СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ФИБРИНМОНОМЕРОВ В КРОВИ Российский патент 2011 года по МПК G01N33/86 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическому способу определения концентрации компонентов свертывания крови и продуктов их превращения в биологических жидкостях.

При многих заболеваниях и патологических состояниях (геморрагические и ишемические инсульты, атеросклероз, инфаркт миокарда, операционные травмы, кесарево сечение и т.д.) возникает необходимость количественного определения содержания фибринмономеров и продуктов деградации фибрина в плазме крови, однако до настоящего времени применяются только качественные методы определения наличия фибринмономеров в плазме крови.

Известен способ выявления фибринмономеров в плазме крови по образованию желеобразной массы под влиянием 50% этанола [Лычев В.Г. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. - М.: Медицина, 1993. - 160 с.]. Желеобразность плазмы через 10 мин после добавления 50% этанола рассматривают как признак наличия в ней фибринмономеров. Если образуются крупнозернистые частицы, то результат оценивают как слабоположительный, либо - отрицательный. Метод не позволяет определить концентрацию фибринмономеров.

А.Н.Момонт с соавт. предложили метод определения фибринмономеров и продуктов деградации фибрина по образованию в плазме зерен (паракоагулянта) фибрина после добавления раствора фенантролина [Момонт А.Н., Елыкомов В.А., Баркаган З.С. Клиническая и лабораторная диагностика. 1996. - №4. - С.17-20]. Основными недостатками метода являются его субъективность и наличие ложно положительных результатов, которые возникают, в частности, в результате недостаточного перемешивания крови и цитрата натрия или при хранении плазмы более 1 часа, что ведет к инактивации факторов свертывания крови.

Задачей настоящего изобретения является разработка объективного способа определения количества фибринмономеров в плазме крови.

Технический результат - простой, не требующий больших материальных затрат, основанный на спектрофотометрическом определении фибринмономеров.

Технический результат достигается тем, что осадок плазмы гомогенизируют в 0,5 N гидроксиде натрия проводят спектрофотометрический анализ взвеси и количество фибринмономеров определяют по фигрограмме.

Положительный эффект предлагаемого способа достигают за счет количественного определения фибринмономеров спектрофотометрически. Сравнительная характеристика предлагаемого способа и способа прототипа представлена в таблице 1.

Предложенный способ осуществляют следующим образом.

Из локтевой вены берут кровь в пластиковую пробирку, содержащую 3,8% раствора натрия лимоннокислого 3-замещенного (цитрата натрия). Соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1 (4,5 мл крови и 0,5 мл цитрата натрия). Содержимое центрифугируют при 4000 об/мин в течение 10 мин (2000g). В результате получаем бедную тромбоцитами плазму, затем к 0,4 мл плазмы крови добавляем 0,15 мл 50% этанола и центрифугируем при 3500 об/мин - 15 мин. Полученный центрифугат (осадок) промываем 0,14 М раствором хлорида натрия и центрифугируем дважды при 3.500 об/мин по 10 мин. Полученный осадок гомогенизируем в 7 мл 0,5 н. раствора едкого натрия в течение 1-2 мин и помещаем в кварцевую кювету для спектрофотометрии при светопропускании 280 нм и по фигрограмме определяем количество фибринмономеров. Колебания экстинции от 0,1 до 0,8 свидетельствуют о концентрации фибринмономеров в плазме крови.

Примеры практического использования предложенного способа

Пример 1

В неврологическое отделение ОКБ №2 г.Тюмени поступила больная Щербакова А.И., 68 лет с диагнозом: «Ишемический инсульт» (средней степени тяжести).

У больной взяли кровь из локтевой вены в шприц со стабилизирующим раствором (3,8% р-р цитрата натрия) в соотношении 1:9. Пробу в количестве 5 мл поместили в центрифужную пробирку и центрифугировали с ускорением 2000g в течение 10 мин, затем к 0,4 мл плазмы крови переносили в другую пробирку и добавляли 0,15 мл 50% этанола. Включали секундомер и по истечении 10 мин отмечали появление зерен паракоагулянта, затем центрифугировали при 3500 об/мин - 15 мин. Полученный центрифугат (осадок) промывали 0,14 М раствором хлорида натрия и дважды центрифугировали при 3500 об/мин (ускорении 1500g) по 10 мин. Декантат удаляли. Полученный осадок гомогенизировали в 7 мл 0,5 н. раствора едкого натрия в течение 1-2 мин и помещали в кварцевую кювету для спектрофотометрии при светопропускании 280 нм и по фигрограмме определяем количество фибринмономеров. О концентрации фибринмономеров в плазме крови судили по величине светопреломления. Зарегистрировано светопропускание - 0,41.

Пример 2

Больной Лезин Е.Н., 46 лет был доставлен в отделение реаниамации ОКБ №2 г.Тюмени машиной СМП по экстренным показаниям. Клинически поставлен диагноз: «Ишемический инсульт» (высокой степени тяжести).

Из локтевой вены взяли кровь в пластиковую пробирку, содержащую 3,8% раствора натрия лимоннокислого 3-замещенного (цитрата натрия). Соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1 (4,5 мл крови и 0,5 мл цитрата натрия). Содержимое центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин (2000g). В результате получли бедную тромбоцитами плазму, затем к 0,4 мл плазмы крови добавили 0,15 мл 50% этанола и центрифугировали при 3500 об/мин - 15 мин. Полученный центрифугат (осадок) промывали 0,14 М раствором хлорида натрия, а затем центрифугировали дважды при 3.500 об/мин по 10 мин. Полученный осадок гомогенизировали в 7 мл 0,5 н. раствора едкого натрия в течение 1-2 мин и помещали в кварцевую кювету для спектрофотометрии при светопропускании 280 нм и по фигрограмме определяли количество фибринмономеров. Светопропускание равно 0,76, что свидетельствует о концентрации фибринмономеров в плазме крови.

