы на функциональное состояние органов пищеварительной системы, а также нормализовало нарушения микробиоценоза кишечника.

Наиболее близким способом к предлагаемому решению является способ производства кисломолочного продукта (Патент РФ №2092064, МПК А23С 9/12, опубл. 10.10.1997 г.) [34].

Недостатком данного способа является то, что данный продукт готовится в домашних условиях. Совместное культивирование суточных культур лакто- и бифидобактерий или термофильных стрептококков в гидролизатно-молочной среде приводит, как правило, к подавлению роста бифидобактерий, поскольку они обладают слабой кислотообразующей способностью.

Целью предлагаемого технического решения является расширение ассортимента средств, применяемых при лечении и профилактике заболеваний органов пищеварительной системы, путем применения комплексного средства, в состав которого входят пробиотик на молочной основе с бифидобактериями, экстракт растительного происхождения и минеральная добавка природного цеолита - клиноптилолита.

Сочетанное применение пробиотика из одного доминантного представителя нормальной микрофлоры кишечника - бифидобактерий с растительным экстрактом корней солодки голой и минеральной добавки - природного цеолита позволит потенцировать эффективность каждого компонента воздействием на различные звенья патологического процесса.

Для достижения поставленной цели в способе получения средства, обладающего гастрозащитной активностью, в качестве растительного материала используют сухой экстракт корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. (ГФ X ст.260 Extraction Glycyrrhizae siccum) [11], пробиотика - чистую культуру бифидобактерий - шт. B.longum В 379 М, а минеральной добавки - цеолит природный (клиноптилолит) фракцией 0-1 мм (ТУ 2163-002-12763074-97). В сухом экстракте корней солодки голой содержание глицирризиновой кислоты не менее 17%.

По классификации К.К.Сидорова [28] экстракт корней солодки голой относится к относительно безвредным веществам.

Предлагаемый способ получения гастрозащитного средства осуществляется следующим образом.

Коровье молоко очищают, обезжиривают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин. Охлаждают до 37°С, вносят 2% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3-0,5% к массе молока и 0,5-1% цеолита природного - клиноптилолита к массе молока, смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³. Затем смесь охлаждают до 4-6°С и хранят в холодильнике в течение 72 часов.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1.

Коровье молоко очищают, вносят сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 1% к массе молока. Смесь тщательно перемешивают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С и вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, затем термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.

Пример 2.

Коровье молоко очищают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С, вносят сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,3% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 1% к массе молока, затем смесь тщательно перемешивают и вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, затем термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.

Пример 3.

Коровье молоко очищают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С, вносят 1% активизированной жидкой чистой культуры бифидобактерий шт. B.longum В 379 М для культивирования бифидобактерий в молоке, сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой в количестве 0,5% и природный цеолит - клиноптилолит в количестве 0,5% к массе молока, затем смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³. Готовую смесь охлаждают до 6°С и хранят в холодильнике в течение 72 ч. Смесь применяют по 50-100 мл 2-3 раза в день в течение 1 месяца при патологических состояниях органов пищеварительной системы, сопровождающихся дисбактериозом кишечника различной степени выраженности.

Гастрозащитное действие комплексного средства разработанного состава оценивали согласно общепринятым методам [22]. При определении гастрозащитного действия ведущее значение имели изменения показателей функционального состояния желудочно-кишечного тракта, биохимических показателей сыворотки крови, данных состава микробиоценоза толстого отдела кишечника, а также морфологические изменения тонкого отдела кишечника. Были использованы общепринятые методы исследования крови. Морфологическое исследование проводили по методам, изложенным в руководствах [3, 9, 27].

Эксперименты были проведены на 60 белых беспородных крысах с исходной массой 180-200 г. С целью определения фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства при повреждениях желудка была использована общепринятая модель ацетатной язвы по Okabe [37], повреждения слизистой оболочки желудка вызывали введением ацетилсалициловой кислоты [26]. Также для объективной оценки фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства на молочной основе были проведены исследования при хроническом повреждении желудка в условиях экспериментального «рефлюкс»-гастрита [1].

