СОЕДИНЕНИЕ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ПУТИ ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА ЧЕРЕЗ IL-15RБЕТА/ГАММА, С ЦЕЛЬЮ ИНДУЦИРОВАТЬ И/ИЛИ СТИМУЛИРОВАТЬ АКТИВАЦИЮ И/ИЛИ ПРОЛИФЕРАЦИЮ IL-15RБЕТА/ГАММА-ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК, ТАКИХ КАК NK-И/ИЛИ T-КЛЕТКИ, НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ СОЕДИНЕНИЕ, ВЕКТОР ЭКСПРЕССИИ, КЛЕТКА-ХОЗЯИН, АДЪЮВАНТ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ИЛИ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ПРИ КОТОРОМ ЖЕЛАТЕЛЬНО ПОВЫШЕНИЕ АКТИВНОСТИ IL-15, СПОСОБ IN VITRO ИНДУКЦИИ И/ИЛИ СТИМУЛЯЦИИ ПРОЛИФЕРАЦИИ И/ИЛИ АКТИВАЦИИ IL-15RБЕТА/ГАММА-ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ IN VITRO АКТИВИРОВАННЫХ NK-И/ИЛИ T-КЛЕТОК Российский патент 2012 года по МПК C12N15/62 C07K14/715 C07K14/54 C12N15/63 C12N5/00 A61K38/19 A61P35/00 A61P37/00 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стимуляторов пути передачи сигнала через IL-15Rбета/гамма, и может быть использовано в медицине. Соединение содержит IL-15, опосредованно связанный ковалентными связями с полипептидом, содержащим домен sushi внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R. Изобретение позволяет индуцировать и стимулировать активацию и пролиферацию I L-15Rбета/гамма-положительных клеток, таких как NK-и/или Т-клетки, и эффективно лечить состояния и заболевания, при которых желательно повышение активности IL-15. 9 н. и 35 з.п. ф-лы, 42 ил., 4 табл., 1 пр.

1. Соединение, предназначенное для стимуляции пути передачи сигнала через 1L-15Rбета/гамма, с целью индуцировать и/или стимулировать активацию и/или пролиферацию 1L-15Rбета/гамма-положительных клеток, таких как NK- и/или Т-клетки, характеризующееся тем, что оно содержит элемент, связывающий 1L-15Rбета/гамма, опосредованно связанный ковалентными связями с полипептидом, содержащим домен sushi внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, причем:
- указанный элемент, связывающий 1L-15Rбета/гамма, представляет собой IL-15, и
- последовательность аминокислот указанного полипептида, содержащего домен sushi,
- представляет собой последовательность аминокислот внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, или
- представляет собой последовательность аминокислот фрагмента внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, где в указанном фрагменте сохранился домен sushi указанной внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, при этом указанный домен sushi определен как начинающийся с первого кодируемого экзоном 2 остатка цистеина (С1) и оканчивающийся на четвертом кодируемом экзоном 2 остатке цистеина (С4), и остатки С1 и С4 также включены в указанный домен sushi, или
- представляет собой вариантную последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности аминокислот такой внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, или такого фрагмента внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, по всей длине этой последовательности аминокислот внеклеточной области или фрагмента внеклеточной области, при условии, что каждый из четырех остатков цистеина (С1, С2, С3 и С4) указанного домена sushi сохранился в указанной вариантной последовательности.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанная субъединица альфа IL-15R представляет собой субъединицу альфа IL-15R человека, или субъединицу альфа IL-15R обезьяны, или субъединицу альфа IL-15R мыши, или субъединицу альфа IL-15R кролика, или субъединицу альфа IL-15R свиньи.

3. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что указанная последовательность аминокислот указанной внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R представляет собой последовательность внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R человека SEQ ID NO:40, последовательность внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R шимпанзе SEQ ID NO:80, последовательность внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R домовой мыши SEQ ID NO:74 или последовательность внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R серой крысы SEQ ID NO:86.

4. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что указанная последовательность аминокислот указанного домена sushi представляет собой последовательность домена sushi субъединицы альфа IL-15R человека SEQ ID NO:14, домена sushi субъединицы альфа IL-15R Pan troglodytes SEQ ID NO:81, домена sushi субъединицы альфа IL-15R Mus musculus SEQ ID NO:75 или домена sushi субъединицы альфа IL-15R серой крысы SEQ ID NO:87.

5. Соединение по п.1 или 2, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R включает:
- часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемый экзонами 2 и 3 указанной субъединицы альфа IL-15R, или
- фрагмент такой части, кодируемый экзонами 2 и 3, в котором сохранился указанный домен sushi.

