КОМБИНИРОВАННЫЙ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ Российский патент 2013 года по МПК A61K31/496 A61K31/538 A61K39/395 A61P31/00 

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается антибактериального средства для лечения желудочно-кишечных заболеваний, преимущественно острых кишечных инфекций, в том числе неустановленной этиологии.

Одним из иммунобиологических действующих веществ, перспективных с целью создания комбинированных препаратов, является комплексный иммуноглобулиновый препарат, разработанный в МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. Материалом для его получения служит донорская плазма от большого количества доноров, поэтому имеет место коллективный иммунитет. Комплексный иммуноглобулиновый препарат, в отличие от нормального иммуноглобулина человека, содержит иммуноглобулины классов IgG, IgA, IgM, содержание которых может изменяться в зависимости от направленности действия препарата. Данный препарат характеризуется повышенным содержанием антител к энтеробактериям (шигеллам, сальмонеллам, эшерихиям, протею, клебсиеллам и др.), стафилококкам, а также к ротавирусам. Специфические антитела комплексного иммуноглобулинового препарата нейтрализуют действие энтеропатогенных микроорганизмов, что достигается за счет антител одинаковой специфичности, но разных классов, способствующих агглютинации, нейтрализации и преципитации инфекционных агентов.

При пероральном введении иммуноглобулины практически не расщепляются в желудке и двенадцатиперстной кишке, а только в малой доле распадаются на активные составляющие - Fc- и F(ab)'₂ - фрагменты, сохраняющие активность иммуноглобулинов. Комплекс действует на протяжении всего желудочно-кишечного тракта, но особенно в толстом кишечнике, где сосредоточено большое количество лимфоидной ткани (пейеровы бляшки).

Известно, что основными носителями иммунологической памяти являются иммуноглобулины класса G, имеющие самую простую среди антител структуру и самое массовое содержание в сыворотке любого человека. Специфические моноклональные иммуноглобулины образуются в лимфоидной ткани, их синтезируют лимфоциты, прошедшие дифференцировку за счет сенсибилизированных антигеном антител. Несмотря на короткий срок жизни иммуноглобулинов класса G (21-28 дней), за счет дифференцировки лимфоцитов иммунологическая память сохраняется достаточно долго. Молекулы иммуноглобулинов у всех людей имеют сходную структуру, поэтому не воспринимаются иммунной системой как чужеродные белки. Таким образом, введенные в организм «чужие» антитела, достигнув лимфоидной ткани кишечника, включаются в формирование иммунологической памяти наряду с собственными, вырабатываемыми в результате контакта с антигеном. Феномен рециркуляции лимфоцитов способствует образованию специфических антител в участках слизистой оболочки, отдаленных от очага первичной сенсибилизации. Таким образом, иммуноглобулины, введенные энтерально, не только выполняют функцию иммунного ответа в кишечнике, но и выступают в роли матрицы, с которой клонируются плазматические клетки с заданными свойствами. Система местного иммунитета кишечника приобретает способность противостоять тем микроорганизмам, антитела к которым содержатся в комплексе иммуноглобулинов.

Со времени создания препарата неоднократно показана его эффективность в лечении острых кишечных инфекций (ОКИ), в том числе неустановленной этиологии, причем не только у людей, но и у приматов (Оценка терапевтической эффективности биопрепаратов в капсулах в доклинических испытаниях на обезьянах / Лапин Б.А., Давыдкин В.Ю., Афанасьев С.С., Джикидзе Э.К., Мелихова А.В., Кебу Т.И., Егорова Т.П., Давыдкин И.Ю., Холодилова Л.И., Ардашелия С.Н. // Материалы второй международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии» 8-10 августа 2011 г, Сочи-Адлер. - С: Изд-во ООО ″СТЕРХ″, 2011. - Т.1. - с.172-179).

Наиболее подходящим из семейства антибиотиков для комбинированных препаратов против ОКИ, на наш взгляд, является офлоксацин. Этот антибиотик из семейства фторхинолонов имеет широкий спектр действия, влияет преимущественно на грамотрицательные и некоторые грамположительные микроорганизмы. Эффективен в отношении микроорганизмов, устойчивых к большинству антибиотиков и сульфаниламидных препаратов. Ингибирует ДНК-гиразу, нарушает процесс суперспирализации и сшивки разрывов ДНК, угнетает деление клеток, вызывает структурные изменения цитоплазмы и гибель микроорганизмов. Одним из преимуществ офлоксацина является его полное всасывание из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Следующее преимущество - его абсолютная биодоступность (Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. - 14 вып. / Гл. ред. Г.Л. Вышковский. - М.: РЛС-2006, 2005. - с.610). Не менее важным является и то, что фторхинолоны в силу своей специфичности не оказывают угнетающего действия на бифидофлору человека, так как при развитии ОКИ почти всегда наблюдается гибель бифидобактерий в результате воздействия патогенных агентов. Указанное значительно снижает риск развития дисбактериоза в результате использования офлоксацина для лечения заболеваний. Единственным недостатком этого антибиотика является возможность его применения у людей только с 18 лет. Но возможно, что в экстремальных ситуациях это противопоказание не будет приниматься во внимание. В приматологии (НИИ медицинской приматологии РАМН, Сочи-Адлер, Россия) этот антибиотик успешно применяется в качестве лечебного средства при ОКИ (Доклинические испытания комплексного препарата КИП и В. adolescentis МС-42 / Давыдкин В.Ю., Джикидзе Э.К., Мелихова А.В., Кебу Т.И., Давыдкин И.Ю., Холодилова Л.И. // Мат. юбил. Всеросс. науч.-практич. конф. ″Научное обеспечение противоэпидемической защиты населения″, посвящ. 90-летию Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора и 20-летию Приволжского окружного центра по проф. и борьбе со СПИД. - Н.Новгород: Издатель Гладкова, 2009. - с.334-337).

