ТЕТРАЦИКЛИЧЕСКИЕ АНТИБИОТИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АНТРАХИНОНА С ВЫСОКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2012 года по МПК C07H15/252 C07H19/02 C07H19/48 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к тетрациклическим антибиотическим производным антрахинона с противораковой активностью, способу их получения и применению при получении лекарственного средства для лечения опухоли или рака.

Уровень техники

Тетрациклические антрахиноновые антибиотики, в особенности доксорубицин и даунорубицин, являются широко применяемыми противораковыми лекарственными средствами. Доксорубицин обладает значительными лечебными действиями для многих солидных опухолей, включающих рак печени, рак желудка, рак молочной железы, рак легких, рак яичников и множественные лейкозы. Даунорубицин является одним из наиболее эффективных лекарственных средств для лечения лейкоза. Однако, вследствие их побочных действий, таких как тяжелая миелосупрессия, кардиотоксичность, побочные реакции пищеварительного тракта и тому подобное, их клинические применения ограничиваются. До сих пор уже много тетрациклических производных антрахинона было выделено из природных источников или получено искусственно. Предполагается получить новое поколение противораковых лекарственных средств с высокой активностью и низкой токсичностью из этих производных. Активность на клеточном уровне производного доксорубицина, 2-пирролинилдоксорубицина (AN-201), полученного Attilla A. Nagy, et al., в 300-1000 раз больше активности доксорубицина. Однако, вследствие высокой токсичности AN-201, противораковую активность не изучали при максимально толерантной дозе на патологической моделе трансплантированной опухоли у мыши.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к антибиотическим тетрациклическим производным антрахинона с противораковой активностью. Антибиотические тетрациклические производные антрахинона, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают такой же или более высокой активностью, чем активность известных лекарственных средств, таких как диоксорубицин, даунорубицин и тому подобное на клеточном уровне, в то время как являются более переносимыми, чем доксорубицин и даунорубицина для организма животного.

Соответственно этому, настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой (I), и его соли или сольвату

где

R¹ представляет собой H, C_1-4гидрокарбил или OC_1-4гидрокарбил;

R² представляет собой H или OR⁶, где R⁶ выбран из группы, состоящей из H, C(O)R⁸, пептидной цепи, C(O)NH₂, C(O)NR⁸R⁹, C(O)Ar-R²⁷, C(O)(C_2-4гидрокарбилиден)COOH и остатка, представленного формулой (II); R⁸ и R⁹, каждый независимо, представляет собой H или C_1-6гидрокарбил, или NR⁸R⁹ представляет собой пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил или морфолин-1-ил; Ar представляет собой ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо; R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN, OH, SH, COOH, NH₂, NR⁸R⁹, C_1-6гидрокарбила, OC_1-6гидрокарбила, OC(O)C_1-6гидрокарбила, C(O)OC_1-6гидрокарбила, SC_1-6гидрокарбила, S(O)C_1-6гидрокарбила и S(O)₂C_1-6гидрокарбила; пептидная цепь представляет собой одну природную аминокислоту, одну неприродную аминокислоту или пептидную цепь, состоящую из 2-4 природных аминокислот и/или неприродных аминокислот;

W представляет собой O или NH;

R³ представляет собой H, F, OC_1-4гидрокарбил или C_1-4гидрокарбил;

R⁴ представляет собой H, F, C_1-4гидрокарбил или OR⁷, где R⁷ представляет собой H, 2-пиранил или R⁶;

R⁵ представляет собой остаток, представленный формулой (III), остаток, представленный формулой (IV), остаток, представленный формулой (V), или малеимидо;

где

n равно 1 или 2;

X и Y, каждый независимо, представляет собой C=O или CR²¹R²²;

Q представляет собой CH или N;

R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁵ и R¹⁶, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из H, F, Cl, CN, NO₂, NH₂, OH, C(O)OC_1-4гидрокарбила, OC(O)C_1-4гидрокарбила, OC_1-4гидрокарбила, C_1-4гидрокарбила, SC_1-6гидрокарбила, S(O)C_1-6гидрокарбила, S(O)₂C_1-6гидрокарбила, (C_0-4гидрокарбилиден)Ar-R²⁷ и NR⁸R⁹; и

R²¹ и R²², каждый независимо, представляют собой H или C_1-4гидрокарбил.

Применяемый в контексте C_1-4гидрокарбил может быть неразветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилом или разветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилом и может быть замещен 0-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из F, Cl, CN, OH, NO₂, COOH, C_1-4гидрокарбила, NHC(O)C_1-6гидрокарбила, NHC(O)Ar-R²⁷ и NR⁸R⁹. R⁸ и R⁹, каждый независимо, представляют собой H или C_1-6гидрокарбил или NR⁸R⁹ выбран из группы, состоящей из пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила и морфолин-1-ила.

Применяемый в контексте C_2-4гидрокарбилиден может быть неразветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилиденом или разветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилиденом и может быть замещен 0-3 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из F, Cl, CN, OH, NO₂, COOH, C_1-4гидрокарбила, NHC(O)C_1-6гидрокарбила, NHC(O)Ar-R²⁷ и NR⁸R⁹. R⁸ и R⁹, каждый независимо, представляют собой H или C_1-6гидрокарбил или NR⁸R⁹ выбран из группы, состоящей из пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила и морфолин-1-ила.

Применяемый в контексте термин C_0-4гидрокарбилиден может быть неразветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилиденом или разветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилиденом и может быть замещен 0-3 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из F, Cl, CN, OH, NO₂, COOH, C_1-4гидрокарбила, NHC(O)C_1-6гидрокарбила, NHC(O)Ar-R²⁷ и NR⁸R⁹. R⁸ и R⁹, каждый независимо, представляют собой H или C_1-6гидрокарбил или NR⁸R⁹ выбран из группы, состоящей из пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила и морфолин-1-ила.

Применяемый в контексте, C_1-6гидрокарбил может быть неразветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилом или разветвленным насыщенным или ненасыщенным гидрокарбилом и может быть замещен 0-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из F, Cl, CN, OH, NO₂, COOH, C_1-4гидрокарбила, NHC(O)C_1-6гидрокарбила, NHC(O)Ar-R²⁷ и NR⁸R⁹. R⁸ и R⁹, каждый независимо, представляют собой H или C_1-6гидрокарбил или NR⁸R⁹ выбран из группы, состоящей из пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила и морфолин-1-ила.

