ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРРОЛО[2,3-d]ПИРИМИДИНА Российский патент 2013 года по МПК C07D487/04 A61K31/519 A61P37/00 

Область техники

Описаны N-метил(4-(метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)циклогексил)метансульфонамид, его аналоги, их применение в качестве ингибиторов янус-киназы (JAK), фармацевтические композиции, содержащие эти соединения, и способы получения этих соединений.

Уровень техники

Протеинкиназы, которые являются семействами ферментов, которые катализируют фосфорилирование определенных остатков в белках, в широком смысле классифицированы как тирозинкиназа и серин/треонинкиназа. Несвойственная активность киназы, являясь результатом мутации, чрезмерной экспрессии или несвойственной регуляции, дисрегуляции или дерегуляции, также как сверх- или недопроизводство факторов роста или цитокинов было вовлечено во многие заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, рак, сердечно-сосудистые заболевания, аллергии, астмы и другие респираторные заболевания, аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, заболевания костей, метаболические расстройства и неврологические и нейродегенеративные расстройства, такие как болезнь Альцгеймера. Несвойственная активность киназы вызывает множество биологических клеточных реакций, касающихся роста клеток, дифференцирования клеток, выживания, апоптоза, митогенеза, управления циклом клетки и подвижностью клеток, вовлеченных в вышеупомянутые и близкие заболевания.

Таким образом, протеинкиназы появились как важный класс ферментов в качестве цели для терапевтического вмешательства. В частности, семейство JAK клеточных протеинтирозинкиназ (JAK-1, JAK-2, JAK-3 и Tyk-2) играет центральную роль в передаче сигналов цитокина (Kisseleva et al., Gene, 2002, 285, 1; Yamaoka et al., Genome Biology, 2004, 5, 253). После связывания с их рецепторами цитокины активируют JAK, которые затем фосфорилируют рецептор цитокина, тем самым создавая сайты установки сигнальных молекул, особенно элементов семейства преобразователя сигнала и активатора транскрипции (STAT), которые, в конечном счете, приводят к экспрессии гена. Многочисленные цитокины, как известно, активируют семейство JAK.

Соответственно, остается потребность в альтернативных соединениях, которые эффективно ингибируют ферменты JAK, включая JAK-1, JAK-2, JAK-3 и/или Tyk-2.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение предоставляет соединение формулы I:

или их фармацевтически приемлемые соли, в которой R¹ представляет собой C_1-4 алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой.

Конкретно, соединение формулы I, в которой R¹ представляет собой метил.

Конкретно, соединение формулы I, в которой R¹ представляет собой этил или циклобутил.

В другом аспекте настоящее изобретение также предоставляет:

- фармацевтические композиции, которые включают фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы I,

- способы контроля или лечения нарушения или состояния, выбранного из следующего: отторжение трансплантированного органа, волчанка, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, псориаз, рак, остеоартрит и диабеты, введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

- способы контроля или лечения нарушения или состояния, выбранного из следующего: диабеты, рак, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, сухость глаз, болезнь Альцгеймера, лейкемия и другие показания, где иммуносупрессия или иммуномодуляция были бы желательны, введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

- способы контроля или лечения нарушения или состояния, выбранного из следующего: аллергическая реакция, включая аллергический дерматит, экзема, атопический дерматит, зуд и другие состояния зуда и воспалительные заболевания, такие как заболевание кишечника у млекопитающих, введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

- способы контроля или лечения нарушения или состояния, выбранного из следующего: астма и другие обструктивные заболевания дыхательных путей, включая хроническую или запущенную астму, позднюю астму, гиперчувствительность дыхательных путей, бронхит, бронхиальную астму, аллергическую астму, эндогенную астму, экзогенную астму, пылевую астму, рецидивную обструкцию дыхательных путей и хроническую обструктивную болезнь легких, введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

- способы ингибирования протеинтирозинкиназ или JAK-1, JAK-2, JAK-3 и/или Tyk-2 введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

- способы ингибирования протеинтирозинкиназ или JAK-1, JAK-2, JAK-3 и/или Tyk-2 введением млекопитающему, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, и

- способы получения соединений по настоящему изобретению.

Краткое описание фигур

На фиг.1 представлена порошковая рентгеновская дифрактограмма кислотно-аддитивной соли N-метил 1-{транс-(4-(метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)циклогексил}метансульфонамид с малеиновой кислотой (Форма А).

На фиг.2 показан день 27 VAS (ВАШ, визуальная аналоговая шкала) оценки соединения Примера 1b у собак с аллергией на блох в анализе снижения блошиного зуда и дерматита.

На фиг.3 показана продолжительность зуда, в секундах, за 4-часовую регистрацию для соединения Примера 1b у собак с аллергией на блох в анализе снижения блошиного зуда и дерматита.

Подробное описание

Относительно вышеупомянутого соединения по всей заявке и формуле изобретения следующие термины имеют значения, определенные ниже.

Термин "млекопитающее" относится к человеку или животным, включая домашний скот и животных-компаньонов. Фраза "животное-компаньон" или "животные-компаньоны" относится к животным, содержащимся как домашние любимцы. Примеры животных-компаньонов включают кошек, собак и лошадей. Термин "домашний скот" относится к животным, выращиваемым или разводимым в сельскохозяйственных условиях, чтобы производить продукты, такие как пища или волокно, или в качестве рабочей силы. В некоторых вариантах осуществления домашний скот является пригодным для потребления млекопитающими, например людьми. Примеры домашнего скота включают млекопитающих, таких как крупный рогатый скот, козы, лошади, свиньи, овцы, включая ягнят, и кролики, так же как птиц, таких как цыплята, утки и индюки.

Термин "контролирование" или "лечение" заболевания включает (1) предотвращение заболевания, т.е. предотвращение развития клинических симптомов или признаков заболевания у млекопитающего, которое может быть подвергнуто воздействию заболевания или предрасположено к заболеванию, но еще не испытывает или не показывает симптомы/признаки заболевания; (2) замедление заболевания, т.е. задержку или снижение развития заболевания или его клинических симптомов/признаков; или (3) ослабление заболевания, т.е. вызывание регрессии заболевания или его клинических симптомов/признаков.

Термин "терапевтически эффективное количество" означает количество соединения, которое, когда вводится млекопитающему для лечения заболевания, является достаточным, чтобы осуществить такое лечение заболевания. "Терапевтически эффективное количество" будет изменяться в зависимости от соединения, заболевания и его серьезности, и возраста, веса, и т.д. млекопитающего, подлежащего лечению.

Термин "приблизительно", если используется для определения пика в порошковой дифрактограмме рентгеновских лучей, определяют как установленное 2-тета значение ±0,2 градуса 2-тета. Любое определение того, является ли кристаллическая форма формой А полиморфной модификации и охватывается ли формулой изобретения, должно интерпретироваться в свете вариабельности в этом тесте.

"Фармацевтически приемлемый" означает пригодный для использования млекопитающими, животными-компаньонами или домашним скотом.

Содержание атомов углерода различных углеводородсодержащих фрагментов указывают префиксами, определяющими минимальное и максимальное число атомов углерода фрагмента, т.е. префикс C_i-j указывает фрагмент с числом атомов углерода от "i" до "j" включительно. Таким образом, например, C_1-4 алкил относится к алкилу с одним-четырьмя атомами углерода, включительно.

Термин "алкил" относится к нормальным, разветвленным и циклическим насыщенным одновалентным углеводородным группам, но ссылка на индивидуальный радикал, такой как "пропил", включает только радикал с нормальной цепью, причем изомер с разветвленной цепью, такой как "изопропил" или циклический изомер, такой как циклопропилметил или циклопентил, упоминаются конкретно.

Соединения, которые имеют одинаковую молекулярную формулу, но отличаются природой или последовательностью связи их атомов или расположением атомов в пространстве, называют "изомерами". Изомеры, которые отличаются расположением атомов в пространстве называют "стереоизомерами". Специалист в области техники заметит, что соединения формулы I могут существовать как ахиральные цис- и транс-диастереомеры. Конкретно, настоящее изобретение предоставляет соединение формулы IA, которое имеет химическое наименование N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамид,

или его фармацевтически приемлемую соль.

Все включенные в описание соединения являются изомерами (например, цис-, транс- или диастереомерами) соединений, описанных в настоящем документе, а также любыми их смесями. Все эти формы, включая энантиомеры, диастереомеры, цис, транс, син, анти, сольваты (включая гидраты), таутомеры и их смеси включены в описанные соединения.

Стереоизомерные смеси, например смеси диастереомеров, могут быть разделены на соответствующие изомеры известным способом посредством соответствующих методов разделения. Диастереомерные смеси, например, могут быть разделены на индивидуальные диастереомеры посредством фракционной кристаллизации, хроматографии, распределения растворителя и подобных процедур. Это разделение может иметь место или на уровне одного из исходных соединений, или в соединении формулы I непосредственно. Энантиомеры могут быть разделены посредством образования диастереомерных солей, например образованием соли с энантиомерно-чистой хиральной кислотой, или посредством хроматографии, например ВЭЖХ, используя хроматографические субстраты с хиральными лигандами.