Известен способ лечения кишечных инфекций у детей, включающий введение средств, воздействующих на уровень облигатных микроорганизмов и корригирующих дефицит сывороточного кальция, в качестве которого используют препарат, представляющий собой порошок - смесь лиофилизированной микробной массы живых бифидобактерий, адсорбированных на частицах активированного угля и глюконата кальция, помещенную в герметичный пакетик, где содержится не менее 5×10⁷ КОЕ бифидобактерий, иммобилизованных на сорбенте, 0,5-1 г глюконата кальция и 0,10-0,12 г лактозы (RU, патент 2227036 С2, А61К 33/06, 35/74, 20.04.2004).

Недостатком известного способа является недостаточная антимикробная активность применяемого средства.

Известен комплексный бактериальный препарат энтерацид П, содержащий новый штамм Lactobacillus acidophilus ВКПМ В-6535 (140-160 млн живых клеток/г препарата) и штамм Enterococcus faecium ВКПМ В-2990 (190-210 млн живых клеток/г препарата), обладающий более высокой антагонистической активностью по отношению к некоторым микроорганизмам и характеризующийся хорошей приживаемостью входящих в него бактерий в желудочно-кишечном тракте пушных зверей и собак (RU, патент 2091075 C1, А61К 35/74, C12N 1/20, 27.09.1997).

Недостатком известного комплексного бактериального препарата является то, что он предназначен для лечения желудочно-кишечных заболеваний только животных, но не человека.

Известно средство, обладающее антибактериальной активностью, содержащее живую культуру ацидофильных лактобактерий в сочетании с комплексом сывороточных иммуноглобулинов, взятых в одинаковых весовых частях, при концентрации жизнеспособных микробных клеток 10⁷-10⁸ на массу 0,1 г и процентном соотношении компонентов в комплексе иммуноглобулина G:M:A, равном (55-60):(20-25):(15-20) (RU, патент 1779377 A1, А61К 35/74, 39/395, 07.12.1992).

Недостатком известного средства является недостаточно широкий спектр антибактериальной активности, обеспечиваемый входящими в него противомикробными действующими веществами.

Известен уникальный комбинированный антибактериальный препарат ВАМПИЛОКС_® (прототип), продвигаемый на украинском рынке компанией «Vaishali Pharmaceuticals)) и сочетающий в себе свойства антибиотика и пробиотика, содержащий в качестве антибиотика амоксициллин и клоксациллин, а в качестве пробиотика включающий споры Lactobacillus sporogenes, применяемый в амбулаторно-поликлинических и стационарных условиях для эмпирической терапии полимикробных, смешанных инфекций, а также для лечения доказанной или предполагаемой стафилококковой инфекции ().

Недостатком уникального комбинированного антибактериального препарата ВАМПИЛОКС_® является то, что рекомендовано его применение для лечения только известных кишечных инфекций (брюшной тиф, сальмонеллез), то есть в отношении ОКИ он является препаратом узконаправленного действия, что не позволяет его использовать для лечения острых кишечных инфекций неустановленной этиологии.

В основу изобретения положена задача создания комбинированного антибактериального препарата для лечения острых кишечных инфекций, обеспечивающего сокращение сроков лечения.

Задача решена тем, что смесь содержит из антибиотиков офлоксацин и из биологических компонентов комплекс иммуноглобулинов IgG(56-60):IgA(16-22):IgM(22-24) при следующем соотношении, мг/флакон: офлоксацин - 250, комплекс иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM - 300.

Достигаемый технический результат по созданию комбинированного препарата для лечения ОКИ, представляющего собой смесь офлоксацина и комплекса иммуноглобулинов заключается в значительном сокращении сроков заболевания приматов острой кишечной инфекцией. Выздоровление животных происходит в среднем в 1,8 раза быстрее, чем при лечении антибиотиком офлоксацином в дозе 200 мг.

Заявляемый комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций, является новым и в литературе не описан.

Заявляемый препарат представляет собой смесь для приготовления суспензии в мелкой фармацевтической таре (например, флаконах) объемом 10 мл, содержащей 250 мг субстанции офлоксацина и 300 мг сухой измельченной биомассы комплекса иммуноглобулинов IgG:IgM:IgA.