6. Соединение по п.5, отличающееся тем, что указанная кодируемая экзоном 2 последовательность представляет собой:
- кодируемую экзоном 2 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R человека, которая имеет последовательность SEQ ID NO:24, кодируемую экзоном 2 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R шимпанзе, которая имеет последовательность SEQ ID NO:98,
- кодируемую экзоном 2 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R домовой мыши, которая имеет последовательность SEQ ID NO:97, кодируемую экзоном 2 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R серой крысы, которая имеет последовательность SEQ ID NO:99.

7. Соединение по п.5, отличающееся тем, что указанная кодируемая экзоном 3 последовательность представляет собой:
- кодируемую экзоном 3 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R человека, которая имеет последовательность SEQ ID NO:93,
- кодируемую экзоном 3 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R шимпанзе, которая имеет последовательность SEQ ID NO:95,
- кодируемую экзоном 3 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R домовой мыши, которая имеет последовательность SEQ ID NO:94,
- кодируемую экзоном 3 часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R серой крысы, которая имеет последовательность SEQ ID NO:96.

8. Соединение по любому из пп.1, 2, 6, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R состоит из:
- части внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемой экзоном 2 указанной субъединицы альфа IL-15R, или из
- фрагмента такой кодируемой экзоном 2 части, в котором сохранился указанный домен sushi.

9. Соединение по любому из пп.1, 2, 6, 7, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R включает часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемой экзоном 2 указанной субъединицы альфа IL-15R, и дополнительно включает по меньшей мере одну аминокислоту из последовательности, кодируемой экзоном 3 указанной субъединицы альфа IL-15R.

10. Соединение по п.9, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R состоит из:
- части внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемой экзонами 2 и 3 указанной субъединицы альфа IL-15R, или
- части внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемой экзоном 2 указанной субъединицы альфа IL-15R, и фрагмента части внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемой экзоном 3 указанной субъединицы альфа IL-15R.

11. Соединение по любому из пп.1, 2, 6, 7, 10, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R представляет собой фрагмент субъединицы альфа IL-15R, который дополнительно включает:
- шарнирную область указанной субъединицы альфа IL-15R, или
- фрагмент такой шарнирной области,
где последовательность аминокислот указанной шарнирной области субъединицы альфа IL-15R представляет собой:
- шарнирную последовательность субъединицы альфа IL-15R человека SEQ ID NO:20,
- шарнирную последовательность субъединицы альфа IL-15R шимпанзе SEQ ID NO:82,
- шарнирную последовательность субъединицы альфа IL-15R домовой мыши SEQ ID NO:76, или
- шарнирную последовательность субъединицы альфа IL-15R серой крысы SEQ ID NO:88.

12. Соединение по п.11, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, представляет собой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID NO:30.

13. Соединение по п.11, отличающееся тем, что последовательность аминокислот указанного фрагмента шарнирной области субъединицы альфа IL-15R человека включает i, или ir, или ird.

14. Соединение по п.13, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, представляет собой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID NO:22, 24, 26, 28.

15. Соединение по любому из пп.1, 2, 6, 7, 10, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R человека дополнительно включает:
- кодируемую экзоном 3 часть области субъединицы альфа IL-15R человека, богатой сайтами гликозилирования, где указанная кодируемая экзоном 3 часть представляет собой последовательность SEQ ID NO:34, или
- фрагмент последовательности SEQ ID NO:34.

16. Соединение по п.15, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, представляет собой полипептид, имеющий последовательность SEQ ID NO:36.

17. Соединение по любому из пп.6, 7, 10, 13, 14, отличающееся тем, что указанный фрагмент внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R дополнительно включает:
- часть внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R, кодируемую одним или несколькими экзонами, кодирующими внеклеточную область субъединицы альфа IL-15R, отличными от экзонов 1, 2, 3, или
- фрагмент такой части.

18. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, отличающееся тем, что оно включает сигнальный пептид, опосредованно связанный с указанным полипептидом, содержащим домен sushi, или с указанным элементом, связывающим 1L-15Rбета/гамма.

19. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, отличающееся тем, что указанный IL-15 представляет собой IL-15 человека.

20. Соединение по п.19, отличающееся тем, что указанная последовательность аминокислот указанного IL-15 человека представляет собой последовательность SEQ ID NO:48.

21. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, 20, отличающееся тем, что указанный элемент, связывающий 1L-15Rбета/гамма, не связывает субъединицу альфа IL-2R.

22. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, 20, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, опосредованно связан с указанным элементом, связывающим 1L-15Rбета/гамма.

23. Соединение по п.22, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, связан с указанным элементом, связывающим IL-15Rбета/гамма, через пептидный линкер, который включает по меньшей мере одну, но менее 30 аминокислот.

24. Соединение по п.23, отличающееся тем, что последовательность аминокислот указанного пептидного линкера представляет собой последовательность SEQ ID NO:50 или SEQ ID NO:52.

25. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, 20, 23-24, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, находится в N-концевом положении относительно указанного элемента, связывающего 1L-15Rбета/гамма.

26. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12-14, 16, 20, 23-24, отличающееся тем, что указанный полипептид, содержащий домен sushi, находится в С-концевом положении относительно указанного элемента, связывающего 1L-15Rбета/гамма.

27. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12, 16, 20, 23-24, отличающееся тем, что его последовательность аминокислот представляет собой последовательность SEQ ID NO:60.

28. Соединение по любому из пп.1-2, 6-7, 10, 12, 16, 20, 23-24, отличающееся тем, что его последовательность аминокислот представляет собой последовательность SEQ ID NO:62.

29. Нуклеиновая кислота, кодирующая соединение, которое предназначено для стимуляции пути передачи сигнала через ЕL-15Rбета/гамма, с целью индуцировать и/или стимулировать активацию и/или пролиферацию IL-15Rбета/гамма-положительных клеток, таких как NK- и/или Т-клетки, характеризующаяся тем, что она кодирует соединение по любому из пп.1-28 в соответствии с универсальным генетическим кодом, учитывая его вырожденность.

30. Вектор экспрессии, характеризующийся тем, что он включает нуклеиновую кислоту по п.29.

31. Клетка-хозяин для продуцирования соединения по любому из пп.1-28, трансформированная или трансфецированная нуклеиновой кислотой по п.29 и/или вектором по п.30.

32. Клетка-хозяин по п.31, отличающаяся тем, что она представляет собой клетку млекопитающего.

33. Адъювант для иммунотерапевтической композиции для лечения состояния или заболевания, при котором желательно повышение активности IL-15, характеризующийся тем, что он содержит по меньшей мере один элемент из следующих элементов:
- соединение по любому из пп.1-28,
- нуклеиновую кислоту по п.29,
- вектор по п.30,
- клетку-хозяина по любому из пп.31-32.

34. Адъювант по п.33, отличающийся тем, что он предназначен для улучшения ответа клеток памяти CD8, и при этом указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

35. Фармацевтическая композиция для лечения состояния или заболевания, при котором желательно повышение активности IL-15, характеризующаяся тем, что она содержит по меньшей мере один элемент из следующих элементов:
- соединение по любому из пп.1-28,
- нуклеиновую кислоту по п.29,
- вектор по п.30,
- клетку-хозяина по любому из пп.31-32.

36. Лекарственное средство для лечения состояния или заболевания, при котором желательно повышение активности IL-15, характеризующееся тем, что оно включает по меньшей мере один элемент из следующих элементов:
- соединение по любому из пп.1-28,
- нуклеиновую кислоту по п.29,
- вектор по п.30,
- клетку-хозяина по любому из пп.31-32.

37. Лекарственное средство по п.36, отличающееся тем, что оно представляет собой композицию вакцины, и при этом указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

38. Лекарственное средство по п.36 или 37, отличающееся тем, что оно предназначено для лечения опухоли, причем указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

39. Лекарственное средство по п.38, отличающееся тем, что оно дополнительно включает по меньшей мере один антиген опухоли.

40. Лекарственное средство по п.36 или 37, отличающееся тем, что оно предназначено для лечения инфекционного заболевания, причем указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

41. Лекарственное средство по п.36 или 37, отличающееся тем, что оно предназначено для лечения иммунодефицита, причем указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

42. Лекарственное средство по п.36 или 37, отличающееся тем, что оно предназначено для лечения Х-сцепленного тяжелого комбинированного иммунодефицита (SCID-X), причем указанное лечение заключается в терапии, облегчении или профилактике.

43. Способ in vitro индукции, и/или стимуляции пролиферации, и/или активации 1L-15Rбета/гамма-положительных клеток, характеризующийся тем, что он включает:
приведение образца клеток, который включает 1L-15Rбета/гамма-положительные клетки, в контакт с по меньшей мере одним из следующих элементов:
- соединением по любому из пп.1-28,
- нуклеиновой кислотой по п.29, вектором экспрессии по п.30,
- клеткой-хозяином по любому из пп.31-32, в течение промежутка времени и при внешних условиях, в которых указанный контакт вызывает индукцию и/или стимуляцию пролиферации и/или активации указанных IL-15Rбета/гамма-положительных клеток.

44. Способ получения in vitro активированных NK- и/или Т-клеток, характеризующийся тем, что он включает:
- приведение образца клеток, который включает покоящиеся NK- и/или Т-клетки, в контакт с по меньшей мере одним из следующих элементов:
- соединением по любому из пп.1-28, нуклеиновой кислотой по п.29,
- вектором экспрессии по п.30,
- клеткой-хозяином по любому из пп.31-32, в течение промежутка времени и при внешних условиях, в которых указанный контакт приводит к индукции активации указанных покоящихся NK- и/или Т-клеток, содержащихся в указанном образце.