Способы введения

В терапевтическом использовании для лечения расстройств млекопитающих (т.е. человека и животных) соединение по настоящему изобретению или его фармацевтические составы могут вводиться перорально, парентерально, местно, ректально, трансмукозально или интестинально. Парентеральные введения включают непрямые инъекции, чтобы генерировать системный эффект, или прямые инъекции в пораженную область. Местные введения включают лечение кожи или органов, легко доступных при местном введении, например глаза или уши. Это введение также включает трансдермальное введение, чтобы генерировать системный эффект. Ректальное введение включает форму свеч. Предочтительными путями введения являются пероральный и парентеральный.

Фармацевтические соли

Соединение формулы I может использоваться в чистой форме или как соль. В случаях, где желательно образование устойчивой соли с нетоксичной кислотой или основанием, введение соединения как фармацевтически приемлемой соли может быть адекватным. Фармацевтически приемлемые соли соеднений формулы I включают ацетат, аскорбат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, борат, камфорсульфонат, цитрат, этан-1,2-дисульфонат, кетоглутарат, этансульфонат, формиат, фумарат, глуцептат, глюконат, глюкуронат, глицерофосфат, гексафторфосфат, 2-(4-гидроксибензоил)бензоат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидройодид/йодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малат, малеат, малонат, мезилат, метилсульфат, нафтилат, нафталин-2-сульфонат, никотинат, нитрат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, сахарат, стеарат, сукцинат, тартрат, тозилат и трифторацетат.

Композиция/Препарат

Фармацевтические препараты по настоящему изобретению могут быть произведены способами, известными в области техники, например, посредством обычного смешивания, растворения, гранулирования, создания драже, отмучивания, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания, лиофилизации или сушки распылением.

Фармацевтические препараты для использования в соответствии с настоящим изобретением могут быть составлены обычным путем, используя один или более фармацевтически приемлемых носителей, включая инертные наполнители и вспомогательные средства, которые облегчают переработку активного соединения в препараты, которые могут использоваться фармацевтически. Соответствующий состав препарата зависит от выбранного пути введения. Фармацевтически приемлемые инертные наполнители и носители известны специалистам в области техники и, таким образом, включены в настоящее изобретение. Такие инертные наполнители и носители описаны, например, в "Remingtons Pharmaceutical Sciences", Mack Pub. Co., New Jersey (1991).

Препараты по изобретению могут быть разработаны как препараты короткого действия, быстрого выделения, длительного действия и длительного выделения. Таким образом, фармацевтические препараты могут также быть составлены для контролируемого выделения или для замедленного выделения.

Дозировка

Фармацевтические препараты, пригодные для использования в настоящем изобретении, включают составы, в которых активные ингредиенты содержатся в количестве, достаточном, чтобы достичь намеченной цели, т.е. контроля или лечения нарушений или заболеваний. Более конкретно, терапевтически эффективное количество означает количество соединения, эффективного, чтобы предотвратить, облегчить или улучшить симптомы/признаки заболевания или продлить жизнь субъекта лечения.

Количество активного компонента, который является соединением настоящего изобретения, в фармацевтическом составе и его стандартной лекарственной форме, может изменяться или регулироваться широко в зависимости от способа введения, потенциала определенного соединения и желательной концентрации. Определение терапевтически эффективного количества также находится в области компетенции специалиста в области техники. Обычно количество активного компонента будет изменяться от 0,01 до 99% вес. композиции.

Обычно терапевтически эффективное количество лекарственной формы активного компонента будет находиться в интервале от приблизительно 0,01 до приблизительно 100 мг/кг веса тела/день, предпочтительно от приблизительно 0,1 до приблизительно 10 мг/кг веса тела/день, более предпочтительно от приблизительно 0,3 до 3 мг/кг веса тела/день, еще более предпочтительно от приблизительно 0,3 до 1,5 мг/кг веса тела/день. Следует понимать, что лекарственные формы могут изменяться в зависимости от потребностей каждого субъекта и серьезности нарушений или заболеваний, подлежащих лечению.

Желательная доза может обычно быть представлена как единичная доза или как разделенные дозы, вводимые через одинаковые интервалы, например, как две, три, четыре или больше поддоз в сутки. Сама поддоза может быть дополнительно разделена, например, на многие дискретные, свободно разделенные введения; такие как множественные ингаляции из инсуффлятора или применение в качестве глазных капель.

Кроме того, следует понимать, что начальная вводимая дозировка может быть увеличена по сравнению с упомянутым верхним уровнем, чтобы быстро достичь желательной плазменной концентрации. С другой стороны, начальная дозировка может быть меньше, чем оптимальная, и ежедневная дозировка может быть постепенно увеличена в течение курса лечения в зависимости от конкретной ситуации. Если желательно, суточная доза может также быть разделена на много доз для введения, например, два-четыре раза в сутки.

Медицинское и ветеринарное применение

Соединения по настоящему изобретению являются ингибиторами янус-киназы (JAK-i) с эффективностью против януса-киназы 1 (JAK-1), янус-киназы 2 (JAK-2) и янус-киназы 3 (JAK-3). Соответственно, они полезны как терапевтические средства при отторжении трансплантатов органов, волчанке, рассеянном склерозе, ревматоидном артрите, псориазе, диабете типа 1 и осложнениях диабета, раке, астме, аллергическом дерматите, аутоиммунных нарушениях щитовидной железы, неспецифическом язвенном колите, болезни Крона, болезни Альцгеймера, лейкемии, остеоартрите, контроле зуда, хроническом респираторном заболевании и других признаках, где иммуносупрессия/иммуномодуляция были бы желательны.

Кроме того, есть реальные потребности в безопасных и эффективных средствах контроля атопического дерматита у животных. На рынке препаратов для лечения атопического дерматита у животных в настоящее время доминируют кортикостероиды, которые вызывают недомогание и нежелательные побочные эффекты у животных, конкретно, у животных-компаньонов, таких как собаки. Антигистамины также используются, но слабо эффективны. Препарат для собак, циклоспорин (ATOPICA™), в настоящее время продается для лечения атопического дерматита, но дорог и отличается медленным проявлением эффективности. Кроме того, имеются проблемы желудочно-кишечной переносимости ATOPICA™. Составы по настоящему изобретению являются ингибиторами JAK с эффективностью против JAK-1 и JAK-3. Эти составы будут альтернативой использования стероида и обеспечат разрешение хронического зуда и воспаления, которые продолжали бы сохраняться при аллергическом дерматите или медленно регрессировать вслед за удалением аллергена или возбудителя, такого как блохи, в аллергическом дерматите, вызываемом блохами.

Соединения по настоящему изобретению могут вводиться в фармацевтически приемлемой форме либо как таковые, либо в комбинации с одним или более дополнительными средствами, которые модулируют иммунную систему млекопитающего, или с противовоспалительными средствами. Эти средства могут включать, но не ограничиваются ими, циклоспорин А (например, Sandimmune.RTM. или Neoral.RTM.), рапамицин, FK-506 (такролимус), лефлуномид, дезоксиспергуалин, микофенолат (например, Cellcept,RTM.), азатиоприн (например, Imuran.RTM.), даклизумаб (например, Zenapax.RTM.), OKT3 (например, Orthocolone.RTM.), AtGam, аспирин, акктаминофен, ибупрофен, напроксен, пироксикам и противовоспалительные стероиды (например, преднизолон или дексаметазон). Эти средства могут применяться как часть тех же самых или отдельных лекарственных форм, через те же самые или различные пути введения и по тем же самым или различным планам введения согласно стандартной фармацевтической практике, известной специалисту в данной области.

В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает способы лечения или предотвращения заболевания, состояния или нарушения, связанных с JAK субъекта, такого как человек или млекопитающее, не являющееся человеком, включая введение субъекту эффективного количества одного или более соединений, описанных в настоящем документе. JAK-ассоциированное заболевание, состояние или нарушение может быть связано с JAK-1, JAK-2, JAK-3 и/или Tyk-2. Подходящими субъектами, которые могут быть вылечены, являются домашние или дикие животные, животные-компаньоны, такие как собаки, кошки, лошади и т.п.; домашний скот, включая коров и других жвачных животных, свиней, домашнюю птицу, кроликов и т.п.; приматы, например обезьяны, такие как макаки-резус и обезьяны cynomolgus (также известные как крабоеды или длиннохвостые), игрунки, тамарины, шимпанзе, макаки и т.п.; и грызуны, такие как крысы, мыши, песчанки, гвинейские свинки и т.п. В одном варианте осуществления соединение вводят в фармацевтически приемлемой форме, необязательно в фармацевтически приемлемом носителе.