Биохимический анализ сыворотки крови - общий белок, глюкоза, гемоглобин, мочевина, мочевая кислота, общий билирубин, креатинин, холестерин, триглицериды, липопротеиды высокой плотности проводили на биохимическом анализаторе «Сапфир», Япония [16, 17].

С целью установления видовой принадлежности выделенных из фекалий белых крыс микроорганизмов их изолировали в чистой культуре, отбирая колонии, лежащие отдельно друг от друга. Все типы колоний микроскопировали [23].

Интенсивность процессов ПОЛ оценивали в экспериментах in vitro по методу Р.А.Темирбулатова и Е.И.Селезнева (1981) [29, 30]. В основе метода лежит свойство малонового диальдегида реагировать с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) при высокой температуре и кислой среде. Определение осуществляли спектрофотометрически по изменению концентрации ТБК-активных продуктов в сыворотке крови, выражаемой в единицах концентрации МДА, определяемых по разнице поглощения исследуемых проб при длинах волн 532 нм и 580 нм.

Определение нуклеиновых кислот проводили по модифицированному методу Г.А.Критского и С.В.Александрова (1980) [18]. Метод основан на определении изменений содержания и спектра нуклеиновых кислот, экстрагируемых из лейкоцитарной массы крови.

Бифидосодержащую смесь на молочной основе с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита вводили крысам per os по 1 мл на 100 г массы животных через сутки после индуцирования язвы ежедневно в течение всего эксперимента. Препарат сравнения - плантаглюцид в дозе 10 мл/кг массы применяли по аналогичной схеме. Животным контрольной группы с моделью язвы желудка вводили дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. Исследования проводили на 7-е, 14-е и 21-е сутки наблюдения.

Полученные результаты исследований обрабатывали с применением критериев Стьюдента [24].

Результаты опытов представлены в табл. 1, 2, 3, 4.

Таблица 1 Влияние гастрозащитного средства на функциональное состояние слизистой оболочки желудка у белых крыс при язве желудка по Okabe Показатели Группы животных Интактная, n=10 Контрольная (язва), n=10 Опытная (язва + гастрозащитное средство), n=10 Опытная (язва + плантаглюцид), n=10 1 2 3 4 5 7-е сутки МДА в гомогенате желудка, ммоль/г 0,013±0,003 0,069±0,009* 0,044±0,004** 0,057±0,008 Темп желудочной секреции, мл/100 0,65±0,04 0,23±0,01* 0,38±0,02** 0,29±0,02** Общая кислотность, ед.титра 140,3*3,58 40,1±2,67* 65,5±3,31** 50,28±2,73** Свободная соляная кислота, ед.титра 47,62±2,63 14,35±0,95* 23,46±1,49** 19,21±1,31** Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г 80,3±6,39 33,1±1,42* 46,53±2,07** 41,83±2,12** % животных с точечными кровоизлияниями - 100 60 70 Индекс Паулса для точечных кровоизлияний - 3,38±0,13 2,85±0,11 2,97±0,12 % животных с эрозиями - 80 50 60 Индекс Паулса для эрозий - 4,36±0,17 3,42±0,15 3,83±0,16 14-е сутки МДА в гомогенате желудка, ммоль/г 0,013±0,003 0,058±0,008* 0,035±0,009** 0,039±0,004** Темп желудочной секреции, мл/100 0,65±0,04 0,28±0,02* 0,42±0,02** 0,34±0,03** Общая кислотность, ед.титра 140,3±3,58 46,1±1,62* 78,7±2,03** 63,6±1,81** Свободная соляная кислота, ед.титра 47,62±2,63 20,35±0,91* 32,74±1,44** 29,76±1,49** Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г 80,3±6,39 40,2±1,51* 53,8±2,47** 48,8±2,12** % животных с точечными кровоизлияниями - 80 60 60 Индекс Паулса для точечных кровоизлияний - 3,04±0,11 2,17±0,14 2,25±0,20 % животных с эрозиями - 70 40 50 Индекс Паулса для эрозий - 3,74±0,15 2,15±0,21 2,42±0,24 21-е сутки МДА в гомогенате желудка, ммоль/г 0,013±0,003 0,049±0,007* 0,021±0,005** 0,024±0,004** Темп желудочной секреции, мл/100 0,65±0,04 0,31±0,01* 0,44±0,020** 0,37±0,013** Общая кислотность, ед.титра 140,3±3,58 50,5±1,77* 113,2±2,65** 98,1±2,52** Свободная соляная кислота, ед.титра 47,62±2,63 25,43±0,89* 41,84±1,42** 33,38±1,51** Дебит-час соляной кислоты, мкг/100 г 80,3±6,39 46,6±1,65* 67,2±2,56** 56,2±2,43** % животных с точечными кровоизлияниями - 70 20 30 Индекс Паулса для точечных кровоизлияний - 2,72±0,21 0,83±0,15 1,16±0,14 % животных с эрозиями - 50   20 Индекс Паулса для эрозий - 3,08±0,15   1,32±0,18 Примечание: * - различия достоверны относительно интактной группы при Р≤0,05; ** - данные достоверны относительно контрольной группы при Р≤0,05.

