КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ У ЖИВОТНЫХ Российский патент 2014 года по МПК A61K31/65 A61K31/136 A61K31/7016 A61K31/79 A61P31/04 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а именно к фармацевтике.

Перед сельским хозяйством страны «Концепцией развития животноводства в XXI веке» поставлена задача - решить проблему обеспечения населения продовольствием за счет собственных ресурсов. Ее решение зависит от надежного эпизоотического благополучия животных по инфекционным и незаразным болезням.

По широте распространения, смертности, вынужденному убою и недополучению привесов болезни бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных превалируют над всеми другими. До 80-100% животных подвержены респираторным болезням и болезням желудочно-кишечного тракта.

Широкое распространение болезней бактериального происхождения среди всех видов животных в Российской Федерации препятствует решению поставленной задачи вследствие экономических потерь, складывающихся из падежа, вынужденного убоя, снижения прироста живой массы, которая у больных и переболевших животных снижается в 2-3 раза, а также затрат на лечебно-профилактические мероприятия, уменьшения потенциала продуктивности и племенных качеств животных.

Несмотря на внедрение современных технологий содержания и кормления животных, применение широкого спектра биологических и противомикробных препаратов, болезни бактериального происхождения особенно широко распространены в крупных специализированных хозяйствах промышленного типа. Причины такой ситуации: антигенное и патогенное многообразие возбудителей, высокая их устойчивость во внешней среде, огромные адаптационные возможности в противостоянии антимикробным препаратам, длительное бактерио- и вирусоносительство у взрослых животных, односторонний подход к профилактике.

Таким образом, болезни бактериальной этиологии - самые распространенные, являются одной из основных причин экономических потерь в животноводстве, т.к. способны снижать экономическую эффективность отрасли на 20-30%, и поэтому поиск эффективных средств и способов защиты животных, разработка комплексной профилактики данной патологии являются актуальными и перспективными направлениями.

Известны препараты фирмы «ВИК - здоровье животных» при бактериальных болезнях и микоплазмозах свиней, которые фирма разделяет на однокомпонентные (Линковик, Стрептовик, Гентамицин, Тиланик, Энрофлом, Неомицин) и комплексные (Сультеприм, Спелинк-44, Нифулин-форте). Комплексные препараты задают животным перорально - с кормом или с водой (Ветеринария, 9, 2000, с.7-11).

Препараты обладают широким спектром действия, однако их многолетнее использование существенно снижает эффективность их применения из-за появления устойчивой микрофлоры.

Известен препарат Доксиветин для лечения и профилактики болезней животных бактериальной этиологии. В состав препарата входит доксициклин, который является сравнительно новым полусинтетическим производным окситетрациклина. В состав Доксиветина также входит новокаин в качестве местноанестезирующего средства,

диметилсульфоксид, который оказывает многостороннее действие на макроорганизмы: противовоспалительное, местноанестизирующее, противоотечное и вызывает бактерио- и фунгистатический эффект, и пропиленгликоль (пропандиол), который обладает слабыми бактерицидными свойствами, стабилен при хранении, осмотически активен, физиологически индифферентен, не оказывает побочного действия на организм (см., например, Амирбеков М. и др., Доксиветин - антибиотик пролонгированного действия, Ветеринария, 1999, №6, с.43-45) или перорально (см. RU 2108783 С1, 20.04.1998).

Известен препарат Доксимаг-Оо для лечения и профилактики болезней животных бактериальной этиологии. В состав препарата входит доксициклина хиклат и вспомогательные вещества: поливинилпирролидон, моноэтаноламин, магния хлорид (или магния оксид) и вода для инъекций. Доксимаг обладает широким спектром антибактериального действия. По степени воздействия на организм препарат относится к малоопасным веществам - 4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76 (см. Хмылов А.Г., Доксимаг-Оо - новое лекарственное средство отечественного производства, Промышленное и племенное свиноводство, 2009, №3, с.71-72).