Передача сигналов JAK/STAT вовлечена в посредничество многих патологических иммунных реакций, таких как аллергии, астма, аутоиммунные заболевания, такие как отторжение трансплантата (аллотрансплантата), ревматоидный артрит, амиотрофический боковой склероз и рассеянный склероз, также как в твердые и гематологические злокачественные состояния, такие как лейкемии и лимфомы. Обзор фармацевтического вмешательства пути JAK/STAT см. Frank, (1999), Mol. Med., 5:432:456 и Seidel et al., (2000), Oncogene, 19:2645-2656.

JAK-3, в частности, была вовлечена во множество биологических процессов. Как показано, например, пролиферация и выживание мышиных тучных клеток, вызванные IL-4 и IL-9, зависят от JAK-3 и передачи сигналов гамма-цепи. Suzuki et al., (2000), Blood, 96:2172-2180. JAK-3 также играет важную роль в реакциях дегрануляции тучных клеток, опосредованных рецептором IgE (Malaviya et al., (1999), Biochem. Biophys. Res. Commun., 257:807-813), и, как показано, ингибирование киназы JAK-3 предотвращает аллергические реакции типа I, включая анафилаксию (Malaviya et al., (1999), J. Biol. Chem., 274:27028-27038). Также показано, что ингибирование JAK-3 приводит к иммунной супрессии отторжения аллотрансплантата (Kirken, (2001), Transpl. Proc., 33:3268-3270). Киназы JAK-3 были также вовлечены в механизм, включаемый в ранние и поздние стадии ревматоидного артрита (Muller-Ladner et al., (2000), J. Immunal., 164:3894-3901); семейный амиотрофический боковой склероз (Trieu et al., (2000), Biochem. Biophys. Res. Commun. 267:22-25); лейкемию (Sudbeck et al., (1999), Clin. Cancer Res., 5:1569-1582); грибовидный микоз, форму Т-лимфоцитарной лимфомы (Nielsen et al., (1997), Prac. Natl. Acad. Sci. USA, 94:6764-6769); и патологический рост клеток (Yu et al., (1997), J. Immunol., 159:5206-5210; Catlett-Falcone et al., (1999), Immunity, 10:105-115).

JAK киназы, включая JAK-3, в изобилии экспрессируются в первичных лейкемических клетках детей с острой лимфобластной лейкемией, наиболее стандартной формой детского рака, и изучения коррелировали активацию STAT в определенных клетках с сигналами, регулирующими апоптоз (Demoulin et al., (1996), Mol. Cell. Biol., 16:4710-6; Jurlander et al., (1997), Blood, 89:4146-52; Kaneko et al., (1997), Clin. Exp. Immun., 109:185-193; and Nakamura et al., (1996), J. Biol. Chem., 271: 19483-8). Они, как также известно, важны для дифференцирования лимфоцитов, функционирования и выживания. JAK-3, в частности, играет существенную роль в функционировании лимфоцитов, макрофагов и тучных клеток. Учитывая значение этой JAK киназы, соединения, которые регулируют пути JAK, включая селективные для JAK-3, могут быть полезными для лечения болезней или состояний, где включается функционирование лимфоцитов, макрофагов или тучных клеток (Kudlacz et al., (2004) Am. J. Transplant., 4:51-57; Changelian (2003) Science, 302:875-878).

Состояния, в которых нацеливание пути JAK или регулирование JAK киназ, особенно JAK-3, как думают, должны являться терапевтически полезными, включают артрит, астму, аутоиммунные заболевания, рак или опухоли, диабет, определенные заболевания, нарушения или состояния глаз, воспаление, кишечные воспаления, аллергии или состояния, нейродегенеративные заболевания, псориаз, отторжение трансплантата и вирусную инфекцию. Состояния, которые могут быть выгодными для ингибирования JAK-3, подробно обсуждаются ниже.

Соответственно, соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли и фармацевтические препараты могут использоваться, чтобы лечить множество состояний или заболеваний, таких как

артрит, включая ревматоидный артрит, подростковый артрит и псориатический артрит;

астма и другие обструктивные заболевания дыхательных путей, включая хроническую или запущенную астму, позднюю астму, гиперчувствительность дыхательных путей, бронхит, бронхиальную астму, аллергическую астму, эндогенную астму, экзогенную астму, пылевую астму, рецидивную обструкцию дыхательных путей и хроническую обструктивную болезнь легких;

аутоиммунные заболевания или нарушения, включая заболевания, обозначаемые как аутоиммунные заболевания одноклеточного или одноорганного типа, например тиреоидит Хашимото, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный атрофический гастрит фатальной анемии, аутоиммунный энцефаломиелит, аутоиммунный орхит, болезнь Гудпасчура, аутоиммунная тромбоцитопения, симпатическая офтальмия, тяжелая псевдопаралитическая миастения, болезнь Грейвса, первичный желчный цирроз, хронический агрессивный гепатит, неспецифический язвенный колит и мембранная гломерулопатия, заболевания, обозначаемые как включащие системное аутоиммунное нарушение, например системная красная волчанка, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, синдром Рейтера, полимиозит-дерматомиозит, системный склероз, узелковый полиартериит, рассеянный склероз и буллезный пемфигоид и дополнительные аутоиммунные заболевания, которые могут быть на основе O-клеток (гуморальные) или Т-лимфоцитов, включая синдром Когана, анкилозирующий спондилит, гранулематоз Вегенера, аутоиммунное облысение, ювенильный исходный диабет или диабет типа I и тиреоидит;

- рак или опухоли, включая рак пищевого/желудочно-кишечного тракта, рак толстой кишки, рак печени, рак кожи, включая опухоль тучной клетки и плоскоклеточную карциному, рак молочной железы и рак груди, рак яичников, рак простаты, лимфома, лейкемия, включая острую миелогенную лейкемию и хроническую миелогенную лейкемию, почечный рак, рак легкого, рак мышцы, рак кости, рак мочевого пузыря, рак мозга, меланому, включая ротовую и метастатическую меланому, саркому Капоши, миеломы, включая множественную миелому, миелопролиферативные нарушения, пролиферативную диабетическую ретинопатию и ангиогенные сопутствующие заболевания, включая твердые опухоли;

- диабет, включая диабет типа I и осложнения при диабете;

- заболевания глаз, нарушения или состояния, включая аутоиммунные заболевания глаз, кератоконъюнктивит, весенний конъюнктивит, увеит, включая увеит, связанный с болезнью Бехчета, и факогенный увеит, кератит, герпетический кератит, конический кератит, дистрофия эпителия роговицы, помутнение роговицы белого цвета, пемфигоид конъюнктивы, разъедающая язва роговицы (Мурена), склерит, офтальмопатия Граве, синдром Фогта-Коянаги-Харада, сухой кератоконъюнктивит (синдром сухого глаза), туберкулезно-аллергический кератит, иридоциклит, саркоидоз, эндокринная офтальмопатия, симпатический офтальмит, аллергический конъюнктивит и глазное образование новых сосудов;

- кишечные воспаления, аллергии или состояния, включая болезнь Крона и/или неспецифический язвенный колит, воспалительное заболевание кишечника, брюшнополостные заболевания, проктит, эозинофильный гастроэнтерит и мастоцитоз;

- нейродегенеративные заболевания, включая заболевания моторных нейронов, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз, болезнь Хантингтона, мозговую ишемию или нейродегенеративное заболевание, вызванное травматическим повреждением, ударом, глутаматной нейротоксичностью или гипоксией; ишемическое/реперфузионное повреждение при ударе, ишемия миокарда, почечная ишемия, сердечные приступы, кардиальная гипертрофия, атеросклероз и артериосклероз, гипоксия органов и агрегация тромбоцитов;

- кожные заболевания, состояния или нарушения, включая атопический дерматит, экзему, псориаз, склеродермию, зуд и другие состояния зуда;

- аллергические реакции, включая аллергический дерматит млекопитающих, включая аллергические заболевания лошадей, такие как сверхчувствительность к укусам, летняя экзема и чесотка лошадей;

- отторжение трансплантата, включая отторжение трансплантата панкреатического островка, отторжение трансплантата костного мозга, реакцию "трансплантат-против-хозяина", отторжение трансплантата клеток и органа, такого как костный мозг, хрящ, роговица, сердце, межпозвоночный диск, панкреатический островок, почка, конечность, печень, легкое, мышца, миобласт, нерв, поджелудочная железа, кожа, тонкая кишка или трахея и ксенотрансплантация; и

- другой вариант осуществления обеспечивает способ ингибирования фермента JAK, включая JAK-1, JAK-2, JAK-3 и/или Tyk-2, который включает контактирование фермента JAK или с нетерапевтическим количеством или с терапевтически эффективным количеством одного или более из настоящих соединений. Такие способы могут иметь место in vivo или in vitro. In vitro контакт может включать скрининговый анализ, чтобы определить эффективность одного или большего количества соединений против выбранного фермента при различных количествах или концентрациях. In vivo контакт с терапевтически эффективным количеством одного или большего количества соединений может включать лечение описанного заболевания, нарушения или состояния или профилактики отторжения трансплантата органа у животного, в котором имеется контакт. Влияние одного или большего количества соединений на фермент JAK и/или животное-хозяин может также быть определено или измерено. Способы определения активности JAK включают способы, описанные в Примерах, также как способы, раскрытые в WO 99/65908, WO 99/65909, WO 01/42246, WO 02/00661, WO 02/096909, WO 2004/046112 или WO 2007/012953.