Применяемое в контексте ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо выбрано из группы, состоящей из бензола, нафталина, пиридина, пиррола, тиофена, фурана, пиримидина и пиразина.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R¹ выбран из группы, состоящей из H, CH₃ и OCH₃. Соединением формулы (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединение, где R¹ представляет собой H или ОСН₃.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R² представляет собой H или OR⁶, где R⁶ выбран из группы, состоящей из H, глицила, аланила, валила, лейцинила, изолейцинила, фенилаланила, серинила, треонила, тирозинила, лизинила, 2-N,N-диметиламиноацетила, 2-N,N-диэтиламиноацетила, 2-пиперидилацетила, 2-морфолинилацетила, 2,2-диметилглицила, 2,2-диметил-2-метиламиноацетила, 2,2-диметил-2-(N,N-диметиламино)ацетила, 2,2-диметил-2-этиламиноацетила, 2,2-диметил-2-(N,N-диэтиламино)ацетила, 2,2-диметил-2-(N,N-дипропиламино)ацетила, 2,2-диметил-2-пиперидилацетила, 2,2-диметил-2-пирролинилацетила, 2,2-диметил-2-морфолинилацетила, 2,2-диметил-2-(N-метил-N-этиламино)ацетила, 2-фенилглицила, 2-фенил-2-метиламиноацетила, 2-фенил-2-(N,N-диметиламино)ацетила, 2-фенил-2-этиламиноацетила, 2-фенил-2-(N,N-диэтиламино)ацетила, 2-фенил-2-(N,N-дипропиламино)ацетила, 2-фенил-2-пиперидилацетила, 2-фенил-2-пирролинилацетила, 2-фенил-2-морфолинилацетила, 2-фенил-2-(N-метил-N-этиламино)ацетила, ацетила, пропионила, бутаноила, пентаноила, 3-метиламинопропионила, 3-этиламинопропионила, 3-N,N-диметиламинопропионила, 3-N,N-диэтиламинопропионила, 3-пиперидилпропионила, 3-пирролидинилпропионила, 3-морфолинилпропионила, N-глицилглицила, N-аланилглицила, N-валилглицила, N-серинилглицила, N-глицилаланила, N-аланилаланила, N-валилаланила, N-серинилаланила, N-глицилвалила, N-аланилвалила, N-валилвалила, N-серинилвалила, гидросукцинатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы и (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы. Соединение, представленное формулой (I), которое является более подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R² представляет собой H или OR⁶, где R⁶ выбран из группы, состоящей из H, глицила, аланила, валила, лейцинила, изолейцинила, фенилаланила, серинила, треонила, тирозинила, лизинила, 2-N,N-диметиламиноацетила, 2-N,N-диэтиламиноацетила, 2-пиперидилацетила, 2-морфолинилацетила, 2,2-диметилглицила, 2-фенилглицила, 3-метиламинопропионила, 3-этиламинопропионила, гидросукцинатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы и (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы. Соединение, представленное формулой (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R² представляет собой H или OR⁶, где R⁶ выбран из группы, состоящей из H, глицила, аланила, валила, лейцинила, изолейцинила, фенилаланила, серинила, треонила, тирозинила, лизинила, 2-N,N-диметиламиноацетила, 2-N,N-диэтиламиноацетила, 2-пиперидилацетила, 2-морфолинилацетила, 2,2-диметилглицила, 2-фенилглицила, гидросукцинатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы и (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где W представляет собой O или NH. Соединение, представленное формулой (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где W представляет собой O.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R³ выбран из группы, состоящей из H, F, CH₃, CH₂CH₃, OCH₃ и OCH₂CH₃. Соединение, представленное формулой (I), которое является более подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R³ выбран из группы, состоящей из H, CH_3, CH₂CH₃ и OCH₃. Соединение, представленное формулой (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R³ представляет собой CH₃.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R⁴ выбран из группы, состоящей из H, F, OH, CH₃, OCH₃, 2-пиранила, гидросукцинатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы и (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы. Соединение, представленное формулой (I), которое является более подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R⁴ выбран из группы, состоящей из OH, OCH₃, 2-пиранила и гидросукцинатной группы. Соединение, представленное формулой (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R⁴ выбран из группы, состоящей из OH, 2-пиранила и гидросукцинатной группы.

Соединение, представленное формулой (I), которое является подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R⁵ выбран из группы, состоящей из пиррол-1-ила, сукцинимидо, глутаримидо, бутиролактам-1-ила, валеролактам-1-ила, 3-метилпиррол-1-ила, 3-метоксипиррол-1-ила, 3-метилсукцинимидо, 3-метоксисукцинимидо, 3-метилглутаримидо, 3-метоксиглутаримидо, 3-метилбутиролактам-1-ила, 3-метоксибутиролактам-1-ила, 3-метилвалеролактам-1-ила, 3-метоксивалеролактам-1-ила, 4-метилвалеролактам-1-ила, 4-метоксивалеролактам-1-ила, бензосукцинимидо-1-ила и пиридосукцинимидо-1-ила. Соединение, представленное формулой (I), которое является наиболее подходящим для получения лекарственного средства для лечения опухоли или рака, является соединением, где R⁵ выбран из группы, состоящей из пиррол-1-ила, сукцинимидо, глутаримидо, бутиролактам-1-ила и валеролактам-1-ила.

В настоящем изобретении соединение, которое имеет хиральный центр и конкретно не идентифицировано как имеющее R- или S-конфигурацию в структурной формуле в описании и формуле изобретения, может быть соединением с R-конфигурацией, соединением с S-конфигурацией или их смесью.

Объем защиты настоящего изобретения должен включать также пролекарство, соль или активный метаболит соединения, описанного в настоящем изобретении.

В настоящем изобретении описано несколько способов получения соединения, представленного формулой (VI), которое является важным промежуточным соединением для получения соединения, представленного формулой (I).

Способ 1

Группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (VII), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (I). R²⁰ представляет собой H или OH. Группы, представленные R¹, R³, R⁴, R⁵ и W в соединении, представленном формулой (VI), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴, R⁵ и W в соединении, представленном формулой (I). R²⁰ представляет собой Н или ОН. Группа, представленная R¹⁶ в соединении, представленном формулой (VIII), является такой же, как группа, представленная R¹⁶ в формуле (V). R²¹ и R²², каждый независимо, представляют собой Н или С_1-4гидрокарбил.

Описываемой в контексте солью соединения, представленного формулой (VII), является соль соединения, представленного формулой (VII), полученная реакцией с кислотой, которая выбрана из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, муравьиной кислоты, уксусной кислоты, метансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты и их смеси.

Соединение, представленное формулой (VI), получают реакцией соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (VIII), в присутствии кислотного и/или основного реагента, где кислотный реагент выбран из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, муравьиной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, масляной кислоты, пентановой кислоты, гексановой кислоты, метилсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, лимонной кислоты, винной кислоты, молочной кислоты, яблочной кислоты и их смеси. Количеством кислотного реагента является 0,05-500-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим количеством кислотного реагента является 0,2-50-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Наиболее подходящим количеством кислотного реагента является 0,7-5-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Основный реагент выбран из группы, состоящей из карбоната калия, карбоната цезия, карбоната натрия, бикарбоната натрия, бикарбоната калия, гидроксида натрия, гидроксида калия, ацетата натрия, ацетата калия, фосфата натрия, фосфата калия, гидрофосфата натрия, гидрофосфата калия, лактата натрия, лактата калия, цитрата натрия, цитрата калия, тартрата натрия, тартрата калия, малата натрия, малата калия, пропионата натрия, пропионата калия, бутирата натрия, бутирата калия, сукцината натрия, сукцината калия, валерата натрия, валерата калия, глутарата натрия, глутарата, калия, триэтиламина, триметиламина, диизопропилэтиламина, 4-диметиламинопиридина, 4-(пирролидин-1-ил)пиридина, пиридина, N-метилморфолина и их смеси. Количеством основного реагента является 0,05-500-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим количеством основного реагента является 0,2-50-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Наиболее подходящим количеством основного реагента является 0,7-5-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Температура реакции от -20 до 150°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от -10 до 80°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид, диметиловый эфир этиленгликоля, монометиловый эфир этиленгликоля, этанол, метанол, изопропанол, тетрагидрофуран, этилацетат, метилацетат, метилпропионат, этилпропионат, диэтиловый эфир этиленгликоля, моноэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диэтилформамид, 1,2-дихлорэтан, ацетонитрил, вода, соединение, представленное формулой (VIII), или их смесь. Если необходимо, в качестве катализатора в реакции можно применять триэтиламин, триметиламин, диизопропилэтиламин, 4-диметиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин, пиридин, N-метилморфолин и тому подобное. Когда органическое основание применяют в качестве катализатора, молярным количеством органического основания является 0,01-2-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим молярным количеством органического основания является 0,05-0,2-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (VIII), составляет от 1:0,1 до 1:10000. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (VIII), составляет от 1:0,5 до 1:1000. Наиболее подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (VIII), составляет от 1:1 до 1:500.

В настоящем изобретении описан второй способ получения соединения, представленного формулой (VI).

где группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³ и n в соединении, представленном формулой (IX), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³ и n в формуле (III); группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³ и n в соединении, представленном формулой (X), являются такими же как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³ и n в формуле (III); группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (X), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (VII); R²⁰ представляет собой H или OH.

Соединение, представленное формулой (X), получают реакцией соединения, представленного формулой (VII) или его соли с соединением, представленным формулой (IX). Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, тетрахлорид углерода, этилацетат, метилацетат, метилпропионат, этилпропионат, 1,2-дихлорэтан, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамида, N,N-диэтилформамида, диметилсульфоксид, ацетонитрил, вода или их смесь. Пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь можно необязательно добавлять в реакционную смесь в качестве катализатора. Молярным количеством катализатора является 0,01-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим молярным количеством катализатора является 0,02-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальным молярным количеством катализатора является 0,05-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). В качестве агента, связывающего кислоту в реакционную смесь можно добавлять триэтиламин, триметиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия или их смесь. Молярным количеством агента, связывающего кислоту, является 0,4-20-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим молярным количеством агента, связывающего кислоту, является 0,8-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальным молярным количеством агента, связывающего кислоту, является 1-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Температура реакции от -20 до 100°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 80°С. Наиболее подходящая температура реакции от -5 до 80°С. Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (IX), к соединению, представленному формулой (VII), или его соли составляет от 1:0,1 до 1:10. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (IX), к соединению, представленному формулой (VII), или соли составляет от 1:0,5 до 1:5. Наиболее подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (IX), к соединению, представленному формулой (VII), составляет от 1:0,8 до 1:3.

