ПРЕБИОТИК, СТИМУЛИРУЮЩИЙ РОСТ ВАГИНАЛЬНОЙ ЛАКТОФЛОРЫ Российский патент 2012 года по МПК A61K36/81 A61K9/06 A61P15/02 

Изобретение относится к области биотехнологий, в частности к пребиотикам, предназначенным для стимуляции роста собственной молочнокислой флоры Додерлейн при дисбиозе влагалища и восстановления индивидуального биоценоза влагалища.

Известен пребиотик «Дюфалак» в виде сиропа, применяемый при запорах, печеночной энцефалопатии, дисбактериозе кишечника, содержащий лактулозу и очищенную воду (1).

Недостатком этого препарата является невозможность использования для восстановления вагинальной лактофлоры.

Известен пребиотик «Nutra-Flora(scFOS)» в виде натуральных волокон, получаемых из сахарной свеклы, применяемых при лечении дисбактериоза кишечника содержащий фрукто-олигосахариды (2).

Недостатком этого пребиотика является невозможность его использования для восстановления лактофлоры влагалища.

Известен пребиотик «Hi-Maiz», в виде порошка, применяемый при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, основанный на кукурузе крахмалорезистентный (3).

Недостатком этого пребиотика является невозможность его использования для восстановления лактофлоры влагалища.

Известен инулиновый пребиотик «Bener Synergy 1», в виде суспензии, применяемый при лечении рака толстой кишки, обогащенный олигосахаридами (4).

Недостатком этого пребиотика является невозможность его использования для восстановления лактофлоры влагалища.

Известна композиция и способ регуляции и поддержания бактериальной микрофлоры и кислотности влагалища с использованием бензойной кислоты и/или ее натриевой соли в комбинации с сахаридом в качестве активных компонентов, применяемых для стимулирования увеличения количества грамположительных бацилл и продуцирования кислот во влагалище (5).

Недостатком этого препарата является сложность композиций, многократность приема и значительные материальные затраты.

Известен биопрепарат «Вагинорм-С» в таблетированной форме, применяемый для восстановления биоценоза влагалища, содержащий аскорбиновую кислоту, лактозы моногидрат, гипромеллозу, магния стеарат, полиметилсилоксан (6, 7).

Недостатком этого препарата являются частые аллергические реакции, высокий процент рецидивов дисбиоза влагалища, ограничение использования препарата в сочетании с салицилатами и эстрогенами.

Данный препарат выбран за прототип.

Целью создания изобретения является повышение лечебной эффективности и снижение частоты рецидивов дисбиоза влагалища.

Эта цель достигается тем, что он представляет собой растительный полисахарид, полученный путем смешивания 190 г сухого картофельного крахмала и 5000 мл очищенной воды, подвергающийся температурному гидролизу при давлении 0,2-0,4 атм и температуре 110-120°С, а так же кислотному гидролизу, с использованием молочной кислоты, необходимой для получения pH среды от 3,8 до 4,0, и очищенной воды при следующем соотношении компонентов в 100 мл:

- растительный полисахарид 3,8 г,

- вода очищенная до 100 мл,

помещенный в герметичные пробирки и предназначенный для коррекции и лечения дисбиоза влагалища путем интравагинального введения.

Сравнение предлагаемого пребиотика с другим, используемым при лечении дисбиозов влагалища показало его соответствие критериям изобретения.

Показаниями к применению препарата являются компенсированный, субкомпенсированный и декомпенсированный бактериальный вагиноз.

Противопоказанием является индивидуальная непереносимость растительного полисахарида, что встречается в 0,0001% случаев.

Пребиотик прост в применении, используется самой пациенткой путем шприцевого интравагинального введения 2 мл селективной среды, однократно в сутки, на ночь, в течение 10 дней, в положении лежа на спине с согнутыми в коленных и тазобедренных суставах нижними конечностями.

Препарат относится к списку Б и не требует специального температурного режима и условий хранения.

Препарат помещается в герметичные конические пробирки «Фалькон» по 50 мл.

Предлагаемый препарат является пребиотиком растительного происхождения и способствует росту собственной лактофлоры, восстановлению индивидуального биоценоза влагалища в виду сходного строения гликогена, содержащегося в эпителиальных клетках влагалища и крахмала (8).