Следующие схемы реакции поясняют общие методики синтеза соединений по настоящему изобретению. Все исходные материалы получают по методикам, описанным в этих схемах, или по методикам, известным специалисту в области техники.

Схема I

Для специалистов в данной области техники очевидно, что чувствительные функциональные группы (Pg или Pg1), возможно, должны защищаться и лишаться защиты во время синтеза соединений по изобретению. Это может быть достигнуто обычными методами, например, как описано в Т.W. Greene and P.G.M. Wuts, John Wiley & Sons Inc. (1999) и приведенных там ссылках.

На Схеме I, 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин (a) может быть получен коммерчески. транс-4-(Метиламино)циклогексил]метанол (b) может быть получен из соответствующей карбоновой кислоты, транс-4-[(трет-бутоксикарбонил)амино]циклогексанкарбоновой кислоты, после обработки восстановителем, таким как алюмогидрид лития в апротонном, безводном растворителе, таком как тетрагидрофуран, при температурах 0-60°C в течение нескольких часов.

Как показано на Схеме I, соединение структуры (c) может быть синтезировано реакцией 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина (a) с транс-4-(метиламино)циклогексил]метанолом (b) в подходящем апротонном, полярном растворителе, таком как N,N-диметилформамид, водный диоксан или диметилсульфоксид, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин или карбонат калия, при повышенных температурах до 90°C в течение нескольких часов.

Соединение структуры (d) может быть синтезировано двухстадийным методом из соединения структуры (c). Например, соединение структуры (d) синтезируют, во-первых, используя бромирующие реагенты, такие как тионилбромид или фосфортрибромид, в полярном, апротонном растворителе, таком как метиленхлорид, с получением незащищенного циклогексилметилбромида, и, во-вторых, добавлением соответствующего реагента защиты, такого как тозилхлорид, чтобы получить защищенное соединение структуры (d).

Соединение структуры (e) может быть получено при использовании простых способов защиты из соединения структуры (c). Например, когда Pg и Pg1, оба, имеют значение тозил, они могут быть произведены одностадийной реакцией после обработки незащищенного соединения структуры (c) тозилхлоридом в присутствии полярного, апротонного растворителя, такого как метиленхлорид, катализатора, такого как DMAP, и слабого основания, такого как триэтиламин.

Соединение структуры (f) может быть синтезировано из соеднения структуры (e) S-алкилированием с использованием подходящего нуклеофила. Таким образом, соединения структуры (e), где защитная группа (Pg1) является соответствующей защитной группой для гидроксигруппы, такой как тозил или мезил, могут реагировать с тиоацетатом калия в полярном растворителе, таком как диметилсульфоксид или N-метилпирролидин при повышенных температурах до 75°C в течение времени до 2 часов, чтобы получить соединения структуры (f).

Соединение структуры (g) может быть синтезировано окислением из соединений формулы (f). Много условий окисления известны специалистам в области техники, например, условия, описанные в "Handbook of Reagents for Organic Synthesis - Oxidising and Reducing Agents", S.D. Burke and R.L. Danheiser, ed. Например, соединение структуры (f), необязательно смоченное водой, можно обработать муравьиной кислотой, с последующим медленным добавлением пероксида водорода при перемешивании при комнатной температуре в течение приблизительно 15 часов с получением соединения структуры (g). Альтернативно, может быть использован оксон в полярном растворителе, таком как уксусная кислота, если реакцию выполняют в присутствии ацетата калия, и получают калиевую соль соединения формулы (g).

Предусматривают, что соединение структуры (g) может быть синтезировано прямо из соединения структуры (e) после обработки соответствующим серным нуклеофилом, таким как сульфит натрия в полярном растворителе. Точно так же соединение структуры (g) могло быть синтезировано из соединения структуры (d) после нуклеофильного замещения сульфитом натрия.

Обработка сульфокислот формулы (g) хлорирующим способом, таким как тионилхлорид, в апротонном полярном растворителе, таком как метиленхлорид с полярным сорастворителем, таким как N,N-диметилформамид, при кипячении с обратным холодильником дает хлорированные соединения. Хлорированное соединение затем реагирует в апротонном безводном растворителе, таком как тетрагидрофуран, с соответствующими аминами в чистой газообразной форме или растворенный в апротонных, безводных растворителях, таких как тетрагидрофуран, при комнатной температуре, чтобы получить соединение структуры (h). Необязательно, безводное слабое основание, такое как триэтиламин, может использоваться, чтобы ликвидировать соляную кислоту, генерируемую в реакции.

Соединения формулы I по настоящему изобретению могут быть получены из соединений формулы (h), в которой Pg является подходящей защитной группой, в соответствии с методиками удаления защиты, известными специалисту в данной области техники. Например, когда защитная группа (Pg) имеет значение тозил, соответствующие условия удаления защиты включают реакцию с основанием, таким как гидроксид лития или гидроксид калия, в протонном растворителе, таком как метанол или изопропанол, и необязательно, смешанным с сорастворителем, таким как тетрагидрофуран и вода, при комнатной температуре в течение нескольких часов, чтобы получить незащищенный амин формулы I.

Соли соединений формулы I могут быть получены реакцией свободного основания соединений формулы I с подходящей кислотой, такой как малеиновая кислота, в присутствии протонного растворителя, такого как бутанол, и необязательно сорастворителя, такого как вода.

Альтернативно, соединения по этому изобретению могут быть получены в соответствии со Схемой II.

Схема II

На схеме II 4-метил-7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H- пирроло[2,3-d]пиримидин (j) может быть получен из коммерчески доступного соединения (a) с использованием реагента защиты, такого как тозилхлорид с помощью методик, хорошо известных в данной области техники. Транс-4-(метиламино)циклогексил]метанол (b) может быть получен из соответствующей карбоновой кислоты, транс-4-[(трет-бутоксикарбонил)амино]циклогексанкарбоновой кислоты, после обработки восстановителем, таким как Vitride в безводном растворителе, таком как толуол, при температурах 0-110°C в течение нескольких часов.

Как показано на схеме II, соединение структуры (k) может быть синтезировано с помощью реакции 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина (j) с транс-4-(метиламино)циклогексил]метанолом (b) в подходящем растворителе, таком как ацетон, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, с каталитическим количеством йодида калия при повышенных температурах до 60°C в течение нескольких часов.

Соединение структуры (k) может быть синтезировано путем добавления подходящего реагента мезилирования, такого как мезилхлорид, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин или диэтилизопропиламин, в подходящем растворителе, таком как ацетон, при повышенных температурах до 6O°C, чтобы получить метансульфонильное соединение структуры (k).

Соединение структуры (l) может быть получено простым процессом S-алкилирования из соединения структуры (k), используя подходящий нуклеофил. Такие соединения структуры (k) могут реагировать с сульфитом натрия в растворителе, таком как изопропиловый спирт или вода, или толуол, при повышенных температурах до 90°C в течение 4 часов, чтобы получить соединения структуры (l).

Обработка сульфоновых кислот формулы (I) хлорирующим агентом, таким как тионилхлорид, в апротонном полярном растворителе, таком как ТГФ или метиленхлорид, с полярным сорастворителем, таким как N,N-диметилформамид, при температурах 0-40°C дает хлорированные соединения. Хлорированные соединения затем реагируют в апротонном безводном растворителе, таком как тетрагидрофуран, с соответствующими аминами, такими как метиламин, циклобутиламин или 2-гидроксиазетидин, предпочтительно в чистой газообразной форме или будучи растворенными в апротонных, безводных растворителях, таких как тетрагидрофуран, при комнатной температуре, чтобы получить соединение структуры (h). Необязательно, безводное, слабое основание, такое как триэтиламин, может использоваться, чтобы ликвидировать соляную кислоту, генерируемую в реакции.

ПРИМЕРЫ

Получение 1 N-метил-1-[транс-4-(метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метансульфонамид

Способ (a). В раствор соединения Получения 2 (308,0 г веса во влажном состоянии, 214,5 г сухого веса, 0,41 моль) в тетрагидрофуране (1,0 л) добавляют метиламин (2M в тетрагидрофуране, 687 мл) за 1 час. После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин добавляют дополнительное количество метиламина (2M в тетрагидрофуране, 53 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Объем смеси уменьшают до 600 мл перегонкой в вакууме и добавляют тетрагидрофуран (300 мл) перед повторным уменьшением объема смеси до приблизительно 750 мл. В нагретую до 45°C смесь добавляют 2-пропанол (247 мл) и воду (693 мл). После охлаждения до комнатной температуры твердый материал собирают фильтрованием, промывают водой (2×250 мл) и сушат в вакууме при 65°C с получением соединения, указанного в заголовке (180,4 г).