Соединение, представленное формулой (VI), получают с применением соединения, представленного формулой (Х) в присутствии дегидратирующего агента. Дегидратирующий агент выбран из группы, состоящей из DCC (дициклогексилкарбодиимид), EDC HCl (гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида), CDI (N,N'-карбонилдиимидазол) и DIC (N,N'-диизопропилкарбодиимид).

Молярным количеством дегидратирующего агента является 0,1-10-кратное количество соединения, представленного формулой (Х). Более подходящим молярным количеством дегидратирующего агента является 0,5-5-кратное количество соединения, представленного формулой (Х). Оптимальным молярным количеством катализатора является 1-3-кратное количество соединения, представленного формулой (Х). Температура реакции от -10 до 120°С. Более подходящая температура реакции от 0 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от 0 до 80°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, этилацетат, метилацетат, этилпропионат, метилпропионат, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид или ацетонитрил или их смесь.

В настоящем изобретении описан третий способ получения соединения, представленного формулой (VI).

где группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²² и n в соединении, представленном формулой (XI), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²² и n в формуле (III); U выбран из группы, состоящей из Cl, Br, I, OTs (п-толуолсульфонатной группы) и OMs (метансульфонатной группы); T выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, OSu, OBt и OAt. Группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²², n и U в соединении, представленном формулой (XIII), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²², n и U в соединении, представленном формулой (XI). Группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в соединении, представленном формулой (X), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в соединении, представленном формулой (VII).

Соединение, представленное формулой (XIII), получают реакцией соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (XI), в присутствии основания. Основание выбрано из группы, состоящей из триэтиламина, триметиламина, диизопропилэтиламина, пиридина, 4-диметиламинопиридина, 4-диэтиламинопиридина, 4-(пирролидин-1-ил)пиридина, N-метилморфолина, N-метилпиперидина, N-этилпиперидина, карбоната цезия, карбоната калия, карбоната натрия, бикарбоната натрия, бикарбоната калия, гидроксида натрия, гидроксида калия и их смеси. Молярным количеством основания является 0,5-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Более подходящим молярным количеством основания является 0,8-7-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Наиболее подходящим молярным количеством основания является 1-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, 1,2-дихлорэтан, ацетон, этилацетат, изопропанол, метилацетат, пропилацетат, метилпропионат, этилпропионат, ацетонитрил, этанол, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, монометиловый эфир этиленгликоля, моноэтиловый эфир этиленгликоля, этиленгликоль, этанол, пропанол, вода или их смесь. Температура реакции от -20 до 120°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от 0 до 80°С. Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XI), составляет от 1:0,2 до 1:10. Более предпочтительное молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XI), составляет от 1:0,5 до 1:5. Оптимальное молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XI), составляет от 1:0,8 до 1:3.

Соединение, представленное формулой (VI), получают реакцией соединения, представленного формулой (XIII), в присутствии основного реагента. Основный реагент выбран из группы, состоящей из триэтиламина, триметиламина, диизопропилэтиламина, пиридина, 4-диметиламинопиридина, 4-диэтиламинопиридина, 4-(пирролидин-1-ил)пиридина, N-метилморфолина, N-метилпиперидина, N-этилпиперидина, карбоната цезия, карбоната калия, карбоната натрия, бикарбоната натрия, бикарбоната калия, гидроксида натрия, гидроксида калия, гидрида натрия, гидрида калия, гексаметилдисилазида лития, гексаметилдисилазида калия, гексаметилдисилазида натрия и их смеси. Молярным количеством основного реагента является 0,5-3-кратное количество соединения, представленного формулой (XIII), или его соли. Более подходящим молярным количеством основного реагента является 0,8-2-кратное количество соединения, представленного формулой (XIII), или его соли. Наиболее подходящим молярным количеством основного реагента является 1-1,5-кратное количество соединения, представленного формулой (XIII), или его соли. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, 1,2-дихлорэтан, ацетон, этилацетат, изопропанол, метилацетат, пропилацетат, метилпропионат, этилпропионат, ацетонитрил, этанол, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля или их смесь. Температура реакции от -20 до 120°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от 0 до 80°С.

В настоящем изобретении описан четвертый способ получения соединения, представленного формулой (VI).

Группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²² и n в соединении, представленном формулой (XIV), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R²¹, R²² и n в формуле (III).

Соединение, представленное формулой (VI), получают реакцией соединения, представленного формулой (XIV), или его соли с соединением, представленным формулой (VII), в присутствии кислотного и/или основного реагента, в которой основный реагент выбран из группы, состоящей из триметиламина, триэтиламина, пиридина, N-метилморфолина, N-метилпиперидина, N-этилпиперидина, диизопропилэтиламина, карбоната калия, карбоната натрия, карбоната цезия, бикарбоната натрия, бикарбоната калия и их смеси. Молярным количеством основного реагента является 0,5-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Более подходящим молярным количеством основного реагента является 0,8-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Наиболее подходящим молярным количеством основного реагента является 1-3-кратное количество соединения, представленного формулой (VII), или его соли. Кислотный реагент выбран из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, муравьиной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, масляной кислоты, пентановой кислоты, гексановой кислоты, метилсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, лимонной кислоты, винной кислоты, молочной кислоты, яблочной кислоты и их смеси. Количеством кислотного реагента является 0,05-500-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим количеством кислотного реагента является 0,2-50-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Наиболее подходящим количеством кислотного реагента является 0,7-5-кратное количество (в молях) соединения, представленного формулой (VII). Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, ацетон, ацетонитрил, этилацетат, метанол, этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, этиленгликоль, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, монометиловый эфир этиленгликоля, моноэтиловый эфир этиленгликоля, метилацетат, пропилацетат, метилпропионат, этилпропионат, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид или их смесь. Температура реакции от -20 до 100°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 80°С. Наиболее подходящая температура реакции от 0 до 50°С.

В настоящем изобретении описан пятый способ получения соединения, представленного формулой (VI).

где группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (XV), являются такими же, как группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (IV). Группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (XVI), являются такими же, как группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (IV). Группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в формуле (XVI), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в соединении, представленном формулой (VII). Группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (XVII), являются такими же, как группы, представленные R¹⁵ и Q в формуле (IV). Группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в формуле (XVII), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴, R²⁰ и W в соединении, представленном формулой (VII).

Соединение, представленное формулой (XVI) или формулой (XVII), получают реакцией соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (XV). Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, тетрахлорид углерода, этилацетат, метилацетат, метилпропионат, этилпропионат, 1,2-дихлорэтан, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил, вода или их смесь. В реакционную смесь в качестве катализатора можно необязательно добавлять пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Молярным количеством катализатора является 0,01-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим молярным количеством катализатора является 0,02-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальным молярным количеством катализатора является 0,05-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). В реакцию в качестве связывающего кислоту агента можно необязательно добавлять триэтиламин, триметиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия или их смесь. Молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 0,4-20-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящее молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 0,8-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальное молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 1-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Температура реакции от -20 до 100°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 80°С. Наиболее подходящая температура реакции от 0 до 80°С. Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XV), составляет от 1:0,2 до 1:10. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XV), составляет от 1:0,5 до 1:5. Наиболее подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (XV), составляет от 1:0,8 до 1:3.

Соединение, представленное формулой (VI), можно получить из соединения, представленного формулой (XVI) или формулой (XVII), в присутствии дегидратирующего агента. Дегидратирующий агент выбран из группы, состоящей из DCC (дициклогексилкарбодиимид), EDC HCl (гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида), CDI (N,N'-карбонилдиимидазол) и DIC (N,N'-диизопропилкарбодиимид). Молярным количеством дегидратирующего агента является 0,1-10-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII). Более подходящим молярным количеством дегидратирующего агента является 0,5-5-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII). Оптимальным молярным количеством дегидратирующего агента является 1-3-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII). Температура реакции от -10 до 120°С. Более подходящая температура реакции от 0 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от 20 до 100°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, этилацетат, метилацетат, этилпропионат, метилпропионат, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил или их смесь. В реакционную смесь в качестве катализатора можно добавлять пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Молярным количеством катализатора является 0,01-1-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII). Более подходящим молярным количеством катализатора является 0,02-0,8-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII). Оптимальным молярным количеством катализатора является 0,03-0,5-кратное количество соединения, представленного формулой (XVI) или (XVII).