Через 2-3-е суток после индуцирования ацетатной язвы и в последующие сроки у животных отмечались заторможенность, гиподинамия, потеря массы тела в среднем на 8%, вялое заживление операционного шва, гибель животных составила 30%. На 7-е сутки при макроскопическом осмотре слизистой оболочки желудка отмечались снижение тонуса желудка, отечность слизистой, сглаженность ее рельефа, гиперемия с очагами цианоза и анемии, пылевидные кровоизлияния, единичные эрозии.

Гистологические исследования показали, что все животные имели поражение слизистой оболочки желудка, включая подслизистый и мышечный слои.

Как следует из данных табл. 1, в контрольной группе животных на 7-е сутки после индуцирования язвы желудка в 100% случаев на слизистой оболочке желудка белых крыс отмечали точечные кровоизлияния, эрозии наблюдали у 80% животных.

Развитие деструктивных процессов в слизистой оболочке желудка сопровождалось интенсификацией процессов перекисного окисления липидов в тканях желудка. Содержание МДА в гомогенате желудка контрольных животных увеличивалось в 5,31 раз по сравнению с интактной группой животных. При курсовом введении гастрозащитного средства на молочной основе содержание МДА на 7 сутки эксперимента снижалось в 1,57 раз до 0,044±0,004 ммоль/г по сравнению с контрольной группой животных (0,069±0,009 ммоль/г) и к концу эксперимента содержание малонового диальдегида в гомогенате желудка белых крыс составляло 0,021±0,005 ммоль/г.

У животных контрольной группы достоверно резко снизился темп желудочной секреции - в 2,83 раз с одновременным снижением общей кислотности с 140,3±3,58 до 40,1±2,67 ед. титра, а также снизилось содержание свободной соляной кислоты с 47,62±2,63 до 14,35±0,95 ед. титра и снизился дебит-час соляной кислоты в 2,43 раз.

Гастрозащитное средство на молочной основе обладает фармакотерапевтической активностью. Так, уменьшился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60% и 70% в группе животных, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид соответственно, а процент животных с эрозиями в группе животных, получавших гастрозащитное средство, уменьшился до 50%, а в группе животных, получавших плантаглюцид, до 60% по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,38±0,13 в контрольной группе и до 2,85±0,11 и 2,97±0,12 в опытных группах соответственно и индекс Паулса для эрозий с 4,36±0,17 до 3,42±0,15 и 3,83±0,16. Положительная динамика сохранялась и на 14-е сутки. А к 21-м суткам процент животных с точечными кровоизлияниями в группе животных, получавших гастрозащитное средство, составлял 20%, а в группе сравнения - 30%. В контрольной группе животных процент животных с точечными кровоизлияниями составил 70%.

Темп желудочной секреции у животных, получавших гастрозащитное средство, повысился в 1,63 раза по сравнению с контрольной группой животных с одновременным увеличением количества свободной соляной кислоты в желудочном соке до 23,46±1,49 ед. титра. Общая кислотность содержимого желудка у животных, получавших гастрозащитное средство, повысилась на 25,4±2,99 ед. титра.