¹H-ЯМР (d₆-ДМСО): 1,17-1,32 (2H), 1,57-1,73 (4H), 1,76-1,92 (1H), 1,93-2,08 (2H), 2,30-2,39 (3H), 2,53-2,62 (3H), 2,87-2,98 (2H), 3,07-3,17 (3H), 4,53-4,75 (1H), 6,81-6,94 (1H), 7,38-7,47 (2H), 7,56-7,65 (1H), 7,92-8,02 (2H), 8,15-8,27 (1H).

Способ (b). В раствор соединения Получения 2 (165 г, 0,34 моль) в ТГФ (1,65 л) и N,N-диметилформамиде (5,0 мл) при 0-5°C добавляют тионилхлорид (125 мл, 17 моль) за 25 мин. Реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут при 0-5°C, затем медленно нагревают до 40°C в течение 8 часов. После охлаждения до комнатной температуры растворитель выпаривают при пониженном давлении и приводят в азеотропное состояние, используя ТГФ для удаления тионилхлорида. В полученный сульфонилхлорид добавляют свежий ТГФ (1,65 л) и смесь охлаждают до 0°C. В течение 30 минут продувают сухой газообразный N-метиламин и реакционную смесь перемешивают еще в течение 4 часов при комнатной температуре. Растворитель выпаривают до половины его объема (800 мл) и добавляют гептан (1,5 л). Продукт осаждают, фильтруют и промывают водой (1 л) с получением соединения, указанного в заголовке (80 г).

¹H-ЯМР (d₆-ДМСО): 1,17-1,32 (2H), 1,57-1,73 (4H), 1,76-1,92 (1H), 1,93-2,08 (2H), 2,30-2,39 (3H), 2,53-2,62 (3H), 2,87-2,98 (2H), 3,07-3,17 (3H), 4,53-4,75 (1H), 6,81-6,94 (1H), 7,38-7,47 (2H), 7,56-7,65 (1H), 7,92-8,02 (2H), 8,15-8,27 (1H).

Получение 2 [транс-4-(метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метансульфонилхлорид

В раствор соединения Получения 3 (210,0 г, 0,42 моль) в дихлорметане (1,2 л) и N,N-диметилформамиде (4,1 мл) добавляют тионилхлорид (151,0 мл, 2,1 моль) за 25 мин. Реакционную смесь кипятят в колбе с обратным холодильником в течение 18 часов, затем объем смеси уменьшают до 800 мл перегонкой в вакууме. В нагретую приблизительно до 30°C смесь добавляют этилацетат (1,1 л) за 1 час, затем при комнатной температуре добавляют гептан (546 мл) за 20 мин. Смесь охлаждают до 0°C и перемешивают в течение 1 часа и полученный осадок собирают фильтрованием в атмосфере азота. Твердое вещество промывают гептаном (2×125 мл) с получением соединения, указанного в заголовке (308,0 г влажного веса), которое хранят в атмосфере азота и используют сразу.

Получение 3 [транс-4-(метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метансульфоновая кислота

Способ (a). В смесь соединения Получения 4 (100,0 г веса во влажном состоянии, 23,5 г сухого веса, 47,8 ммоль) и муравьиной кислоты (82,0 г, 68,0 мл, 1,8 моль) добавляют пероксид водорода (35% вес. в воде, 21,0 мл, 0,26 моль) за 10 мин. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 часов и затем гасят добавлением водного раствора метабисульфата или метабисульфита натрия (33% вес., 35 мл). В эту смесь добавляют воду (5 мл), 2-пропанол (50 мл) и водный раствор гидроксида натрия (33% вес., 161 мл), и перемешивают суспензию при комнатной температуре в течение 1 часа. Твердый материал собирают фильтрацией, промывают водой (100 мл) и сушат в вакууме при 60°C с получением соединения, указанного в заголовке (26,0 г).

¹H-ЯМР (d₆-ДМСО): 0,98-1,18 (2H), 1,55-1,76 (5H), 1,99-2,13 (2H), 2,29-2,39 (5H), 3,05-3,15 (3H), 4,47-4,76 (1H), 6,77-6,92 (1H), 7,38-7,48 (2H), 7,54-7,62 (1H), 7,91-8,02 (2H), 8,17-8,25 (1H).

Способ (b). В раствор соединения Получения 3 в ИПС-вода (по 585 мл каждый, 1:1 об./об.) добавляют сульфат натрия, и смесь нагревают до 80-90°C в течение 24 часов. После того, как смесь остывает до комнатной температуры, растворитель выпаривают до 50%, и доводят pH реакционной смеси до 3-4 путем добавления уксусной кислоты. Добавляют толуол (1 л) и выпаривают смесь до 80%. Еще раз добавляют толуол (1 л), и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4 часов. Толуол декантируют и после сушки в вакууме получают соединение, указанное в заголовке (168 г).

¹H-ЯМР (d₆-ДМСО): 0,98-1,18 (2H), 1,55-1,76 (5H), 1,99-2,13 (2H), 2,29-2,39 (5H), 3,05-3,15 (3H), 4,47-4,76 (1H), 6,77-6,92 (1H), 7,38-7,48 (2H), 7,54-7,62 (1H), 7,91-8,02 (2H), 8,17-8,25 (1H).

Получение 4 S-{[транс-4-(метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метил}этантиоат

В раствор тиоацетата калия (11,4 г, 99,4 ммоль) в диметилсульфоксиде (30 мл) добавляют соединение синтеза 5 (50,0 г, 87,9 ммоль) в диметилсульфоксиде (130 мл). Реакционную смесь нагревают при 55°C в течение 3 часов, охлаждают до комнатной температуры и гасят добавлением водного раствора гидрокарбоната натрия (0,1M, 640 мл). Смесь охлаждают до 13°C и образующийся осадок собирают фильтрованием и промывают водой (250 мл) с получением соединения, указанного в заголовке (204,0 г веса во влажном состоянии).

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,06-1,23 (2H), 1,39-1,51 (1H), 1,51-1,70 (4H), 1,74-1,88 (2H), 2,30-2,40 (6H), 2,73-2,84 (2H), 3,06-3,14 (3H), 4,44-4,76 (1H), 6,76-6,94 (1H), 7,36-7,49 (2H), 7,56-7,62 (1H), 7,90-8,02 (2H), 8,17-8,26 (1H).

Получение 5 [транс-4-(Метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метил} 4-метилбензолсульфонат

К раствору соединения Получения 6 (42,0 г, 0,16 моль) в дихлорметане (1 л) добавляют триэтиламин (68,3 г, 0,68 моль) и 4-диметиламинопиридин (1,0 г, 8,2 ммоль) и затем п-толуолсульфонилхлорид (62 г, 0,33 моль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов перед добавлением добавочного количества п-толуолсульфонилхлорида (45,5 г, 0,24 моль). После перемешивания в течение 18 часов смесь концентрируют в вакууме и часть остатка (приблизительно 309 г) суспендируют в метаноле (758 мл) в течение 15 мин. К суспензии добавляют воду (600 мл) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (142 мл) и смесь перемешивают в течение 1 часа. Твердый материал собирают фильтрованием и промывают смесью метанол:вода [1:1, 50 мл], водой (50 мл) и гексаном (50 мл). Твердое вешество высушивают в вакууме при 60°C, чтобы получить соединение, указанное в заголовке (87,1 г).

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,02-1,20 (2H), 1,53-1,75 (7H), 2,31-2,39 (3H), 2,39-2,47 (3H), 3,04-3,12 (3H), 3,80-3,91 (2H), 4,34-4,76 (1H), 6,78-6,93 (1H), 7,37-7,54 (4H), 7,54-7,64 (1H), 7,75-7,84 (2H), 7,91-8,01 (2H), 8,14-8,25 (1H).

Получение 6 [транс-4-[(Метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метанол

Смесь соединения [транс-4-(метиламино)циклогексил]метанола (может быть получена согласно методике, описанной в WO 2002/14267) (50,0 г, 0,35 моль), 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина (коммерчески доступен, 42,9 г, 0,27 моль) и карбоната калия (57,3 г, 0,42 моль) в воде (1 л) и 1,4-диоксане (100 мл) нагревают при 90°C в течение 15 часов. К смеси добавляют соединение Получения 7 (2,0 г, 14,0 ммоль) и реакционную смесь нагревают при 90°C в течение еще 1 часа. После охлаждения до комнатной температуры смесь перемешивают в течение 1 часа и твердый материал собирают фильтрованием, промывают водой (150 мл) и высушивают в вакууме при 65°C, чтобы получить соединение, указанное в заголовке (72,7 г).