Рост только молочнокислой флоры в среде из растительных полисахаридов в искусственных условиях доказывает селективность предложенного пребиотика, и его применение стимулирует формирование индивидуального биоценоза влагалища у каждой пациентки.

В гинекологическом отделении СОКБ им. М.И.Калинина на протяжении двух лет проводилось исследование. В эксперименте приняло участие 37 женщин с диагностированным по критериям Амсела бактериальным вагинозом.

Было проведено микроскопическое исследование мазков, окрашенных по Граму. Выраженные изменения микробиоценоза влагалища, присущие БВ наблюдались у всех 37 пациенток. Бактериологическое исследование качественного и количественного состава микрофлоры влагалища выявило у пациенток во влагалищной жидкости анаэробов 73,7%, аэробов 23,4%, т.е. соотношение анаэробов/аэробам 3,1:1.

Лактобактерии были культивированы в 86,6% случаев в количестве lg 1,9±0,11 КОЕ/г, микроаэрофильные лактобактерии обнаружены в 17% случаев в концентрации lg 0,11±0,07.

Изучение видового и количественного состава микрофлоры влагалища у 37 женщин с БВ показало увеличение видового числа микроорганизмов с преобладанием строгих анаэробных бактерий и уменьшение количества молочнокислых бактерий.

Был установлен факт отсутствия лактобактерии у 13,4% пациенток, у 86,6% лактобактерии определялись, у 17% культивировались микроаэрофильные лактобактерии, продуцирующие в основном перекись водорода. На фоне снижения лактобактерий остальные компоненты флоры Додерлейн (Bifidobacterium spp. и Peptostreptococcus spp.) превышали показатели нормы как по встречаемости, так и по концетрации. Преобладающими микроорганизмами из флоры Додерлейн были пептострептококки, с частотой выделения 73,3%.

Доминирющими микроорганизмами у женщин с БВ были неспорообразующие анаэробы и гарднереллы. Наряду с этим во флоре Додерлейна имелся дисбаланс: уменьшение популяционной концентрации лактобацилл, увеличение концентрации и частоты выделения бифидобактерий, преобладание пептострептококков.

После заселения вагинальной жидкости пациенток в среду из растительного полисахарида, мы в течение 5 суток проводили исследование роста микроорганизмов. Микроскопия мазков из экспериментальной среды показала, что процесс размножения в среде из растительного полисахарида идет динамично и через 5 дней определяются однородные грамположительные палочки в количестве 60-100, другая флора не визуализируется. Среднее значение pH среды снижается до 3,8±0,11, при исходном pH 7,8.

Тестирование экспериментальной среды через 5 суток после культивирования в ней микроорганизмов из вагинального биотопа показало, что бактериологически определяется молочнокислая флора (Lactobacillus spp., Bifidobacteriuim spp. и Peptostreptococcus spp.) в достаточном количестве (10⁵-10⁶ КОЕ/г).

При идентификации микробных культур в экспериментальной среде из растительного полисахарида после культивирования было установлено, что Lactobacillus spp.выявляются в количестве 10⁴ и более КОЕ/г и в концентрации lg 6,5±0,21 КОЕ/г, Bifidobacterium spp. в количестве 10³ и более КОЕ/г и в концентрации lg 1,17±0,11 КОЕ/г, и Peptostreptococcus spp. в количестве 10² и более КОЕ/г и в концентрации lg 0,7±0,11 КОЕ/г. Другая микрофлора не высевалась.

Таким образом, нами было доказано, что растительный полисахарид после специальной обработки может быть использован в качестве селективного пребиотика для стимуляции роста молочнокислой флоры в естественных условиях.

Нами было проведено рандомизированное исследование у 103 пациенток с нарушением биоценоза влагалища с целью сравнительного изучения эффективности селективного пребиотика из растительного полисахарида, который восстанавливает индивидуальную лактофлору влагалища и препарата «Вагинорм-С», взятого за прототип. Мы оценивали результаты лечения и изучали возникновение реинфекций заболевания в течение 12 месяцев.

Пациентки методом слепой выборки были разделены на две группы:

I основная группа - 51 женщина, которым проводилось восстановление биоценоза влагалища селективным пребиотиком из растительного полисахарида;

II контрольная группа - 52 женщины, которым восстановление биоценоза было проведено препаратом «Вагинорм-С».