В настоящем изобретении описан шестой способ получения соединения, представленного формулой (VI).

Группы, представленные R¹⁵, X, Y и Q в соединении, представленном формулой (XX), являются такими же, как группы, представленные R¹⁵, X, Y и Q в формуле (IV). U в соединении, представленном формулой (XX), представляет собой Cl, Br, OMs (метансульфонатную группу) или OTs (п-толуолсульфонатную группу).

Соединение, представленное формулой (VI), можно получить реакцией соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (ХХ), в присутствии основания. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, тетрахлорид углерода, этилацетат, метилацетат, метилпропионат, этилпропионат, 1,2-дихлорэтан, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил, вода или их смесь. В реакционную смесь в качестве катализатора можно необязательно добавлять пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Молярным количеством катализатора является 0,01-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящим молярным количеством катализатора является 0,02-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальным молярным количеством катализатора является 0,05-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Основание, которое можно добавлять в реакционную смесь, включает, но не ограничивается перечисленным, триэтиламин, триметиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия или их смесь. Молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 0,4-20-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Более подходящее молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 0,8-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Оптимальное молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 1-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VII). Температура реакции от -20 до 100°С. Более подходящая температура реакции от -10 до 80°С. Оптимальная температура реакции от 0 до 80°С. Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (ХХ), составляет от 1:0,2 до 1:10. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (ХХ), составляет от 1:0,5 до 1:5. Наиболее подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VII), или его соли к соединению, представленному формулой (ХХ), составляет от 1:0,8 до 1:3.

В настоящем изобретении описан первый способ получения соединения, представленного формулой (I).

Соединение, представленное формулой (I), получают реакцией соединения, представленного формулой (VI), где R²⁰ представляет собой ОН, с R⁸COOH, пептидной цепью, НООС-Ar-R²⁷, соединением, представленным формулой (IX), соединением, представленным формулой (XV), или соединением, представленным формулой (XXI).

где R⁸ в R⁸COOH представляет собой Н или С_1-6гидрокарбил; R⁸ и R²⁶ в соединении, представленном формулой (XXI), каждый независимо, представляют собой Н или С_1-6гидрокарбил; Ar представляет собой ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо; R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN, OH, SH, COOH, NH₂, NR⁸R⁹, C_1-6гидрокарбила, OC_1-6гидрокарбила, OC(O)C_1-6гидрокарбила, C(O)OC_1-6гидрокарбила, SC_1-6гидрокарбила, S(O)C_1-6гидрокарбила и S(O)₂C_1-6гидрокарбила. Пептидная цепь имеет свободный карбоксил и N-конец имеет 0-2 одинаковых или разных C_1-6гидрокарбила или имеет аминозащитную группу, где аминозащитная группа выбрана из группы, состоящей из Fmoc, Boc, CBZ, Tr и Alloc.

В реакционную смесь можно добавлять агент конденсации. Агент конденсации выбран из группы, состоящей из DCC, EDC HCl, CDI, DIC и их смеси. Молярное количество агента конденсации составляет 0,1-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее молярное количество агента конденсации составляет 0,5-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное молярное количество агента конденсации составляет 1-3-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Температура реакции от -10 до 120°С. Более подходящая температура от 0 до 100°С. Оптимальная температура реакции 20-100°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, этилацетат, метилацетат, этилпропионат, метилпропионат, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил или их смесь. В реакционную смесь в качестве катализатора можно необязательно добавлять пиридин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Молярное количество катализатора составляет 0,01-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее молярное количество катализатора составляет 0,02-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное молярное количество катализатора составляет 0,05-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к R⁸COOH, пептидной цепи, НООС-Ar-R²⁷ или соединению, представленному формулой (XXI), составляет от 1:0,2 до 1:10. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к R⁸COOH, пептидной цепи, НООС-Ar-R²⁷ или соединению, представленному формулой (XXI), составляет от 1:0,5 до 1:7. Оптимальное молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к R⁸COOH, пептидной цепи, НООС-Ar-R²⁷ или соединению, представленному формулой (XXI), составляет от 1:0,8 до 1:5. Если необходимо, в реакционную смесь можно добавлять основание в качестве агента, связывающего кислоту. Основание, которое можно добавить в реакционную смесь, включает, но не ограничивается перечисленным, триэтиламин, триметиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин, карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия или их смесь. Молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 0,4-20-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 0,8-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное молярное количество основания, которое добавляют в реакционную смесь, составляет 1-5-кратное количество соединения, представленного формулой (VI).

При помощи общепринятой реакции удаления защиты, применяемой специалистами в данной области, соединение, являющееся целью изобретения, получают из продукта, который получает реакцией соединения, представленного формулой (VI), с пептидной цепью, у которой N-конец имеет защитную группу. То есть защитную группу Fmoc можно удалить с помощью NH₃, аминоэтанола, диметиламина, диэтиламина, пиперидина, пиперазина или DBU; Вос или Tr можно удалить хлористоводородной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой, уксусной кислотой, муравьиной кислотой, трифторуксусной кислотой, метансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой или газообразным хлоридом водорода.

В настоящем изобретении описан второй способ получения соединения, представленного формулой (I).

Соединение, представленное формулой (I), получают реакцией соединения, представленного формулой (VI), где R²⁰ представляет собой ОН, с R⁸NCO, где R⁸ представляет собой С_1-6гидрокарбил. Отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к R⁸NCO составляет от 1:0,5 до 1:5. Более подходящее в сырье отношение соединения, представленного формулой (VI), к R⁸NCO составляет от 1:0,7 до 1:2. Оптимальное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к R⁸NO составляет от 1:0,8 до 1:1,5.

В реакционную смесь можно добавлять третичный амин, такой как триметиламин, триэтиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Добавляемое молярное количество третичного амина составляет 0,5-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее добавляемое молярное количество третичного амина составляет 0,5-7-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное добавляемое молярное количество третичного амина составляет 0,5-3-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). В качестве катализатора в реакционную смесь можно необязательно добавлять 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,01-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,02-0,8-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,05-0,3-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Температура реакции от -10 до 120°С. Более подходящей температурой является 0-100°С. Наиболее подходящая температура реакции 20-100°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, этилацетат, метилацетат, этилпропионат, метилпропионат, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил или их смесь.

В настоящем изобретении описан третий способ получения соединения, представленного формулой (I).

Соединение, представленное формулой (VI), где R²⁰ представляет собой ОН, можно подвергнуть реакции с фосгеном, дифосгеном или трифосгеном и затем добавить HNR⁸R⁹ с получением соединения, представленного формулой (I). Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к фосгену, дифосгену или трифосгену составляет от 1:0,5 до 1:5. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к фосгену, дифосгену или трифосгену составляет от 1:0,7 до 1:3. Оптимальное молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к фосгену, дифосгену или трифосгену составляет от 1:0,9 до 1:2. Молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к HNR⁸R⁹ составляет от 1:0,5 до 1:5. Более подходящее молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к HNR⁸R⁹ составляет от 1:0,7 до 1:3. Оптимальное молярное отношение в сырье соединения, представленного формулой (VI), к HNR⁸R⁹ составляет от 1:0,9 до 1:2.

В реакционную смесь можно добавлять агент, связывающий кислоту, такой как карбонат калия, карбонат натрия, бикарбонат калия, бикарбонат натрия, карбонат цезия, третичный амин, такой как триметиламин, триэтиламин, пиридин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Добавляемое молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 1-20-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее добавляемое молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 1,5-15-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное добавляемое молярное количество агента, связывающего кислоту, составляет 2-10-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). В качестве катализатора в реакционную смесь можно необязательно добавлять 4-диметиламинопиридин, 4-диэтиламинопиридин, 4-(пирролидин-1-ил)пиридин или их смесь. Добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,01-1-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Более подходящее добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,02-0,8-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Оптимальное добавляемое молярное количество катализатора составляет 0,05-0,3-кратное количество соединения, представленного формулой (VI). Температура реакции от -100 до 120°С. Более подходящая температура от -78 до 100°С. Наиболее подходящая температура реакции от -78 до 80°С. Реакцию проводят в растворителе, таком как дихлорметан, хлороформ, этилацетат, метилацетат, этилпропионат, метилпропионат, ацетон, тетрагидрофуран, диметиловый эфир этиленгликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, N,N-диметилформамид, N,N-диэтилформамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил или их смесь.