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,00-1,19 (2H), 1,30-1,45 (1H), 1,52-1,77 (4H), 1,77-1,91 (2H), 3,09-3,20 (3H), 3,20-3,29 (2H), 4,37-4,51 (1H), 6,45-6,57 (1H), 7,06-7,17 (1H), 8,01-8,14 (1H).

Получение 7 [транс-4-(Метил{7-[(4-метилфенил)сульфонил]-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил}амино)циклогексил]метансульфинат

К раствору соединения Получения 4 (60,0 г, 0,418 моль) в ацетоне (600 мл) добавляют триэтиламин (117,5 мл, 0,837 моль) и каталитическое количество йодида калия (3,4 г, 0,05 моля), затем 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин (коммерчески доступен, 102,8 г, 0,335 моль). Образующуюся смесь нагревают при 60°C в течение 22 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляют ацетон (300 мл), за которым следует триэтиламин (146,9 мл, 1,04 моль), затем метилсульфонилхлорид (81,7 мл, 1,047 моль). После перемешивания в течение 4 часов при комнатной температре добавляют воду (1,8 л), в результате чего продукт осаждается. Продукт отфильтровывают, высушивают и растирают в порошок в смеси МТВЕ-гептан (6:4, 600 мл). Продукт снова растирают в порошок в смеси МТВЕ-гептан и получают соединение, указанное в заголовке (120 г).

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО):

Получение 8 [транс-4-(Метиламино)циклогексил]метанол

Раствор Vitride (65%, 767 мл, 2,465 моль) добавлябт по каплям за 1 час к раствору транс-4-[(трет-бутоксикарбонил)амино]циклогексанкарбоновой кислоты (коммерчески доступна, 100 г, 0,4109 моль) в толуоле (1 л). После завершения добавления реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при 100-110°C. Реакционную смесь гасят водным раствором сульфата натрия (800 мл) при температуре ниже 10°C. Реакционную смесь фильтруют через целит и остаток на фильтре промывают дихлорметаном (500 мл), затем водой (100 мл). Органический слой отделяют, а водный слой экстрагируют дважды дихлорметаном (600 мл, затем 400 мл). Объединенные органические слои высушивают над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме с получением соединения, указанного в заголовке (62 г).

¹Н ЯМР (CD₃OD): 1, 08-1,31 (4H), 1,51-1,64 (1H), 1,93-2,05 (2H), 2,10-2,22 (2H), 2,38-2,50 (1H), 2,50-2,54 (3H), 3,48-3,55 (2H).

ПРИМЕР 1a. Получение N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида

К раствору соединения Получения 1 (250,0 г, 0,48 моль) в 2-пропаноле (1,2 л) добавляют раствор гидроксида лития (48,7 г, 2,03 моль) в воде (1,2 л). Реакционную смесь нагревают при 40°C в течение 8 часов и затем перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Смесь фильтруют, промывают на фильтре смесью 2-пропанол:вода (1:1, 100 мл) и фильтрат приводят к рН 7,5 добавлением соляной кислоты (6N). После перемешивания в течение 1 часа твердый материал собирают фильтрованием, промывают смесью 2-пропанол:вода (1:2, 240 мл) и высушивают в вакууме при 60°C с получением соединения, указанного в заголовке (148,7 г), в форме свободного основания (Пример 1a).

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,20-1,39 (2H), 1,62-1,75 (4H), 1,77-1,91 (1H), 1,97-2,11 (2H), 2,54-2,63 (3H), 2,89-2,99 (2H), 3,10-3,21 (3H), 4,44-4,86 (1H), 6,43-6,61 (1H), 7,01-7,19 (1H), 7,94-8,16 (1H).

ПРИМЕР 1b. Получение соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамид с малеиновой кислотой

Смесь соединения Примера 1a (212,0 г, 628,3 ммоль) и малеиновой кислоты (67,2 г, 579,0 ммоль) в смеси 1-бутанол (3200 мл) и вода (400 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Объем смеси уменьшают до 1600 мл перегонкой в вакууме (55°C, 100 мбар (75 мм рт. ст.)) и затем охлаждают до 0°C. Образующееся твердое вещество собирают фильтрованием, промывают гептаном (500 мл) и высушивают в вакууме при 35°C с получением малеиновокислотной соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида (253,0 г) в виде кристаллической формы, известной как Форма A.

Экспериментальный МН⁺ 338,2; ожидаемый 338,2.

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,24-1,38 (2H), 1,68-1,92 (5H), 2,00-2,11 (2H), 2,56-2,61 (3H), 2,91-3,00 (2H), 3,15-3,27 (3H), 4,39-4,70 (1H), 6,53-6,73 (1H), 7,16-7,36 (1H), 8,07-8,29 (1H).

ПРИМЕР 1c. Способ получения порошковой рентгеновской дифрактограммы соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамид с малеиновой кислотой (Форма A) Порошковые рентгеновские дифрактограммы Формы A соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамид с малеиновой кислотой были собраны с использованием Bruker-AXS Ltd. D4 порошкового рентгеновского дифрактометра, снабженного автоматическим приспособлением для смены проб, тета,тета-гониометром, автоматической щелью дивергенции луча и детектором PSD Vantec-1. Образец готовят для анализа, монтируя на низкофоновом держателе образца из кремниевой пластины с полостью. Образец вращают, облучая рентгеновским изучением CuKα₁ (длина волны 1,5406 Å) рентгеновской трубки, работающей при 40 кВ/35 мA. Анализ выполняли гониометром, работающим в непрерывном режиме набора со счетом 0,2 с и шагом 0,018° в интервале 2θ градусов от 2 до 55°. Результаты показаны в Таблице 1 и Таблице 2.

Таблица 1
Пики порошковой дифрактограммы,.выраженные в градусах 2-тета ±0,2 градуса, приблизительно Угол 2-тета Интенсивность, I% Угол 2-тета Интенсивность, I% Угол 2-тета Интенсивность, I% 6,178 72,6 17,997 32,3 24,86 19,8 8,519 24,5 18,539 44,5 25,602 10,7 12,601 88,4 20,298 18,2 26,582 13 13,819 38 20,659 27,8 27,02 30,6 15,478 34,3 21,583 11,1 27,721 18,7 15,719 100 22,642 12,7 28,161 23,7 16,32 27,1 23,08 12,1 28,38 28,9

Таблица 2
Избранные пики порошковой рентгеновской дифрактограммы, выраженные в градусах 2-тета ±0,2 градуса, приблизительно Угол, 2-тета Размер решетки d(A) Интенсивность, I% 6,179 14,3 73 12,601 7,01 88 15,719 5,63 100 18,539 4,78 45 27,02 3,29 30,6 28,38 3,14 28,9

Как видно специалисту в данной области техники результаты любой порошковой рентгеновской дифрактограммы (XRPD) могут изменяться и последующие XRPD не будут идентичны, даже когда анализ проводят на одной и той же партии материала. Эта вариабельность может быть обусловлена испытываемым образцом препарата, температурой, определенной моделью дифрактометра, умением оператора и т.д. Термин «приблизительно», если используется для определения в дифрактограмме, определяется как значение 2θ±0,2 °2θ. Любое определение того, будет ли кристаллическая форма Формой А полиморфа и охватывается ли формулой изобретения, будет интерпретироваться в свете вариабельности теста.

Эта вариабельность продемонстрирована на фиг.1. Две различные партии соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида с малеиновой кислотой Формы А были представлены на один и тот же XRPD дифрактометр. Характеристические пики на фиг.1 подтверждают, что это полиморф Формы А. Однако, относительная интенсивность этих пиков, так же как других пиков идентификации, изменилась немного.

ПРИМЕР 2. Получение N-циклобутил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида

Следуя общей методике Примера 1 и проводя некритические изменения, но заменяя предшественник на циклобутанамин, обеспечивают соединение, указанное в заголовке.

Экспериментальный МН⁺ 378,0; ожидаемый 378,2.

¹Н ЯМР (d₆-ДМСО): 1,22-1,32 (2H), 1,47-1,70 (6H), 1,78-2,04 (5H), 2,16-2,24 (2H), 2,85-2,86 (2H), 3,15 (3H), 3,68-3,78 (1H), 4,60-4,72 (1H), 6,51-6,54 (1H), 7,11-7,12 (1H), 7,44-7,49 (1H), 8,08 (1H), 11,60 (1H).

ПРИМЕР 3. Получение N-этил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида

Следуя общей методике Примера 1 и проводя некритические изменения, но заменяя предшественник на этанамин, обеспечивают соединение, указанное в заголовке.

Экспериментальный МН⁺ 352,0; ожидаемый 352,2.