Доксимаг-Оо и Доксиветин вводят путем инъекций, в месте введения препарата возможно появление реакций в виде отека, который может со временем перейти в гранулематозное воспаление. Кроме того, введение в форме инъекций - очень трудоемкий процесс.

Наиболее близким аналогом заявляемого лекарственного средства является Доксивет 10, который в качестве действующих веществ содержит доксициклина хиклат - 100 мг/мл и бромгексина гидрохлорид - 10 мг/мл, а в качестве вспомогательных веществ глицеролформаль, диметилацетамид и воду очищенную. Препарат вводят перорально. После перорального введения препарата антибиотик хорошо всасывается в желудочно-кишечном тракте и проникает в органы и ткани животного, достигая максимальных концентраций в сыворотке крови через 1-2 часа. Выводится из организма главным образом с желчью и мочой. Доксивет 10 также обладает широким спектром антибактериального действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, по степени воздействия на организм относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007), в рекомендуемых дозах хорошо переносится животными, не обладает эмбриотоксическими, тератогенными и гепатотоксическими свойствами (см. Доксивет 10 - адрес в Интернете: http://innovet.ru/catalog_1_10).

Однако основным недостатком данного препарата является наличие в его составе воды. В водной среде доксициклин и его производные крайне нестабильны. Кроме того, Доксивет 10 производится испанской фирмой Divasa Farmavic и имеет высокую стоимость.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание отечественной композиции на основе доксициклина хиклата и бромгексина гидрохлорида для лечения болезней животных бактериальной этиологии, пригодной для перорального введения и стабильной при хранении.

Поставленная задача решается тем, что композиция для лечения инфекций бактериальной этиологии у животных, согласно изобретению, содержит доксициклина хиклат, бромгексина гидрохлорид, лактулозу и 2-пирролидон при следующем соотношении ингредиентов (масс.%):

доксициклина хиклат 5,0-15,0 бромгексина гидрохлорид 0,25-0,75 лактулоза 0,5-1,5 2-пирролидон остальное

Данная композиция относится к комплексным антибактериальным лекарственным препаратам. Доксициклин является полусинтетическим антибиотиком тетрациклиновой группы третьего поколения и активен в отношении следующих микроорганизмов: Bordetella spp., Campylobacter spp., Escherichia coli, Haemophilus spp., Pasteurella spp., Salmonella spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Clostridium perfringens, Chlamydia spp., Rickettsiae spp., а также Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma hyopneumoniae. Бактериостатическое действие доксициклина связано с угнетением активности энзимов, катализирующих связывание аминоацетил-РНК с рибосомальными акцепторами. Доксициклин отличается от других тетрациклинов медленным выделением из организма и низкой токсичностью. Зависимость всасывания доксициклина от времени приема пищи менее выражена, чем у природных тетрациклинов. Доксициклин обладает большой липофильностью по сравнению с другими тетрациклинами, что обуславливает его лучшую всасываемость и проникновение в ткани и жидкости организма. Наиболее высокое содержание обнаруживается в тканях почек, легкого и желчного пузыря. Эффективная терапевтическая концентрация доксициклина в организме значительно больше, чем у других тетрациклинов. После перорального введения препарата антибиотик хорошо всасывается в желудочно-кишечном тракте и проникает в органы и ткани животного, достигая максимальных концентраций в сыворотке крови через 1-2 часа. Выводится из организма главным образом с желчью и мочой.

Бромгексин оказывает муколитическое (секретолитическое) и отхаркивающее действие и слабое противокашлевое действие. Снижает вязкость мокроты; активирует мерцательный эпителий, увеличивает объем мокроты и улучшает ее отхождение. Стимулирует выработку эндогенного сурфактанта, обеспечивающего стабильность альвеолярных клеток в процессе дыхания. Эффект проявляется через 2-5 дней от начала лечения. Бромгексин при приеме внутрь почти полностью (99%) всасывается в течение 30 минут. Максимальные его концентрации в крови отмечают через 1 час. Экскретируется почками.