Способ получения предлагаемого комбинированного препарата заключается в следующем.

Комплекс иммуноглобулинов получали в соответствии с патентом RU 2371200, А61К 39/395, С07К 16/06, 27.10.2009. Сублимированную биомассу иммуноглобулинов измельчали в роторной мельнице или электромагнитном аппарате до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченной биомассы, как описано в работе (Давыдкин И.Ю., Давыдкин В.Ю., Мелихова А.В. Рациональный подход к измельчению // Мат. юбил. Всеросс. науч.-практич. конф. ″Научное обеспечение противоэпидемической защиты населения″, посвящ. 90-летию Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора и 20-летию Приволжского окружного центра по проф. и борьбе со СПИД. - Н.Новгород: Издатель Гладкова, 2009. - с.344-347). Соотношение в ней фракций IgG:IgM:IgA составляло соответственно (56-60):(16-22):(21-24), а специфическая антисальмонеллезная активность - 1:320 в титрах РПГА.

Субстанцию офлоксацина (производитель NANJING FOREIGN ECONOMIC & TRADE DEVELOPMENT CO., LTD, CHINA) измельчению не подвергали. Содержание действующего вещества в субстанции составляло 99,4%.

Измельченную биомассу иммуноглобулинов и субстанцию офлоксацина смешивали в аппарате периодического действия СМ-30 в заданном соотношении и готовую смесь фасовали во флаконы ФО-1-10 таким образом, чтобы каждый флакон содержал 250 мг офлоксацина и 300 мг измельченной биомассы иммуноглобулинов.

Доклиническое изучение терапевтической эффективности заявленного комбинированного препарата в суспензии при лечении острых кишечных инфекций у обезьян осуществляли на базе ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН (г.Сочи-Адлер).

Испытания разработанного препарата проведены на обезьянах вида макака резус обоего пола разного возраста (1,3-18,3 лет) весом 2,5-10,0 кг, спонтанно болеющих ОКИ с выраженным диарейным синдромом. Диарейный синдром - частый жидкий стул со зловонным запахом без патологической примеси от 6 до 8 раз в сутки, умеренная сниженная активность.

Всех животных вылавливали из групповых клеток и вольер и размещали в индивидуальных. Животных сравниваемых групп подбирали методом свободной выборки, которые были репрезентативны по возрасту, весу и полу. Животных содержали на брикетированных кормах, изготовляемых на брикетировочном заводе ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН по рецептуре, разработанной фирмой ″Альтрогге″ для приматов.

Каждая обезьяна получала по одному флакону заявленного препарата в сутки. Суспензию готовили непосредственно перед дачей препарата обезьянам. Срок лечения составлял 7 дней. Срок наблюдения - 14 суток. В качестве препарата сравнения использовали таблетки офлоксацина 200 мг в дозе 1 таблетка на 1 обезьяну в сутки.

Результаты проведенных исследований, представляющие собой сравнение средней длительности в днях исчезновения клинических проявлений заболевания у приматов, представлены в таблице.

Сравниваемые препараты Состав препарата Длительность (дней) клинических проявлений (число обезьян) Средняя длительность клинических проявлений заболевания (дней) Известный Офлоксацин таблетки 200 мг 6(2)-7(2)-10(1)-11(1)-12(1) 9,2 Заявляемый Смесь для суспензии: офлоксацин 250 мг + измельченная смесь иммуноглобулинов 300 мг 4(3)-5(2)-7(2) 5,1

Как следует из анализа данных, представленных в таблице, комбинированный препарат, представляющий собой сухую смесь для приготовления суспензии и содержащий 250 мг офлоксацина и 300 мг измельченной биомассы иммуноглобулинов, обеспечивает значительное сокращение (в 1,8 раза) длительности клинических проявлений заболевания у приматов по сравнению с известным препаратом офлокасацин в таблетках по 200 мг, а значит и соответствующее сокращение сроков лечения обезьян от острой кишечной инфекции.

Изобретение относится к антибактериальному средству для лечения желудочно-кишечных заболеваний, преимущественно острых кишечных инфекций, в том числе неустановленной этиологии. Заявляемый препарат представляет собой смесь антибиотика и биологического компонента, где в качестве антибиотика используется офлоксацин, а в качестве биологического компонента - комплекс иммуноглобулинов IgG(56-60):IgA(16-22):IgM(22-24) при следующем соотношении, мг/флакон: офлоксацин - 250, комплекс иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM - 300. Технический результат заключается в значительном сокращении сроков заболевания приматов острой кишечной инфекцией. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций, представляющий собой смесь антибиотика и биологического компонента, отличающийся тем, что в качестве антибиотика смесь содержит офлоксацин, а в качестве биологического компонента комплекс иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM при следующем соотношении, мг/флакон:
офлоксацин - 250 мг,
комплекс иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM - 300 мг.

2. Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций по п.1, отличающийся тем, что процентное соотношение иммуноглобулиновых фракций IgG:IgA:IgM составляет 56-60:16-22:22-24 соответственно.