¹Н ЯМР (CDCl₃): 1,24-1,44 (5H), 1,64-1,74 (2H), 1,87-2,09 (3H), 2,15-2,21 (2H), 2,97-2,99 (2H), 3,18-3,27 (5H), 4,46-4,52 (1H), 4,74-4,86 (1H), 6,55 (1H), 7,04 (1H), 8,28 (1H).

ПРИМЕР 4. Ферментативный анализ JAK

Материалы: Рекомбинантные JAK-2 (номер в каталоге PV4210) и JAK-3 (номер в каталоге PV3855) были приобретены в (Invitrogen Corporation, Madison, WI). Рекомбинантные JAK-1 (GST-JAK-1 (852-1142)) и Tyk-2 (GST-Tyk2 (870-1187, C1187S)), используемые в этом изучении, экспрессировали и очищали в Pfizer Laboratories. Аденозин 5'-трифосфат (АТФ) получали от Sigma Chemical Company, St. Louis, МО. Пептид JAKтид (последовательность пептида, FITC-KGGEEEEYFELVKK (SEQ ID NO: 1)), используемый для анализа JAK-2 и JAK-3, и пептид IRS-1 (последовательность пептида, 5-FAM-KKSRGDYMTMQIG (SEQ ID NO:2)), используемый для анализа JAK-1 и Tyk-2, приобретали у (American Peptide Company, Sunnyvale, CA). Реагент покрытия 3 был приобретен у (Caliper Life Scince, Hopkinton, MA).

Методы: Анализ сдвига мобильности пептида использовали, чтобы определить количественно фосфорилирование JAKтида (JAK-2 и JAK-3) или пептида IRS-1 (JAK-1 и Tyk-2). Реакции были выполнены в 384-луночном планшете (Matrical MP-101) в суммарном объеме 10 микролитров. Реакционные смеси содержали 20 мМ HEPES, рН 7,4, 10 мМ хлорида магния, 0,01% альбумина бычьей сыворотки (BSA), 0,0005% Твин-20, АТФ (4 мкМ для JAK-2 и JAK-3, 40 мкМ для JAK-1 и 7 мкМ для Tyk-2)), 2% ДМСО и 1 мкМ пептидного субстрата (JAKтида для JAK-2 и JAK-3 или пептида IRS-1 для JAK-1 и Tyk-2). Соединения разбавляли последовательно в 100% диметилсульфоксиде и проверяли в 11 точках зависимости доза-реакция в двойном экземпляре, или в четырех экземпярах (200 нл соединения/ДМСО добавляли в реакцию на 10 микролитров). Реакции инициировали добавлением фермента до конечной концентрации 2 нМ JAK-2, 1 нМ JAK-3, 7 нМ Tyk2 или 20 нМ JAK-1. Анализ протекает 240 минут для JAK-1, 150 минут для JAK-2, 90 минут для JAK-3 и 60 минут для Tyk-2. Анализы останавливали в определенное время 20 микролитрами 140 мМ HEPES, 22,5 мМ ЭДТУК и 0,15% реагента покрытия 3. Планшеты размещали на приборе LabChip 3000 (LC3000) (Caliper Life Sciеnce), чтобы измерить образование фосфорилированного пептида. Данные анализировали, используя анализатор Hits Well Analyzer Software от (Caliper Life Scince), чтобы получить количество образовавшегося продукта.

Данные затем импортируют во внутреннее применение, где каждую точку данных выражают как процент ингибирования в расчете на неингибированные и без ферментов контрольные группы. Данные доза-реакция затем вставляют в 4-параметрическое логистическое уравнение (Уравнение 1), чтобы определить значение IC₅₀.

Уравнение 1

В котором max соответствует неингибированному значению, min соответствует значению полного ингибирования и s представляет собой угловой коэффициент.

Используя этот протокол, следующие результаты были получены для соединений, указанных в заголовках Примеров 1 и 2.

Таблица 3
Результаты анализа ферментов JAK Пример # JAK-1 IC₅₀ JAK-2 IC₅₀ JAK-3 IC₅₀ Tyk-2 IC₅₀ 1a 9,53 нM 17,5 нM 95,1 нM 75,1 нM 2 45,0 нM 101,0 нM 742 нM -

ПРИМЕР 5. Анализ in vitro пролиферации Т-лимфоцитов собаки. Активация Т-лимфоцитов играет ключевую роль во множестве воспалительных и аутоиммунных нарушений, а также астмы, аллергий и зуда. Так как активация Т-лимфоцитов может, частично, быть вызвана цитокинами, которые передают сигнал через путь JAK-STAT, ингибитор JAK мог быть эффективным против таких заболеваний, включающих аберрантную активацию Т-лимфоцитов.

Методы: Цельную кровь собаки собирали в пробирках гепариннатрия у 29 собак бигль и 23 собак смешанной породы. Цельную кровь (20 мкл) помещали в 96-луночные планшеты (Costar 3598) со 180 мкл среды (RPMI 1640, Gibco #21870-076, с 1% фетальной бычьей сывороткой, инактивированной нагреванием, Gibco #10082-39, 292 мкг/мл L-глутамина, Gibco #250030-081, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, Gibco #15140-122), содержащей контрольный растворитель или испытуемое соединение (от 0,001 до 10 мкМ), конканавалин А (ConA; 1 мкг/мл, Sigma C5275) и собачий интерлейкин-2 (IL-2; 50 нг/мл, R&D Systems 1815-CL/CF). Лунки, содержащие цельную кровь, среду с контрольным растворителем и никакого ConA или IL-2, использовали как контрольный оразец. Планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 часов. Тритированный тимидин, 0,4 мкКи/лунка (Perkin Elmer, Net027A-005MC) добавляли в течение 20 дополнительных часов. Планшеты замораживали, затем оттаивали, промывали и фильтровали, используя коллектор клеток Brandel MLR-96 и предварительно увлажненные фильтровальные маты (Wallac 1205-401, Perkin Elmer). Фильтры высушивали при 60°C в течение одного часа (конвекционная сушильная камера Precision 16EG) и помещают в мешки для фильтрованных образцов (Wallac 1205-411, Perkin Elmer) с 10 мл сцинтиллятора (Wallac 1205-440, Perkin Elmer). Герметизированные фильтры считают на жидкостном сцинтилляционном счетчике LKB Wallac 1205 Betaplate. Данные собирают с помощью Gterm Betaplate program v 1.1 (Wallac copyright 1989-1990) и преобразовывают в процент ингибирования, рассчитанный по следующей формуле:

Данные графически показаны как процент ингибирования, используя GraphPad Prism 4.0, и кривые IC₅₀ были построены, используя поточечнный анализ.

Результаты

Средние значения IC₅₀, полученные при использовании цельной крови собак бигль, составляют 66,3 нМ для соединения Примера 1a; 410 нМ для Примера 2 и 83 нМ для Примера 3. Среднее значение IC₅₀, полученное при использовании цельной крови собак смешанных пород, составляет 138 нМ для соединения Примера 1a. Эти данные предполагают, что соединения по настоящему изобретению эффективны в ингибировании пролиферации Т-лимфоцитов, главной особенности многих болезней.

ПРИМЕР 6. Анализ снижения блошиного зуда и дерматита. Блошиный зуд и дерматит являются обычными кожными состояниями собак. Зуд является одним из самых тяжелых клинических симптомов, связанных с дерматитом, вызываемым блохами, и постоянное почесывание, потирание морды и жевание лап может привести ко многим изменениям кожи, таким как эритема, отек, облысение, лихенизация и гиперпигментация. Блошиный зуд и дерматит могут быть вызваны экспериментально. Как было показано, в этих моделях воспалительные клетки и цитокины являются посредниками иммунных реакций на аллергены. Поэтому ингибитор JAK, который замедляет передачу сигнала зудогенным и провоспалительным рецепторам цитокина, может быть эффективным при замедлении, снижении или уменьшении блошиного зуда и дерматита.

Проект исследования

Двадцать восемь кобелей и сук смешанных пород весом 5-35 кг и возрастом больше одного года инвазировали приблизительно 100 голодными взрослыми кошачьими блохами (Ctenocephalides felis) за 14 дней до начала дозирования и снова инвазировали 30 блохами на собаку каждые 4 дня весь период изучения. За семь дней до дозирования двадцать четыре собаки были рандомизированы в три различных группы лечения: плацебо, 0,5 мг/кг или 0,25 мг/кг соединения Примера 1b, на основе визуальной аналоговой шкалы (ВАШ) оценки поражений кожи. Лечение проводили перорально два раза в день в течение 28 дней, а состояние зуда, также как эритемы и поражения кожи, оценивали во время изучения. Состояние зуда регистрировали, помещая собак в бокс с возможностью видеозаписи и делая запись их активности в течение 4 часов. Состояние зуда количественно определяли по тому, сколько секунд собаки тратят на расчесывание. Поражения кожи регистрировали вводом изображений брюшной, паховой области и оценивая серьезность, согласно визуальной аналоговой шкале (ВАШ).