Соединение, представленное формулой (I), можно применять для получения лекарственного средства для лечения рака или опухоли. Раковые заболевания включают, но не ограничиваются перечисленным, рак кишечника, рак печени, рак желудка, рак молочной железы, рак легких, рак почек, цервикальный рак, рак поджелудочной железы, рак яичников, рак простаты, церебральную глиому, лимфому, рак кожи, меланому, рак головы и шеи, рак щитовидной железы, множественный рак костного мозга и лейкоз.

Лекарственное средство для лечения рака или опухоли, которое получают из соединения, представленного формулой (I), можно применять в комбинации с другими подходящими противораковыми лекарственными средствами, иммуностимуляторами, противораковыми синергистами, гормонами или традиционными препаратами китайской медицины, такими как таксоловые противораковые лекарственные средства, камптотециновые противораковые лекарственные средства, винбластиновые противораковые лекарственные средства, циклофосфамид, 5-фторурацил, талидомид, цисплатин, ревлимид, тарцева, ирреза, глевик и их смесь. При применении в комбинации с другим терапевтическим агентом данное лекарственное средство можно вводить одновременно или последовательно.

Дозированная форма лекарственного средства для лечения рака или опухоли, которую получают из соединения, представленного формулой (I), зависит от пути введения, такого как желудочно-кишечное введение, капельное внутривенное введение, внутрибрюшинное введение, внутрикожное введение, внутримышечное введение, интраназальное введение или местное введение. Дозированная форма, содержащая по меньшей мере одно соединение, представленное формулой (I), дополнительно содержит подходящий носитель, наполнитель, растворитель, разбавитель, краситель и/или адгезив, которые необходимы для получения дозированной формы.

Дозированная форма лекарственного средства для лечения рака или опухоли, которую получают из соединения, представленного формулой (I), предпочтительно является формой инъекции, которая включает, но не ограничивается перечисленным, порошкообразную инъекцию, лиофилизированную порошкообразную инъекцию, гидроинъекцию, эмульсию и суспензию.

Аббревиатуры: Su: сукцинимидо; Bt: бензотриазол-1-ил; At: 7-азабензотриазол-1-ил; Fmoc: (9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил; Вос: трет-бутоксикарбонил; CBZ: бензилоксикарбонил; Tr: триметилфенил; Alloc: аллилоксикарбонил; DBU: 1,8-диазабицикло[5.4.0]уедец-7-ен.

Конкретные варианты осуществления

Пример 1: 3'-пирролилдоксорубицин.

В 1 л трехгорлую колбу добавляли 3,076 г гидрохлорида доксорубицина, 300 мл дистиллированной воды, 300 мл 1,2-дихлорэтана, 30 мл 2,5-диметокситетрагидрофурана и 6 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в атмосфере аргона. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры. Реакционный раствор выливали в 200 мл ледяной воды. Смесь оставляли для разделения. Органическую фазу промывали один раз 200 мл насыщенного раствора хлорида натрия и сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе. При перемешивании на ледяной бане в водную фазу добавляли 100 мл 5% водного раствора бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали хлороформом (50 мл × 3) и слои хлороформа объединяли. Объединенный слой хлороформа промывали один раз 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Смесь фильтровали и упаривали на роторном испарителе для удаления растворителя. Образовавшийся сырой продукт объединяли с указанным выше сырым продуктом. Образовавшийся продукт очищали колоночной хроматографией и элюировали смесью хлороформ:метанол = 35:1. Получали 2,91 г продукта. МС: 592 (М-1).

Соединения в примерах 2-6 получали таким же способом, как описано в примере 1.

Пример 2: 3'-пирролил-5-иминодауномицин, МС: 576 (М-1).

Пример 3: 3'-пирролилидарубицин, МС: 547 (М-1).

Пример 4: 3'-пирролилэзорубицин, МС: 577 (М-1).

Пример 5: 3'-пирролилдаунорубицин, МС: 577 (М-1).

Пример 6: 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин, МС: 677 (М-1).

Пример 7: 3'-сукцинимидодоксорубицин.

100 мг гидрохлорида доксорубицина добавляли в 50 мл одногорлую круглодонную колбу и растворяли в 3 мл ДМФА. Добавляли 63 мкл DIEA (диизопропилэтиламина) и 2 мг DMAP (4-диметиламинопиридина) и смесь перемешивали в течение 10 мин. Добавляли 21 мг янтарного ангидрида и смесь перемешивали в течение 1 ч в атмосфере аргона. Реакционную жидкость упаривали на роторном испарителе. К образовавшемуся остатку добавляли 20 мл дистиллированной воды и 10 мл хлороформа и смесь фильтровали с откачкой насосом, получая при этом осадок на фильтре. Осадок на фильтре сушили в вакууме. 18 мг осадка на фильтре переносили в 50 мл одногорлую колбу. В одногорлую колбу добавляли 5 мл дихлорметана (высушен молекулярными ситами) и 12 мкл триэтиламина (высушен молекулярными ситами) и затем добавляли 69 мг хлорангидрида циануровой кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре. К реакционной жидкости добавляли 20 мл дихлорметана. Смесь промывали один раз 20 мл воды. Образовавшуюся органическую фазу промывали один раз 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Раствор упаривали роторным испарением для удаления растворителя. Получали сырой продукт. Сырой продукт очищали тонкослойной хроматографией и проявляли (элюировали) смесью хлороформ:метанол = 22:1. Получали указанное в заголовке соединение. МС: 624 (М-1).

Соединения в примерах 8-11 получали таким же способом, как описано в примере 7.

Пример 8: 3'-глутаримидодоксорубицин, МС: 1296 (2М+Н₂О).

Пример 9: 3'-малеимидодоксорубицин, МС: 623 (М).

Пример 10: 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин, МС: 722 (М+EtOH).

Пример 11: 3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин, МС: 1345 (2М).

Пример 12: 3'-бутиролактамдоксорубицин.

10 мг гидрохлорида доксорубицина растворяли в 5 мл ДМФА (безводном). Температуру снижали до 0-5°С на ледяной бане. Добавляли 7 мг диизопропилэтиламина и смесь перемешивали в течение 10 мин. Добавляли 2,4 мг 4-хлорбутирилхлорида и реакцию проводили в течение 30 мин. Добавляли 100 мл воды при охлаждении на ледяной бане. Смесь экстрагировали три раза хлороформом (50 мл × 3) и слои хлороформа объединяли. Смесь промывали один раз насыщенным раствором хлорида натрия и сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе для удаления растворителя. Сырой продукт очищали тонкослойной хроматографией и проявляли (элюировали) смесью хлороформ:метанол = 96:5. Получали 8 мг продукта и продукт растворяли в 3 мл ДМФА (безводного). В атмосфере аргона температуру смеси снижали от -5 до 0°С на ледяной бане. Добавляли 0,3 мг гидрида натрия и смесь перемешивали в течение 24 часов. После завершения реакции добавляли 50 мл воды. Образовавшуюся смесь экстрагировали три раза хлороформом (50 мл × 3) и слои хлороформа объединяли. Смесь промывали один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе для удаления растворителя. Сырой продукт очищали тонкослойной хроматографией и элюировали смесью хлороформ:метанол = 30:1. Получали 6 мг продукта. МС: 611.

Пример 13: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидросукцинат.

845 мг 3'-пирролилдоксорубицина добавляли в 50 мл одногорлую колбу и растворяли в 20 мл хлороформа. Температуру снижали до -10°С в атмосфере аргона. Добавляли 704 мг DMAP и 570 мг янтарного ангидрида. Смесь перемешивали на протяжении ночи. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли 300 мл хлороформа. Смесь промывали один раз 100 мл 5% водного раствора лимонной кислоты, промывали один раз 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе. Получали сырой продукт. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией и элюировали смесью хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота = 475:25:5. Получали 238 мг продукта. МС: 692 (М-1).

Соединения в примерах 14-25 получали таким же способом, как описано в примере 13.

Пример 14: 3'-пирролилэзорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 676 (М-1).

Пример 15: 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 776 (М-1).

Пример 16: 3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 724 (М-1).

Пример 17: 3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 738 (М-1).

Пример 18: 3'-малеимидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 722 (М-1).