На 14-е сутки уменьшился процент животных с точечными кровоизлияниями до 60% в группе животных, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид, а процент животных с эрозиями в первой группе уменьшился до 40%, а во второй - до 50% по сравнению с контрольной группой животных. Соответственно, снизился и индекс Паулса для точечных кровоизлияний с 3,04±0,11 в контрольной группе и до 2,17±0,14 и 2,25±0,20 в опытных группах соответственно и индекс Паулса для эрозий с 3,74±0,15 до 2,15±0,21 и 2,42±0,24.

На 21-е сутки эксперимента процент животных с точечными кровоизлияниями, получавших гастрозащитное средство и плантаглюцид, составлял соответственно 20% и 30%, а в группе животных, получавших гастрозащитное средство, животных с эрозиями не выявлено; в группе животных, получавших плантаглюцид, процент животных с эрозиями составил 20%.

Результаты биохимических исследований сыворотки крови белых крыс представлены в табл.2 и показывают, что у животных контрольной группы отмечено достоверное снижение уровня белка с 78,3±1,82 г/л до 60,6±1,47 г/л; железа - в 1,67 раз, мочевой кислоты - в 1,75 раз, что свидетельствует о нарушении функции желудочно-кишечного тракта, вызванном травмами и сопутствующим воспалительным процессом.

Отмечено также достоверное повышение уровня холестерина и малонового диальдегида до 1,8±0,13 ммоль/л и 0,073±0,0017 нмоль/л соответственно.

При курсовом введении гастрозащитного средства на 7-е сутки отмечено статистически достоверное повышение содержания общего белка до 66,6±1,63 г/л, мочевой кислоты до 148,0±6,73 мкмоль/л, железа до 31,3±0,63 мкмоль/л и достоверное снижение общего билирубина и МДА у животных, получавших гастрозащитное средство, по сравнению с контрольной группой животных (табл.2). Подобная динамика наблюдалась и в остальные сроки исследования.

На 7-е сутки исследования площадь язвенных дефектов достоверно уменьшалась со 105,38±2,42 мм² до 19,37±1,54 мм² (табл.3.).

Таблица 2 Влияние гастрозащитного средства на биохимические показатели крови белых крыс при язве желудка по Okabe (M±m, n=10) Показатели Группы животных Интактная Контроль Опытная (гастрозащитное средство) Опытная (плантаглюцид) 1 2 3 4 5 7-е сутки Общий белок, г/л 78,3±1,82 60,6±1,47* 66,6±1,63** 61,5±1,36 Общий билирубин, мкмоль/л 7,8±0,20 12,6±0,32* 10,6±0,28** 11,5±0,26 Холестерин, ммоль/л 1,4±0,12 1,8±0,13* 1,6±0,04 1,7±0,05 Железо, мкмоль/л 44,1±0,88 26,4±0,56* 31,3±0,63** 28,3±0,49** Триглицериды, ммоль/л 0,7±0,05 0,4±0,03* 0,5±0,04 0,5±0,03 Мочевая кислота, мкмоль/л 184,1±12,36 105,1±8,34* 148,0±6,73** 135,6±5,51** Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл 6,34±0,31 6,20±0,29 6,23±0,25 6,20±0,27 МДА, нмоль/л 0,047±0,0016 0,073±0,0017* 0,064±0,0016** 0,069±0,0017 14-е сутки Общий белок, г/л 78,3±1,82 62,3±1,21* 67,3±1,74** 63,8±1,42 Общий билирубин, мкмоль/л 7,8±0,20 11,7±0,29* 9,8±0,29** 10,9±0,30** Холестерин, ммоль/л 1,4±0,12 1,7±0,11* 1,5±0,12 1,6±0,11 Железо, мкмоль/л 44,1±0,88 29,5±0,53* 37,6±0,61** 33,8±0,57** Триглицериды, ммоль/л 0,7±0,05 0,4±0,03* 0,5±0,02** 0,5±0,01** Мочевая кислота, мкмоль/л 184,1±12,36 124,3±9,22* 157,3±10,87** 148,4±9,74** Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл 6,34±0,31 6,20±0,29 6,30±0,24 6,20±0,25 МДА, нмоль/л 0,047±0,0016 0,070±0,0017* 0,061±0,0016** 0,067±0,0017** 21-е сутки Общий белок, г/л 78,3±1,82 65,9±1,62* 73,2±1,84** 69,8±1,79** Общий билирубин, мкмоль/л 7,8±0,20 10,5±0,31* 9,1±0,20** 10,1±0,27** Холестерин, ммоль/л 1,4±0,12 1,7±0,13* 1,6±0,12 1,6±0,14 Железо, мкмоль/л 44,1±0,88 30,3±0,61* 40,7±0,74** 39,4±0,68** Триглицериды, ммоль/л 0,7±0,05 0,5±0,03* 0,6±0,02 0,5±0,03 Мочевая кислота, мкмоль/л 184,1±12,36 130,7±6,23* 170,8±10,36** 162,3±9,19** Нуклеиновые кислоты, мг/100 мл 6,34±0,31 6,20±0,29 6,3710,30 6,28±0,26 МДА, нмоль/л 0,047±0,0016 0,06810,0015* 0,05310,0016** 0,061±0,0018** Примечание: * - различия достоверны относительно интактной группы при P≤0,05; ** - данные достоверны относительно контрольной группы при Р≤0,05.