Эффективность терапии оценивали на основании клинических данных и результатов лабораторных исследований. Оказалось, что через 1 месяц после восстановления микробиоценоза влагалища был выявлен положительный клинический эффект как в первой, так и во второй группах. Жалобы, характерные для бактериального вагиноза исчезли у 84,3% пациенток I группы и у 78,8% - II группы.

При исследовании микроскопической картины мазка мы обнаружили нормоценоз у 82,4±3,2% женщин первой группы и у 78,8±2,8% пациенток второй группы, различия не явились статистически значимыми (р>0,05). При изучении других критериев БВ мы получили похожие результаты.

Таким образом, исследуя эффективность восстановления биоценоза влагалища через 1 месяц после лечения, мы пришли к выводу, что селективный пребиотик из растительного полисахарида так же эффективен как применяемый в настоящее время препарат «Вагинорм-С.

Также нами было замечено, что через 1 месяц после восстановления биоценоза во II группе, у 1,9±0,6% (р<0,05) отмечен рецидив заболевания, в то время как в I группе рецидивов заболевания не было.

Более значимые различия и более выраженный положительный клинический эффект при применении селективного пребиотика из растительного полисахарида по сравнению с препаратом «Вагинорм-С» мы получили через 6 и 12 месяцев исследования.

В I группе субъективные жалобы, характерные для БВ, появились у 9,8% через 6 месяцев и у 6,1% через 12 месяцев, в то время как во II группе - у 10,4% пациенток жалобы появились через 6 месяцев и у 20,9% через 12 месяцев. Появление субъективных признаков БВ мы связываем с изменениями микробиоценоза влагалища.

В I группе мы отметили прогрессивный рост доли пациенток с нормоценозом влагалища 84,0±4,9% (р<0,05) через 6 месяцев и 85,7±4,6% (р<0,05) через 12 месяцев. Это произошло за счет уменьшения количества пациенток с промежуточным типом мазка и дисбиозом влагалища. В течение всего исследования ни у одной женщины не развился кандидозный вагинит.

Пропорционально росту нормоценоза происходило значительное увеличение доли пациенток с весом ВЖ до 5 г - 84,0±4,9% (p<0,05) через 6 месяцев и 85,7±5,1% (p<0,05) через 12 месяцев, увеличилось количество женщин с pH 3,5-4,0 до 66,0±3,2% (p<0,05) через 6 и 69,4±3,9% (p<0,05) через 12 месяцев соответственно. Ни у одной женщины в течение всего исследования не был выявлен положительный аминный тест, доля пациенток с отрицательным аминным тестом увеличилась с 60,8±4,6% в начале исследования до 63,3±3,0% (p<0,05).

Мы связываем такие улучшения всех показателей в течение одного года с тем, что селективный пребиотик из растительного полисахарида восстанавливает индивидуальную лактофлору влагалища, которая способна прогрессивно размножаться, конкурировать с условно-патогенными микроорганизмами и тем самым вызывать стойкий нормоценоз влагалища.

Это подтверждает незначительное количество рецидивов заболевания - 8,2±1,1%* через год после лечения пребиотиком.

Кроме того сравнение эффективности применяемого пребиотика и лечение препаратом «Вагинорм-С», показало явное преимущество первого.

Экономические затраты при использовании «Вагинорм-С» составили 1322 рубля за курс, в то же время курсовая стоимость пребиотика составила 300 рублей.

Клинические примеры.

Пример 1. Больная К. Диагноз: компенсированный бактериальный вагиноз. Жалобы на дискомфорт, незначительные желтоватые выделения. При микроскопии мазка влагалищного содержимого обнаружено полное отсутствие микрофлоры в материале и неизмененные эпителиоциты. Получала пребиотик - растительный полисахарид, полученный путем смешивания 190 г сухого картофельного крахмала и 5000 мл очищенной воды, подвергающийся температурному гидролизу при давлении 0,2-0,4 атм и температуре 110-120°С, а так же кислотному гидролизу, с использованием молочной кислоты, необходимой для получения pH среды от 3,8 до 4,0, и очищенной воды при следующем соотношении компонентов в 100 мл: растительный полисахарид 3,8 г, вода очищенная до 100 мл, помещенный в герметичные пробирки и предназначенный для коррекции и лечения дисбиоза влагалища путем интравагинального введения в течение 10 дней. Отмечала исчезновение зуда, дискомфорта; выделения - бели. При контрольном микроскопическом исследовании определялась палочковая флора.