Пример 19: 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 773 (М-1).

Пример 20: 3'-(бензо)-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцинат, МС: 772 (М-1).

Пример 21: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродисукцинат, МС: 792 (М-1).

Пример 22: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидромалеат, МС: 690 (М-1).

Пример 23: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродималеат, МС: 788 (М-1).

Пример 24: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидроглутарат, МС: 730 (М+Na).

Пример 25: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродиглутарат, МС: 820 (М-1).

Пример 26: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо(3-нитро-2-карбокси)бензоат.

50 мг 3'-пирролилдоксорубицина добавляли в 50 мл одногорлую колбу и растворяли в 2,5 мл хлороформа. Температуру снижали до -5°С в атмосфере аргона. Добавляли 42 мг DMAP и 65 мг 3-нитрофталевого ангидрида. Смесь перемешивали на протяжении ночи. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли 150 мл хлороформа. Смесь промывали один раз 100 мл 5% водного раствора лимонной кислоты. Органическую фазу промывали один раз 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе. После очистки тонкослойной хроматографией и элюирования смесью хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота = 450:50:5 получали указанный в заголовке продукт. МС: 785 (М-1).

Соединения в примерах 27-37 получали таким же способом, как описано в примере 26.

Пример 27: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-фтор-2-карбокси)бензоат, МС: 758 (М-1).

Пример 28: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(3-фтор-2-карбокси)бензоат, МС: 925.

Пример 29: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-карбокси-6-фтор)бензоат, МС: 758 (М-1).

Пример 30: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(6-фтор-2-карбокси)бензоат, МС: 925.

Пример 31: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоат, МС: 812 (М-1).

Пример 32: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоат, МС: 1033 (М).

Пример 33: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,4-дикарбокси)бензоат, МС: 784 (М-1).

Пример 34: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(2,4-дикарбокси)бензоат, МС: 978 (М).

Пример 35: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(2-карбокси)бензоат, МС: 889 (М).

Пример 36: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-карбокси)пиридин-2-формиат, МС: 741 (М-1).

Пример 37: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксо-(3-нитро-2-карбокси)дибензоат, МС: 978 (М-1).

Пример 38: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоаланината.

59,3 мг 3'-пирролилдоксорубицина и 10 мл дихлорметана (высушен молекулярными ситами) добавляли в 50 мл одногорлую колбу и перемешивали в атмосфере аргона. Добавляли 63 мг Вос-аланина, 38 мг EDC HCl и 12 мг DMAP. После завершения реакции добавляли 50 мл дихлорметана. Смесь промывали один раз 100 мл воды. Водный слой один раз обратно экстрагировали дихлорметаном и экстракт объединяли с органической фазой. Образовавшуюся фазу промывали один раз 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и упаривали на роторном испарителе. После очистки тонкослойной хроматографией и элюирования смесью хлороформ:метанол = 35:1 получали 43 мг продукта. Образовавшееся соединение растворяли в 1 мл тетрагидрофурана (перегнанный) и в раствор вводили газообразный аргон. Температуру снижали до -5°С. Добавляли 1 мл раствора хлорида водорода в диэтиловом эфире. Смесь перемешивали в течение 2 часов и затем фильтровали. Осадок на фильтре промывали три раза диэтиловым эфиром, получая при этом указанное в заголовке соединение. МС: 665 (М+1).

Соединения в примерах 39-53 получали таким же способом, как описано в примере 38.

Пример 39: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксовалината, МС: 693 (М+1).

Пример 40: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоглицината, МС: 651 (М+1).

Пример 41: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксолейцината, МС: 707 (М+1).

Пример 42: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,2-диметил)глицината, МС: 679 (М+1).

Пример 43: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-фенил)глицината, МС: 727 (М+1).

Пример 44: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-диэтиламиноацетат, МС: 707 (М+1).

Пример 45: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-морфолинилацетат, МС: 720 (М+1).

Пример 46: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(N-глицил)валината, МС: 750 (М+1).

Пример 47: гидрохлорид 3'-пирролилэзорубицин-14-оксоглицината, МС: 635 (М+1).

Пример 48: гидрохлорид 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксоглицината, МС: 735 (М+1).

Пример 49: гидрохлорид 3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксоглицината, МС: 683 (М+1).

Пример 50: гидрохлорид 3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксоглицината, МС: 697 (М+1).

Пример 51: гидрохлорид 3'-малеимидодоксорубицин-14-оксоглицината, МС: 681 (М+1).

Пример 52: гидрохлорид 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината, МС: 732 (М+1).

Пример 53: гидрохлорид 3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината, МС: 731 (М+1).

Пример 54: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-β-аланината, МС: 697 (М+1).

Анализ цитотоксичности (анализ MTS)

I. Линии клеток и реагенты

MCF-7: линии клеток рака молочной железы человека;

HCT-8: линии клеток рака толстой кишки человека;

HEPG-2: линии клеток рака печени человека;

A549: линии клеток рака легких человека;

LOVO: линии клеток рака толстой кишки человека;

Культуральный раствор RPMI 1640; МТТ: синий тетразолий; ДМСО: диметилсульфоксид; 96-луночный планшет для культур клеток;

Противоопухолевое соединение (получено Tianjin Hemay Bio-tech co. Ltd);

Позитивное контрольное лекарственное средство: доксорубицин (получен Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co. Ltd.).

II. Определение активности ингибирования роста клеток

1. Культура клеток и обработка лекарственным средством

Клетки засевали в культуральном растворе для клеток RPMI 1640, содержащем 10% фетальную телячью сыворотку (дополняли 100 кЕ/л пенициллина и 100 кЕ/л стрептомицина). Чашку для культивирования помещали в термостат для клеток, содержащий 5% СО₂, при 37°С. Культуральный раствор заменяли один раз каждые 2-3 дня. Клетки расщепляли 0,25% трипсиновой жидкостью, пассировали и собирали.

Из клеток во время логарифмической фазы роста получали суспензию клеток, имеющую требуемую концентрацию, с применением культурального раствора для клеток RPMI 1640, содержащего 10% фетальную телячью сыворотку. Суспензию клеток добавляли в 98-луночный планшет для культур клеток в количестве 3000-5000 клеток на лунку (100 мкл). После инкубации в течение 24 часов добавляли 100 мкл испытуемых веществ с различными концентрациями на лунку. В данном планшете имелось четыре лунки для параллельных опытов для каждой концентрации. После инкубации в течение 72-120 часов супернатант выгружали. В каждую лунку добавляли 100 мкл свежеприготовленного культурального раствора 0,5 мг/мл ММТ, не содержащего сыворотку. После инкубации в течение 4 часов при 37°С, супернатант выгружали. Формазан растворяли в 200 мкл ДМСО. После слабой осцилляции в течение 15 мин величины поглощения (величина OD) при детектируемой длине волны 570 нм и контрольной длине волны 450 нм определяли с помощью прибора ферментного мечения.

2. Обработка данных

Данные представляли как х±s. Степень ингибирования=(величина OD контрольной группы - величина OD группы введения)/величина OD контрольной группы × 100%. Максимальная степень ингибирования I_max и половина эффективной концентрации (IC₅₀) представляют собой противораковые действия. Фигуры строили с применением программного обеспечения MicroCal Origin. Кривую ингибирования роста опухолевых клеток испытуемым веществом подгоняли с помощью четырехпараметрической логистической программы программного обеспечения. Вычисляли половину эффективной концентрации (IC₅₀; мкг/мл) для ингибирования пролиферации опухолевых клеток.

3. Результаты

Концентрациями, при которых определяли воздействия испытуемого вещества, были 0,001 мкг/мл, 0,003 мкг/мл, 0,009 мкг/мл, 0,027 мкг/мл, 0,082 мкг/мл, 0,247 мкг/мл, 0,741 мкг/мл, 2,222 мкг/мл, 6,667 мкг/мл и 20 мкг/мл.

Концентрациями, при которых определяли воздействия доксорубицина (позитивное лекарственное средство) были 1,25 мкг/мл, 5 мкг/мл, 20 мкг/мл. В 96-луночном планшете 3000-5000 клеток инокулировали в каждую лунку, причем имелось четыре лунки для четырех параллельных опытов для каждой концентрации. В таблице 1 перечислены степени ингибирования роста клеток Lovo соединениями при концентрации 1 мкМ. В таблице 2 перечислены активности соединений в отношении ингибирования роста различных опухолевых клеток. В таблице 3 перечислены степени ингибирования соединениями при различных концентрациях гиперплазии раковых клеток MCF-7 молочной железы человека.