Таблица 3 Влияние гастрозащитного средства на течение язвы желудка по Okabe у белых крыс Группы животных Сроки исследования, сут Площадь язвенных дефектов, мм² Контрольная (вода) 7 105,38±2,42 14 55,41±1,53 21 32,16±1,27 Опытная (гастрозащитное средство) 7 19,37±1,54* 14 8,14±0,020* 21 - Опытная (плантаглюцид) 7 28,87±1,23* 14 17,31±0,76* 21 3,49±0,08* Примечание: * - данные достоверны соответственно срокам исследования относительно контрольной группы животных при Р≤0,05.

На 14-е сутки наблюдения как следует из данных таблицы 1, в контрольной группе животных в 100% случаев отмечали точечные кровоизлияния, эрозии наблюдали у 80% животных с площадью язвенных дефектов 55,41±1,53 мм². У животных, получавших гастрозащитное средство, на 14-е сутки исследований площадь язвенных дефектов уменьшалась до 8,14±0,02 мм². Подобная динамика наблюдалась и в группе животных, получавших плантаглюцид, но площадь язвенных дефектов была больше во все сроки наблюдения, чем в группе животных, получавших гастрозащитное средство на молочной основе.

В группе животных, получавших гастрозащитное средство, на 21-е сутки наблюдения язв уже не наблюдалось, а в группе контрольных животных площадь язвенных дефектов составляла 32,16±1,27 мм². В группе животных, получавших препарат сравнения плантаглюцид, площадь язвенных дефектов достоверно уменьшалась с 32,16±1,27 мм² до 3,49±0,08 мм².

При микробиологическом исследовании толстого отдела кишечника отмечается, что гастрозащитное средство с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита оказывает положительное влияние на состав микрофлоры толстого отдела кишечника (табл. 4).

Так, повышается титр бифидобактерий и лактобацилл, снижается количество энтерококков, стафилококков, клостридий, грибов рода Кандида, возрастает по сравнению с данными у животных контрольной группы количество полноценной формы кишечной палочки, и соответственно, снижается число бактерий с ослабленными свойствами.