Пример 2. Больная А. Диагноз: субкомпенсированный бактериальный вагиноз. Жалобы на зуд, дискомфорт, умеренные желтоватые выделения со специфическим запахом. При микроскопии мазка влагалищного содержимого обнаружено количественное снижение лактобацилл, грамвариабельная бактериальная микрофлора, 1-5 «ключевых» клеток в поле зрения, умеренный лейкоцитоз 15-25 в поле зрения.

Получала пребиотик - растительный полисахарид, полученный путем смешивания 190 г сухого картофельного крахмала и 5000 мл очищенной воды, подвергающийся температурному гидролизу при давлении 0,2-0,4 атм и температуре 110-120°С, а так же кислотному гидролизу, с использованием молочной кислоты, необходимой для получения pH среды от 3,8 до 4,0, и очищенной воды при следующем соотношении компонентов в 100 мл: растительный полисахарид 3,8 г, вода очищенная до 100 мл, помещенный в герметичные пробирки и предназначенный для коррекции и лечения дисбиоза влагалища путем интравагинального введения в течение 10 дней, два курса. Отмечала исчезновение зуда, дискомфорта, отсутствие патологических выделений. При контрольном микроскопическом исследовании определялся нормоценоз после второго курса.

Пример 3. Больная С. Диагноз: декомпенсированный бактериальный вагиноз. Жалобы на зуд, дискомфорт, обильные желтовато-серые выделения с сильным специфическим запахом. При микроскопии мазка влагалищного содержимого обнаружено полное отсутствие лактобацилл, все поле зрения заполнено «ключевыми» клетками, обильная кокковая флора. Получала пребиотик - растительный полисахарид, полученный путем смешивания 190 г сухого картофельного крахмала и 5000 мл очищенной воды, подвергающийся температурному гидролизу при давлении 0,2-0,4 атм и температуре 110-120°С, а так же кислотному гидролизу, с использованием молочной кислоты, необходимой для получения pH среды от 3,8 до 4,0, и очищенной воды при следующем соотношении компонентов в 100 мл: растительный полисахарид 3,8 г, вода очищенная до 100 мл, помещенный в герметичные пробирки и предназначенный для коррекции и лечения дисбиоза влагалища путем интравагинального введения в течение 10 дней, три курса. Отмечала исчезновение зуда, дискомфорта, отсутствие патологических выделений. При контрольном микроскопическом исследовании определялся нормоценоз.

Предложенный пребиотик возможно и целесообразно использовать в женских консультациях, акушерских и гинекологических отделениях.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ.

1. Дюфалак. Регистрационный номер в РФ-П № 011717/02.

2. Сайт: www.gtcnutrition.com.

3. Сайт: www.hi-maiz.com.

4. Сайт: www.orafti.com.

5. Заявка РФ № 2007143977 А.

6. Вагинорм-С. Регистрационное удостоверение POLICHEM, S.A., регистрационный номер в РФ-ЛРС-005889/08, 23.07.08.

7. Сайт: http:/www.vidal.ru.

8. "Успехи биологической химии", Степаненко Б.Н., Боброва Л.Н., 1976, т.15, с.195-207.

Изобретение относится к созданию пребиотика, предназначенного для стимуляции роста собственной молочнокислой флоры Додерлейн при дисбиозе влагалища и восстановления индивидуального биоценоза влагалища. Однородный гель состоит из растительного полисахарида (3,8 г) и очищенной воды (остальное до 100 мл). Гель обладает повышенной лечебной эффективностью и снижает частоту рецидивов дисбиоза влагалища. 3 пр.

Пребиотик, стимулирующий рост вагинальной лактофлоры, содержащий углеводы, отличающийся тем, что в качестве углевода в состав пребиотика входит растительный полисахарид, полученный путем смешивания 190 г сухого картофельного крахмала и 5000 мл очищенной воды, подвергающийся температурному гидролизу при давлении 0,2-0,4 атм. и температуре 110-120°С, а также кислотному гидролизу в присутствии молочной кислоты для получения pH среды от 3,8 до 4,0, где 100 мл пребиотика содержит:
растительный полисахарид 3,8 г вода очищенная до 100 мл