Статистический анализ:

Захваченнoe истекшее видеовремя состояния зуда анализирут, используя смешанную линейную модель для повторных мер. Модель включает фиксированные эффекты лечения и день изучения и взаимодействие лечения и дня изучения. Случайные эффекты включают блокаду, взаимодействие блокады и лечения и ошибки. Базовые данные для состояния зуда (день -1) использовали в качестве ковариаты в анализе состояния зуда. Метод наименьших квадратов используют для оценки средств лечения. Среднеквадратичные ошибки метода наименьших квадратов были оценены, и 90% доверительные интервалы были созданы. Средние геометрические величины были вычислены по методу наименьших квадратов для логарифмически преобразованных данных. Априорные контрасты использовали, чтобы оценить лечение. Разности в лечении оценивают при 10% уровне значимости (P≤0,10).

Результаты:

Результаты лечения показаны на фиг.2 и фиг.3. Поражения и эритема были значительно снижены в группе лечения дозой 0,5 мг/кг. Фиг.2 поясняет День 27 оценки ВАШ для соединения Примера 1b у собак с аллергией на блох (метод наименьших квадратов). Значительные снижения зуда по сравнению с плацебо на 10% уровне значимости были замечены в различных временных точках во время изучения для обеих групп (в дни 1, 4 и 12 для дозы 0,25 мг/кг и в дни 1 и 20 для дозы 0,5 мг/кг). Фиг.3 показывает секунды зуда за 4-часовую фиксацию для соединения примера 1b у собак с аллергией на блох (долгосрочное среднее геометрическое).

ПРИМЕР 7. Анализ ингибирования пролифераций клеток

Линии клеток, полученные от кошек: MYA-1 и FETJ являются линиями клеток T-лимфобласта кошки, полученными из ATCC (Manassas, VA). Эти клетки культивировали в полной среде 1640 RPMI, дополненной 10% FBS при 37°C в увлажненном инкубаторе с 5% CO₂.

Живая узловая ткань лимфомы собаки

Злокачественные лимфатические узлы были иссечены ветеринарным персоналом Ветеринарного колледжа Мичиганского государственного университета (MSU), помещены в транспортную среду (полная среда Advanced 1640 RPMI, дополненная 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS), 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 0,25 мкг/мл амфотерцина B (Invitrogen/Gibco®). Узлы обрабатывают в течение 24 часов после удаления путем измельчения на крошечные части и пропускания через тканевое сито. Суспензии клетки вращают при 200×g, надосадочную жидкость удаляют и таблетку клеток повторно суспендируют в NH₄Cl в течение 10 минут при комнатной температуре. Суспензию клеток таблетируют центрифугированием; NH₄Cl удаляют и один раз промывают сбалансированным солевым раствором Хенкса (HBSS), за которым следует повторное суспендирование в среде пролиферации (полная среда Advanced 1640 RPMI, 1% FBS, 50 нМ 2-меркаптоэтанола, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 0,25 мкг/мл амфотерцина B). Суспензию клеток затем пропускают через 100-мкм нейлоновый сеточный фильтр клеток (BD-Falcon) и подсчитывают, используя гемацитометр. Клетки культивируют либо только в одной среде пролиферации, либо в среде пролиферации, дополненной 0,005% Pansorbin® (клетки Staphylococcus Aureus (SAC), инактивированные нагреванием, фиксированные формалином, Calbiochem), и 10 нг/мл собачьего IL-2 (R&D Systems), либо в среде пролиферации, дополненной 125 нг/мл конкавалина А (Sigma) и 125 нг/мл липополисахарида (LPS; Calbiochem).

Метод in vitro анализа антипролиферации

Клетки, культивируемые в питательной среде, описанной выше, помещают в 96-луночные планшеты Costar (Corning) c плотностью 1×10³ клеток/лунка (клеточные линии, полученные от кошки) или 2×10⁵ клеток/лунка (клетки лимфатического узла) и подвергают действию различных концентраций испытуемых соединений в течение до 5 дней при 37°C в увлажненном инкубаторе с 5% CO₂. Влияние на пролиферацию определяют, используя водный нерадиоактивный анализ пролиферации клеток CellTiter 96® AQ_ueous (Promega) согласно инструкциям изготовителя. В общем, пролиферацию косвенно измеряют, используя растворимую соль тетразолия (МТS) и электронный реагент сочетания. Биовосстановение МТS в формазан, продукт, растворимый в среде ткани, контролируют по поглощению света при 490 нм, применяя планшет-ридер Spectramax, использующий программное обеспечение Softmax Pro 4.6 (Molecular Devices). Данные были графически показаны как процент контроля диметилсульфоксида, используя GraphPad Prism 4.00, и кривые IC₅₀ были построены с использованием нелинейной модели регрессии с сигмовидной реакцией на дозу.

Результаты

Таблица 4 демонстрирует, что соединение Примера 1 может ингибировать пролиферацию лимфоидной клеточной линии MYA-1, полученной от кошки, которая зависит от IL-2 при пролиферации, но не линии (FETJ), независимой от IL-2. Соединение формулы 1A или его соль может также ингибировать пролиферацию узловой ткани собаки, полученной из диагнозов собак с T- или В-лимфоцитарной лимфомой. Эти результаты предполагают, что ингибитор JAK может быть эффективным при лечении лимфом у животных семейства собачьих и кошачьих.

Таблица 4 Вид Клеточная линия или лимфатический узел Описание Стимулятор в культуральной среде IC₅₀ (нМ) Кошачьи MYA-1 Лимфоидная линия   122 (n=2) Кошачьи FETj Лимфоидная линия   >1000 Собачьи MSU LN 8 De novo
Т-лимфоцитарная лимфома LPS+ConA 357 Собачьи MSU LN 8 De novo
Т-лимфоцитарная лимфома SAC+IL-2 38 Собачьи MSU LN 9 De novo
В-клеточная лимфома LPS+ConA 147 Собачьи MSU LN 9 De novo
В-клеточная лимфома SAC+IL-2 100 Собачьи MSU LN 10 В-клеточная лимфома, устойчивая к химиотерапии LPS+ConA 687 Собачьи MSU LN 11 De novo
В-клеточная лимфома LPS+ConA 64

В настоящем изобретении описаны производные пирроло[2,3-d]пиримидина формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ представляет собой C_1-4 алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой, а также кристаллическая Форма A соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил} метансульфонамида с малеиновой кислотой. Заявляется также способ получения соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида с малеиновой кислотой. В изобретении описывается фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении янус-киназы (JAK), и способ лечения аллергических реакций, аллергического дерматита, атопического дерматита, экземы или зуда у млекопитающих. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 7 пр., 4 табл., 3 ил.

1. Соединение формулы I

или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ представляет собой C_1-4алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой.

2. Соединение по п.1, в котором R¹ представляет собой метил.

3. Соединение по п.1, в котором R¹ представляет собой этил или циклобутил.

4. Соединение по п.1, которое представляет собой N-метил-1-{транс-4-[метил(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамид, или его фармацевтически приемлемой соли.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении янус-киназы (JAK), включающая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Способ лечения аллергических реакций, аллергического дерматита, атопического дерматита, экземы или зуда у млекопитающих, включающий введение нуждающемуся млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

7. Способ по п.6, в котором терапевтически эффективное количество составляет от 0,01 мг/кг веса тела/день до 100 мг/кг веса тела/день.

8. Способ по п.6, в котором терапевтически эффективное количество составляет от 0,1 мг/кг веса тела/день до 10 мг/кг веса тела/день.

9. Способ по п.6, в котором млекопитающее включает животных-компаньонов.

10. Способ по п.9, в котором животными-компаньонами являются собаки.

11. Способ по п.6, в котором млекопитающее включает домашний скот.

12. Способ по п.6, в котором соединение по п.1 вводят перорально, парентерально или местно.

13. Кристаллическая форма А соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида с малеиновой кислотой.

14. Кристаллическая форма A соединения по п.13, которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей по меньшей мере один характеристический пик, в области приблизительно следующих значений угла 2-тета: 6,2, 12,6 и 15,7.

15. Кристаллическая форма А соединения по п.13, которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей по меньшей мере один характеристический пик, в области приблизительно следующих значений угла 2-тета: 6,2, 12,6, 15,7, 18,5, 27 и 28,38.

16. Кристаллическая форма А соединения по п.13, которая характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, имеющей по меньшей мере один характеристический пик, в области приблизительно следующих значений угла 2-тета: 6,178, 8,519, 12,601, 13,819, 15,478, 15,719, 16,32, 17,997, 18,539, 20,298, 20,659, 21,583, 22,642, 23,08, 24,86, 25,602, 26,582, 27,02, 27,721, 28,161, 28,38.

17. Способ получения соли N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида с малеиновой кислотой, включающий взаимодействие N-метил-1-{транс-4-[метил(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]циклогексил}метансульфонамида с малеиновой кислотой.