Таблица 4 Влияние гастрозащитного средства на состав микрофлоры кишечника белых крыс при язве по Okabe (M±m, n=6) lg КОЕ/см³   Группы бактерий Интактная группа (Н₂О) Контрольная группа Опытные группы, получавшие гастрозащитное средство 7 суток 14 суток 21 сутки Bifidobacterium sp. 7,26±0,39 4,71±0,32* 5,84±0,22 6,08±0,31** 6,63±0,26** Lactobacillus sp. 6,07±0,29 4,30±0,18* 4,39±0,26 4,92±0,17 5,53±0,24** Clostridium sp. 1,48±0,13 3,62±0,19* 2,83±0,20** 2,53±0,14** 2,00±0,16** E.coli 5,31±0,23 5,58±0,26 5,44±0,16 5,53±0,18 5,64±0,14 Enterococcus sp. 4,35±0,20 6,63±0,25* 6,21±0,23 4,93±0,22** 4,09±0,21** Staphylococcus 3,16±0,15 5,00±0,18* 4,77±0,21 4,58±0,17 4,31±0,18 ** Candida sp. 1,29±0,10 3,64±0,18* 3,23±0,14 3,08±0,22 2,63±0,18** Примечание: * - данные достоверны по сравнению с интактной группой при Р≤0,05; ** - данные достоверны по сравнению с контрольной группой при Р≤0,05.

Положительный эффект гастрозащитного средства на организм проявляется через нормализацию микробной экологии кишечника за счет стимуляции роста представителей индигенной микрофлоры, в результате продукции витаминов и других ростстимулирующих факторов, нормализации рН, нейтрализации токсинов, изменения микробного метаболизма.

Гастрозащитное средство реализует свое положительное влияние на физиологическую функцию и биохимические реакции либо непосредственно вмешиваясь в метаболическую активность клеток соответствующих органов и тканей, либо опосредовано через регуляцию функционирования биопленок на слизистых организма.

Флавоноидные соединения, входящие в состав гастрозащитного средства, оказывают антиоксидантное действие, выражающееся в способности ингибировать процессы перекисного окисления липидов и стабилизировать биологические мембраны клеток стенки желудка. Гастрозащитное средство способствует снижению накопления одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида.

Природный цеолит в желудочно-кишечном тракте не всасывается, не попадает в кровь сам, как кристалл, а проходит транзитом, взаимодействуя только на уровне селективного ионного обмена и избирательной сорбции при контакте с кровеносными и лимфатическими сосудами кишечной стенки, отдавая или забирая микро-, макроэлементы, катализируя биохимические реакции.

Результаты проведенных исследований при различных повреждениях слизистой оболочки желудка (при введении уксусной, ацетилсалициловой кислоты) показали, что гастрозащитное средство на молочной основе в экспериментально-терапевтической дозе обладает фармакотерапевтическим действием. Показано, что у белых крыс с ацетатной язвой желудка в меньшей степени проявляются признаки воспаления: отечность и гиперемия стромы, стаз форменных элементов, дистрофия и десквамация покровного эпителия, а также нарушение рельефа слизистой оболочки желудка.

При проведении морфологического исследования выявлено, что в тонком отделе кишечника животных, получавших гастрозащитное средство с экстрактом корней солодки голой и природного цеолита, в отличие от контроля слабее выражены гемодинамические нарушения, клеточная инфильтрация.

Таким образом, исследование фармакотерапевтической эффективности гастрозащитного средства на молочной основе показало, что курсовое введение его в экспериментально-терапевтических дозах на фоне язвенного дефекта слизистой оболочки желудка белых крыс оказывало гастрозащитное действие, которое характеризовалось нормализацией структурно-функционального состояния слизистой оболочки желудка на более ранних стадиях патологического процесса.

Список литературы

1. Акимов Н.П. О дуоденогастральном рефлюксе. / Н.П.Акимов, С.С.Бацков // Терапевтический архив. - 1982. - Т.54, №2. - С.137-139.

2. Амосова Е.Н. Поиск новых противоязвенных средств из растений Сибири и Дальнего Востока. / Е.Н.Амосова, Е.П.Зуева, Т.Г.Разина и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1998. - №6. - С.31-35.

3. Аруин Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. / Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. - М.: Триада-Х. - 1998. - 496 с.

4. Баранская Е.К. Патогенез язвенной болезни. / Е.К.Баранская // Русский медицинский журнал. - 2000. - Т.2.

5. Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию. / Н.В.Белобородова // Антибиотики и химиотерапия. - М., 1998. - Т.43, №9. - С.44-49.

6. Белоусов А.С. Диагностика, дифференциальная диагностика и лечение болезней органов пищеварения. / А.С.Белоусов, В.Д.Водолагин, В.П.Жаков / М., Медицина. - 2002. - 424 с.

7. Бондаренко В.М. Дисбиотические состояния и лечебные мероприятия при них. / В.М.Бондаренко, Н.М.Грачева // Вестник РАМН. - 2005. - №12. - С.24-29.

8. Булгаков С.А. Расширение возможностей лечения язвенной болезни при использовании современных антацидных препаратов. / С.А.Булгаков // Клиническая фармакология и терапия. - 1998. - Т.7. - С.34-37.

9. Волкова О.В. Основы гистологии с гистологической техникой. / О.В.Волкова, Ю.К.Елецкий. - М.: Медицина. - 1982. - 303 с.

10. Воробьев А.А. Микроэкологические нарушения при клинической патологии и их коррекция бифидосодержащими пробиотиками. / А.А.Воробьев, В.М.Бондаренко, Е.А.Лыкова и др. // Вестник РАМН. - 2004. - №2. - С.13-17.

11. Государственная фармакопея XI издание. - Вып.2. - М.: Медицина. - 1990.

12. Григорьев П.Я. Современные направления в фармакотерапии болезней органов пищеварения. / П.Я.Григорьев, Э.П.Яковенко, А.В.Яковенко // Клиническая медицина. - 1999. - №10. - С.7-10.

13. Златкина А.Р. Современные подходы к коррекции дисбиоза кишечника. / А.Р.Златкина // Росс. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1999. - №3. - С.64-67.

14. Ивашкин В.Т. Место антацидов в современной терапии язвенной болезни. / В.Т.Ивашкин, Е.К.Баранская, О.С.Шифрин и др. // Российский медицинский журнал. - 2002. - Т.4, №2. - С.42-46.

15. Калмыкова А.И. Пробиотики: Терапия и профилактика заболеваний. Укрепление здоровья. / А.И.Калмыкова. - Новосибирск. 2001. - 203 с.

16. Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник. / В.С.Камышников. - Минск. - Т.1. - 2003. - 495 с.

17. Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник. / В.С.Камышников. - Минск. - Т.2. - 2003. - 463 с.

18. Критский Г.А. Нуклеиновые кислоты и биологическое действие ионизирующей радиации. / Г.А.Критский. - М. - 1967. - С.44-56.

19. Лапина Т.Л. Современные подходы к лечению язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. / Т.Л.Лапина, В.Т.Ивашкин // Российский медицинский журнал. - 2001. Т.3, №1. - С.10-15.

20. Маев И.В. Эрозивные поражения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки (этиология, патогенез, клиника и лечение) / И.В.Маев, Л.Л.Орлов, Ю.В.Нефедова // Клиническая медицина. - 1997. - №6. - С.57-61.

21. Машковский М.Д. Лекарственные средства. / М.Д.Машковский в двух частях, Ч.1. - М.: Медицина. - 1993. - 763 с.

22. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. / В.В.Меньшиков, Л.Н.Делекторская, Р.П.Золотницкая и др. - М.: Медицина. - 1987. - 367 с.

23. Методы общей бактериологии. / Под ред. Герхардта Ф. - М.: Мир. - 1983. Т.1. - С.536.

24. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе. / Е.В.Моцевичюте-Эрингене // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1964. - №4. - С.71-78.

25. Наумова О.В. Микрофлора кишечника и желчи у больных с воспалительными заболеваниями гепатобилиарной системы. / О.В.Наумова, Е.Е.Белова, Т.И.Хабазова // Тез. докл. научно-практ. конф. «Дисбиотические состояния человека, пути профилактики и лечения». - Пермь, 1993. - С.36-40.

26. Оболенцева Г.В. Влияние некоторых природных веществ на язвенное поражение желудка крыс, вызванное ацетилсалициловой кислотой. / Г.В.Оболенцева, Я.И.Хаджай // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1984. - №3. - С.39-41.

27. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. / Э.Пирс. - М.: Ин. лит. - 1962. - 962 с.

28. Сидоров К.К. О классификации токсических ядов при парентеральных способах введения. / К.К.Сидоров / В кн.: Токсикология новых промышленных химических веществ. - М., 1973. - С.47-51.

29. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. / И.Д.Стальная, Т.Г.Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - С.66-68.

30. Темирбулатов Р.А. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение. Р.А.Темирбулатов, Е.И.Селезнев // Лабораторное дело. - 1981. - №4. - С.209-211.

31. Феклисова Л.В. Становление пробиотикотерапии в России. / Л.В.Феклисова, Ю.В.Несвижский, А.М.Амерханова и др. // Вестник РАМН. - 2005. - №12. - С.24-29.

32. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.1: Микрофлора человека и животных и ее функции. / В.А.Шендеров. - 1998. - 288 с.

33. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. / Б.А.Шендеров // Росс. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1998. - №1. - С.61-65.

34. Патент РФ №2092064, МПК А23С 9/12, 10.10.1997.

35. Collins M.D. Probiotics, prebiotics and synbiotics; approaches for modulating the microbial ecology of the gut. / M.D.Collins, G.R.Gibson // Am. J. Clin. Nutr. - 1999. - V.69. - P.1052-1057.

36. Folwaczny C. Probiotics for prevention of uncreative colitis recurrence: alternative medicine added to standard treatment. / C.Folwaczny // J.Gastroenterol. - 2000. - V.38, №6. - P.547-550.

37. Okabe S. The acetic ulcer model - a procedure for chronic duodenal of gastric ulcer. / S.Okabe, С.J.Pfeiffer // Peptic ulcer / С.J.Ed.Pfeiffer. - Copenhagen. - 1971. - P.13-20.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения средства, обладающего гастрозащитным действием (варианты). Способ получения средства, обладающего гастрозащитным действием, согласно которому в молоко после автоклавирования и охлаждения вносят 2% активизированной жидкой культуры Bifidobacterium longum В 379 М, сухой водорастворимый экстракт корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. и цеолит природный - клиноптилолит, смесь тщательно перемешивают и термостатируют до образования сгустка с определенной кислотностью. Способ получения средства, обладающего гастрозащитным действием, согласно которому в молоко добавляют экстракт корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. и цеолит природный - клиноптилолит, смесь перемешивают, автоклавируют, охлаждают и вносят 2% активизированной жидкой культуры Bifidobacterium longum В 379 М, смесь перемешивают и термостатируют до образования сгустка с определенной кислотностью. Средство, полученное вышеописанным способом (варианты), положительно влияет на функциональное состояние желудочно-кишечного тракта, эффективно воздействует на различные звенья патологического процесса, нормализует нарушения микробиогенеза кишечника. 2 н.п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ получения средства, обладающего гастрозащитным действием, заключающийся в культивировании бифидобактерий штамма Bifidobacterium longum В 379 М в молоке, отличающийся тем, что в молоко после автоклавирования при 120°С в течение 15 мин и охлаждения до 37°С вносят 2% активизированной жидкой культуры Bifidobacterium longum В 379 М, 0,3-0,5% сухого водорастворимого экстракта корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. и 0,5-1,0% цеолита природного -клиноптилолита к массе молока, смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³.

2. Способ получения средства, обладающего гастрозащитным действием, заключающийся в культивировании бифидобактерий штамма Bifidobacterium longum В 379 М в молоке, отличающийся тем, что в молоко добавляют 0,3-0,5% экстракта корней солодки голой Glycyrrhiza Glabra L. и 0,5-1,0% цеолита природного- клиноптилолита, смесь перемешивают, автоклавируют при 120°С в течение 15 мин, охлаждают до 37°С и вносят 2% активизированной жидкой культуры Bifidobacterium longum В 379 М, смесь перемешивают и термостатируют при 37°С в течение 16-18 ч до образования сгустка кислотностью 55-65°Т с титром 9 lg КОЕ/см³.