Таблица 1
Степень ингибирования роста клеток Lovo соединениями при концентрации 1 мкМ Соединения Степень ингибирования роста (%) Соединения Степень ингибирования роста (%) Доксорубицин 50,35 Пример 5 67,25 Пример 1 80,62 Пример 6 90,94 Пример 2 74,0 Пример 7 83,31 Пример 3 88,9 Пример 13 76,06 Пример 4 40,71 Пример 38 78,44

Таблица 2
Активность ингибирования соединениями опухолевых клеток Соединения Концентрация, наполовину ингибирующая рост клеток (EC ₅₀ ) (мкМ) Клетки MCF-7 Клетки НСТ-8 HEPG-2 Клетки А549 Доксорубицин 1,2 0,9 2,0 0,66 Пример 1 0,21 0,49 0,81 0,061 Пример 13 0,93 1,87 0,15 2,36 Пример 38 0,87 0,59 1,06 0,23

Таблица 3
Влияния соединения примера 1 на ингибирование гиперплазии клеток MCF-7 рака молочной железы человека Концентрация соединения (мкг/мл) Величины OD при 570 нм Степень ингибирования (%) Основные параметры 0 1,701±0,161   IC₅₀=0,06023±0,01528
мкг/мл
I_max=83,03% 0,001 1,629±0,257 4,27 0,003 1,744±0,176 -2,49 0,009 1,443±0,079 15,17 0,027 1,238±0,072 27,22 0,082 0,883±0,041 48,09 0,247 0,703±0,058 58,68 0,741 0,461±0,026 72,89 2,222 0,302±0,030 82,26 6,667 0,320±0,030 81,18 20 0,289±0,019 83,03

Активность испытуемых соединений является эквивалентной или немного более высокой, чем активность доксорубицина. Кроме того, испытуемые соединения обладают лучшими действиями в отношении ингибирования роста различных линий опухолевых клеток человека, таких как линии клеток LOVO рака толстой кишки человека, линии клеток MCF-7 рака молочной железы человека, линии клеток НСТ-8 рака толстой кишки, линии клеток HEPG-2 рака печени и линии клеток А549 рака легких.

Пример 1: описание определения МТС (максимально переносимой дозы) у мышей in vivo

Цель эксперимента: предварительное изучение токсичности in vivo соединения примера 1 на мышах.

Экспериментальное животное: белые мыши Kunming с массой 20±2 г, полученные из помещения для животных в Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences. Разрешение на животных № SCXK(JIN)2005-0001.

Экспериментальное лекарственное средство: соединение примера 1.

Получение раствора лекарственного средства: после вихревого перемешивания лекарственного средства для растворения в 0,5% (об./об.) ДМСО добавляли 5% (об./об.) RH40 (этоксилированное гидрогенизированное касторовое масло). После вихревого перемешивания объем определяли с применением нормального солевого раствора.

Схема эксперимента

(1) Однократное введение. Девять здоровых самцов белых мышей Kunming, массы тела которых были 20±2 г, делили на три группы: две мыши принадлежат к контрольной группе; 6 мышей принадлежат к группе введения 20 мг/кг; 1 мышь принадлежит к группе введения 30 мг/кг. 20 мг/кг и 30 мг/кг соединения примера 1 вводили один раз посредством инъекции в хвостовую вену мышам в группе введения. Такой же объем растворителя вводили в качестве контроля мышам в контрольной группе. После введения проводили обследование состояний мышей, таких как действие, рефлекс, двигательная активность и тому подобное, в течение одного часа. Затем массы мышей регистрировали каждый день. После обследования в течение 14 дней после окончания введения мышей анатомировали для обследования того, имеют ли их основные органы явную аномалию.

(2) Многократное введение. Двенадцать здоровых белых мышей Kunming, включающих шесть мышей-самцов и шесть мышей-самок, массы тела которых составляют 20±2 г, делили на две группы: 1 мышь относится к контрольной группе; 5 мышей относятся к группе с введением 10 мг/кг. 10 мг/кг испытуемого лекарственного средства вводили один раз каждые три дня посредством инъекции мышам в хвостовую вену в группе введения. Такой же объем растворителя вводили в качестве контроля мышам в контрольной группе. Мышам в каждой группе проводили введение пять раз. После каждого введения состояния мышей, такие как действие, рефлекс, двигательная активность и тому подобное, обследовали в диапазоне одного часа. Массы тела мышей регистрировали каждый день. Мышей, имеющих нормальное самочувствие в течение одной недели после отмены введения лекарственного средства, анатомировали для обследования того, имеют ли их основные органы явную аномалию.

Результаты эксперимента

1. Степень смертности

(1) Однократное введение: смертные случаи не обнаружены.

(2) Многократное введение: смертные случаи не обнаружены.

2. Изменение массы тела

(1) Однократное введение: масса тела каждой мыши увеличивалась после введения и явную аномалию поверхности тела не наблюдали.

(2) Многократное введение: масса тела каждой мыши увеличивалась медленно после введения и явную аномалию поверхности тела не наблюдали.

Заключение

Максимально переносимая доза (MTD) испытуемого соединения по меньшей мере в пять раз больше, чем максимально переносимая доза доксорубицина (MTD: 8-12 мг/кг).

ПРИЛОЖЕНИЕ

СОЕДИНЕНИЯ СТРУКТУРЫ Пример 1: 3'-пирролилдоксорубицин Пример 2: 3'-пирролил-5-иминодауномицин

Пример 3: 3'-пирролилидарубицин Пример 4: 3'-пирролилэзорубицин

Пример 5: 3'-пирролилдаунорубицин Пример 6: 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин

Пример 7: 3'-сукцинимидодоксорубицин Пример 8: 3'-глутаримидодоксорубицин

Пример 9: 3'-малеимидодоксорубицин Пример 10: 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин

Пример 11: 3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин Пример 12: 3'-бутиролактамдоксорубицин

Пример 13: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидросуцинат Пример 14: 3'-пирролилэзорубицин-14-оксогидросукцинат

Пример 15: 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксогидросукцинат Пример 16: 3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат

Пример 17: 3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат Пример 18: 3'-малеимидодоксорубицин-14-оксогидросукцинат

Пример 19: 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцинат Пример 20: 3'-(бензо)-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцинат

Пример 21: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродисукцинат Пример 22: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидромалеат

Пример 23: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродималеат Пример 24: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидроглутарат

Пример 25: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродиглутарат Пример 26: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо(3-нитро-2-карбокси)бензоат

Пример 27: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-фтор-2-карбокси)бензоат Пример 28: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(3-фтор-2-карбокси)бензоат

Пример 29: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-карбокси-6-фтор)бензоат Пример 30: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(6-фтор-2-карбокси)бензоат

Пример 31: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоат Пример 32: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоат

Пример 33: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,4-дикарбокси)бензоат Пример 34: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(2,4-дикарбокси)бензоат

Пример 35: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис-(2-карбокси)бензоат Пример 36: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-карбокси)пиридин-2-формиат

Пример 37: 3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксо-(3-нитро-2-карбокси)дибензоат Пример 38: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоаланината

Пример 39: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксовалината Пример 40: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоглицината

Пример 41: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксолейцината Пример 42: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,2-диметил)глицината

Пример 43: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-фенил)глицината Пример 44: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-диэтиламиноацетат

Пример 45: 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-морфолинилацетат Пример 46: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(N-глицил)валината

Пример 47: гидрохлорид 3'-пирролилэзорубицин-14-оксоглицината Пример 48: гидрохлорид 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксоглицината

Пример 49: гидрохлорид 3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксоглицината Пример 50: гидрохлорид 3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксоглицината

Пример 51: гидрохлорид 3'-малеимидодоксорубицин-14-оксоглицината Пример 52: гидрохлорид 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината

Пример 53: гидрохлорид 3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината Пример 54: гидрохлорид 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-р-аланината

Изобретение относится к тетрациклическим антибиотическим производным антрахинона с противораковой активностью. Тетрациклические антибиотические производные антрахинона, описываемые в настоящем изобретении, обладают такой же или более высокой активностью, чем активность известных лекарственных средств, таких как доксорубицин, даунорубицин и тому подобное, на клеточном уровне, и в то же время обладают лучшей толерантностью, чем толерантность доксорубицина и даунорубицина, для организма животного. 4 н. и 11 з.п.ф-лы, 54 прим., 3 табл.

1. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват

где R¹ представляет собой Н или ОС_1-4алкил;
R² представляет собой Н или OR⁶, где R⁶ выбран из группы, состоящей из Н, пептидной цепи, C(O)NR⁸R⁹, C(O)Ar-R²⁷ и С(O)(С_2-4гидрокарбилиден)СООН; где NR⁸R⁹ представляет собой пиперидин-1-ил или морфолин-1-ил; Ar представляет собой ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо; R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN и СООН; пептидная цепь представляет собой одну природную аминокислоту, одну неприродную аминокислоту или пептидную цепь, состоящую из 2-4 природных аминокислот и/или неприродных аминокислот;
W представляет собой О или NH;
R³ представляет собой Н, F или С_1-4алкил;
R⁴ представляет собой Н, F или OR⁷, где R⁷ представляет собой Н, 2-пиранил, С(O)(С_2-4гидрокарбилиден)СООН или C(O)Ar-R²⁷, где Ar представляет собой ароматическое кольцо, и R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN и СООН;
R⁵ представлен формулой (III), формулой (IV), формулой (V) или малеимидо;

где n равно 1 или 2;
Х и Y, каждый независимо, представляют собой С=O или CR²¹R²²;
Q представляет собой СН или N;
R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, R¹⁵ и R¹⁶, каждый независимо, выбраны из группы, состоящей из Н и F; и
R²¹ и R²², каждый независимо, представляют собой Н.

2. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где R¹ представляет собой Н или ОСН₃.

3. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где W представляет собой О.

4. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где R² выбран из группы, состоящей из Н, ОН, гидросукцинатной группы, гидроглутаратной группы, гидромалеатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (3-карбокси)пиридин-2-формиатной группы, аланинатной группы, валинатной группы, глицинатной группы, лейцинатной группы, (2,2-диметил)глицинатной группы, (2-фенил)глицинатной группы, 2-диэтиламиноацетатной группы, 2-морфолинилацетатной группы и (N-глицил)валинатной группы.

5. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где R³ представляет собой Н или СН₃.

6. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где R⁴ выбран из группы, состоящей из Н, F, ОН, СН₃, 2-пиранилокси, гидросукцинатной группы, (3-нитро-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси)бензоатной группы, (2,4-дикарбокси)бензоатной группы, (3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоатной группы, (2-карбокси-6-фтор)бензоатной группы и (3-фтор-2-карбокси)бензоатной группы.

7. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где R⁵ выбран из группы, состоящей из пиррол-1-ила, сукцинимидо, бутиролактам-1-ила, валеролактам-1-ила, фталимидо и пиридиндикарбоксимидо.

8. Соединение, представленное формулой (I), его соль или сольват по п.1, где соединение выбрано из группы, состоящей из
3'-пирролилдоксорубицина,
3'-пирролил-5-иминодауномицина,
3'-пирролилидарубицина,
3'-пирролилэзорубицина,
3'-пирролилдаунорубицина,
3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицина,
3'-сукцинимидодоксорубицина,
3'-глутаримидодоксорубицина,
3'-малеимидодоксорубицина,
3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицина,
3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицина,
3'-бутиролактамдоксорубицина,
3'-пирролилэзорубицин-14-оксо-гидросукцината,
3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-малеимидодоксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксогидросукцината,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродисукцината,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидромалеата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродималеата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксогидроглутарата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксогидродиглутарата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-нитро-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-фтор-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис(3-фтор-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-карбокси-6-фтор)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис(6-фтор-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис(3,4,5,6-тетрафтор-2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,4-дикарбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис(2,4-дикарбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксобис(2-карбокси)бензоата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(3-карбокси)пиридин-2-формиата,
3'-пирролилдоксорубицин-14,4'-оксо-(3-нитро-2-карбокси)дибензоата,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоаланината,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксовалината,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксолейцината,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2,2-диметил)глицината,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(2-фенил)глицината,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-диэтиламиноацетата,
3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-2-морфолинилацетата,
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-(N-глицил)валината,
гидрохлорида 3'-пирролилэзорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-пирролил-4'-(пиран-2-ил)доксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-сукцинимидодоксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-глутаримидодоксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-малеимидодоксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-(пиридо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината,
гидрохлорида 3'-(бензо-(2,3)сукцинимидо)доксорубицин-14-оксоглицината и
гидрохлорида 3'-пирролилдоксорубицин-14-оксо-в-аланината.

9. Способ получения соединения, представленного формулой (I) по п.1, включающий
взаимодействие соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (VIII), в присутствии кислотного и/или основного реагента с получением соединения, представленного формулой (VI);

где группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (VII), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (I) по п.1, R²⁰ представляет собой Н или ОН; группы, представленные R¹, R³, R⁴, R⁵ и W в соединении, представленном формулой (VI), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴, R⁵ и W в соединении, представленном формулой (I) по п.1, R²⁰ представляет собой Н или ОН; группа, представленная R¹⁶ в соединении, представленном формулой (VIII), является такой же, как группа, представленная R¹⁶ в формуле (V) по п.1, R²¹ и R²², каждый независимо, представляют собой Н или С_1-4алкил; и
взаимодействие соединения, представленного формулой (VI), где R²⁰ представляет собой ОН, с R⁸COOH, пептидной цепью, HOOC-Ar-R²⁷, соединением, представленным формулой (IX), соединением, представленным формулой (XV), или R⁸NCO с получением соединения, представленного формулой (I);

где R⁸ в R⁸COOH представляет собой C_1-6алкил; Ar представляет собой ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо; R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN и СООН, пептидная цепь имеет свободный карбоксил, N-конец имеет 0-2 одинаковые или разные C_1-6алкильные группы или имеет аминозащитную группу, где аминозащитная группа выбрана из группы, состоящей из Fmoc, Boc, CBZ, Tr и Alloc.

10. Применение соединения, представленного формулой (I), его соли или сольвата по любому из пп.1-8 при получении лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с аномальной пролиферацией клеток.

11. Применение по п.10, где заболеванием с аномальной пролиферацией клеток является опухоль или рак.

12. Применение по п.10, где заболевание с аномальной пролиферацией клеток выбрано из группы, состоящей из рака печени, рака желудка, рака молочной железы, рака легких, рака кишечника, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, цервикального рака, рака почек, меланомы, рака простаты, церебральной глиомы, различных раковых заболеваний крови, лимфомы и множественного рака костного мозга.

13. Применение по п.10, где соединение, представленное формулой 1, его соль или сольват изготовляют в виде препарата в форме инъекции.

14. Применение по п.13, где форма инъекции выбрана из группы, состоящей из порошкообразной инъекции, лиофилизированной порошкообразной инъекции, гидроинъекции, эмульсии и суспензии.

15. Способ получения соединения, представленного формулой (I) по п.1, включающий
взаимодействие соединения, представленного формулой (VII), или его соли с соединением, представленным формулой (IX), с получением соединения, представленного формулой (X);
получение соединения, представленного формулой (VI), из соединения, представленного формулой (X), в присутствии дегидратирующего агента;

где группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, и n в соединении, представленном формулой (IX), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, и n в формуле (III) по п.1; группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, и n в формуле (X), являются такими же, как группы, представленные R¹⁰, R¹¹, R¹², R¹³, и n в формуле (III) по п.1;
группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (X), являются такими же, как группы, представленные R¹, R³, R⁴ и W в соединении, представленном формулой (VII); R²⁰ представляет собой Н или ОН; и
взаимодействие соединения, представленного формулой (VI), где R²⁰ представляет собой ОН, с R⁸OOH, пептидной цепью, HOOC-Ar-R²⁷, соединением, представленным формулой (IX), соединением, представленным формулой (XV), или R⁸NCO с получением соединения, представленного формулой (I);

где R⁸ в R⁸OOH представляет собой С_1-6алкил; Ar представляет собой ароматическое кольцо или ароматическое гетероциклическое кольцо; R²⁷ представляет собой 0-5 одинаковых или разных групп, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, NO₂, CN и СООН, пептидная цепь имеет свободный карбоксил, N-конец имеет 0-2 одинаковые или разные C_1-6алкильные группы или имеет аминозащитную группу, где аминозащитная группа выбрана из группы, состоящей из Fmoc, Boc, CBZ, Tr и Alloc.