Для количественного выражения содержания фибринмономеров в плазме крови использовали фигрограмму, которая в условных единицах активности отражает концентрапцию фибринмономеров, соответствущую 6,0 ЕА.

Пример 3

В неврологическое отделение ОКБ №2 г.Тюмени поступила больная Лагутина Л.А., 48 лет с диагнозом «Ишемический инсульт» (легкой степени тяжести).

Из локтевой вены взяли кровь в пластиковую пробирку, содержащую 3,8% раствора натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия). Соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1 (4,5 мл крови и 0,5 мл цитрата натрия). Содержимое центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин (2000g). В результате получили бедную тромбоцитами плазму. Затем к 0,4 мл плазмы крови добавили 0,15 мл 50% этанола и центрифугировали при 3500 об/мин - 15 мин. Полученный центрифугат (осадок) промывали 0,14 М раствором хлорида натрия и центрифугировали дважды при 3500 об/мин по 10 мин. Полученный осадок гомогенизировали в 7 мл 0,5 н. раствора едкого натрия в течение 1-2 мин. Полученный) взвесь помещали в кварцевую кювету для спектрофотометрии. Использовали длину волны 280 нм.

Для количественного выражения содержания фибринмономеров в плазме крови использовали фигрограмму, которая отражает светопропускание в условных единицах активности. По светопропусканию показатель составил 0,27, а по данным фигрограммы - 2,2 ЕА.

Пример 4

Больной Орлов Э.А., 34 лет был доставлен в отделение реаниамации ОКБ №2 г.Тюмени машиной СМП по экстренным показаниям. Клинический диагноз: «Ишемический инсульт высокой степени тяжести».

У больного взяли кровь из локтевой вены в шприц со стабилизирующим раствором (3,8% р-р цитрата натрия) в соотношении 1:9. Пробу в количестве 5 мл поместили в центрифужную пробирку и центрифугировали с ускорением 2000g в течение 10 мин, затем к 0,4 мл плазмы крови переносили в другую пробирку и добавляли 0,15 мл 50% этанола. Включали секундомер и по истечении 10 мин отмечаем появление зерен паракоагулянта, затем центрифугировали при 3500 об/мин - 15 мин. Полученный центрифугат (осадок) промывали 0,14 М раствором хлорида натрия и дважды центрифугировали при 3500 об/мин (ускорении 1500g) по 10 мин. Декантат удаляли. Полученный осадок гомогенизировали в 7 мл 0,5 н. раствора едкого натрия в течение 1-2 мин и помещали в кварцевую кювету для спектрофотометрии при светопропускании 280 нм и по фигрограмме определяли количество фибринмономеров. О концентрации фибринмономеров в плазме крови судили также по величине светопреломления. Зарегистрировано светопропускание - 0,79.

Приведенные примеры иллюстрируют возможность применения данного способа для количественного определения фибринмономеров в плазме крови на основании спектрофотометрического анализа и учета результатов по фигрограмме. Всего проведено 20 исследований с плазмой крови от больных, находящихся на лечении в областной клинической больнице №2 г.Тюмени (таблица 2). Положительный эффект применения предложенного способа по сравнению с прототипом представлен в таблице 2. Предложенный способ позволяет выявить патологический процесс в организме с достоверностью 95%.

Способ количественного определения фибринмономеров в крови

Таблица 1 Сравнительная характеристика определения фибринмономеров в крови по предложенному способу и прототипу Признаки Предлагаемый способ Способ-прототип 1. Использованиие реактивов для исследования 50% раствор этанола раствора фенантролина 2. Обработка плазмы для исследования Повторное центрифугирование Не проводится 3. Разрешающая способность способа Количественное определение фибринмономеров Качественное определение фибринмономеров 4. Объективность исследований Спектрофотометрическое определение фибринмономеров Визуальное определение результатов исследований 5. Определение тяжести патологического процесса с целью назначения специфического лечения Возможность использования метода для назначения специфического лечения Специфическое лечение не проводится

Способ количественного определения фибринмономеров в крови

Таблица 2 Колебания показания светопропускания у больных ишемическим инсультом Порядковый номер Показатели светопропускания ЕА на мл 1 0.31 3.1 2 0.442 4.2 3 0.452 4.3 4 0.43 4.2 5 0.69 6.1 6 0.411 4.1 7 0.268 2.5 8 0.761 6.5 9 0.315 3.1 10 0.361 3.4 11 0.572 5.3 12 0.703 6.4 13 0.568 5.2 14 0.575 5.3 15 0.521 5.1 16 0.345 3.2 17 0.395 3.9 18 0.461 4.5 19 0.462 4.5 20 0.794 7.0

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическому способу определения концентрации компонентов свертывания крови и продуктов их превращения в биологических жидкостях. Предложенный способ заключается в том, что количество фибринмономеров, растворенных в 0,5 N гидроксиде натрия, определяют спектрофотометрически с использованием этанолового теста. Предложенный способ количественного определения фибринмономеров в крови позволяет выявить патологический процесс в организме с достоверностью 95%. 2 табл.

Способ определения фибринмономеров в крови, включающий использование этанолового теста, отличающийся тем, что после обработки плазмы этанолом, центрифугирования и промывания осадка хлоридом натрия проводят повторное центрифугирование, полученный осадок гомогенизируют 0,5 N гидроксидом натрия в течение 1-2 мин, а результат учитывают на основании спектрофотометрического анализа при светопропускании 280 нм и количество фибринмономеров определяют по фиброграмме.