Лактулоза оказывает гиперосмотическое слабительное действие, стимулирует перистальтику кишечника, улучшает всасывание фосфатов и солей кальция, способствует выведению ионов аммония. Лактулоза не всасывается в кишечнике. Выведение данного компонента напрямую связано с перистальтикой кишечника.

Технический результат, который достигается при использовании заявленного изобретения, заключается в том, что предложенная лекарственная композиция позволяет эффективно лечить широкий спектр болезней бактериальной этиологии у животных, безвредна при применении и стабильна при хранении.

Заявленное изобретение характеризуется следующими примерами, которые, однако, не ограничивают объем притязаний заявителя.

Пример 1. Методика приготовления композиции для лечения инфекций бактериальной этиологии у животных.

В плоскодонную колбу объемом 250 мл при постоянном перемешивании на магнитной мешалке к 90 мл 2-пирролидона добавляют 10 г доксициклина и перемешивают в течение 10-15 минут до полного растворения. Далее добавляют 0,5 г бромгексина и перемешивают на протяжении 10 минут, после чего вносят 1 г лактулозы. Доводят общий объем до 100 мл с помощью 2-пирролидона. Перемешивают в течение 15 минут, стерилизуют и расфасовывают. Получают препарат следующего состава (в масс.%):

доксициклина хиклат - 10,0; бромгексина гидрохлорид - 0,5; лактулоза - 1,0; 2-пирролидон - 88,5.

Композиция представляет собой прозрачный раствор от светло- желтого до оранжевого цвета с характерным запахом. Плотность 0,85 г/мл pH=1,7.

При пятикратном разбавлении водой (разведение при применении) образуется прозрачный раствор светло-желтого цвета, с характерным запахом.

Плотность 0,98 г/мл

РН=2,6

Пример 2. Изучение местно-раздражающих свойств заявленной композиции методом кожной пробы, внутрикожной пробы и глазной пробы.

Кожная проба. У 3 кроликов выстригли шерсть на боковой поверхности брюшной стенки размером 5×5 см. Препарат наносили на выстриженный, чистый участок кожного покрова с последующим легким втиранием в кожу.

Результат: непосредственно после нанесения препарата на месте внесения эритемы и отечности не обнаружено. Зуда и беспокойства у животного не отмечено. Спустя 30, 60 минут, 24, 48 часов никаких отклонений от нормы на месте нанесения препарата не выявлено.

Внутрикожная проба. В качестве положительного контроля использовали 0,01% раствор гистамина, а в качестве отрицательного - физиологический раствор. У 2 кроликов выстригался участок волосяного покрова на боковой поверхности брюшной стенки размером 10×10 см. Кожу обрабатывали спиртом, и в три точки внутрикожно инъецировали: 1 точка - препарат объемом 0,02 мл; 2 точка - гистамин 0,02 мл, 3 точка - физиологический раствор 0,02 мл. Реакцию оценивали спустя 15, 30 и 60 минут после введения, затем спустя 24 и 48 часов. Результат: на месте введения препарата и физиологического раствора никаких изменений не выявлено: отеки, эритема и зуд отсутствуют. На месте введения гистамина наблюдалось образование отека и покраснение кожи.

Глазная проба. Двум кроликам в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали разведенный с водой препарат в соотношении 1:100. В конъюнктивальный мешок правого глаза вводили физиологический раствор. В момент введения наблюдалось незначительное слезотечение и гиперемия конъюнктивы. Спустя 2 минуты слезотечение прекратилось, но покраснение конъюнктивы осталось. Через 1 час данные симптомы исчезли. В последующем никаких воспалительных процессов конъюнктивы и роговицы не наблюдалось.

Таким образом, полученные в ходе лабораторных экспериментов данные позволяют сделать вывод, что заявленная лекарственная композиция в разведении 1:100 с водой не обладает местно-раздражающим действием.

Пример 3. Изучение острой токсичности оральной формы антибиотика доксициклина с бромгексином и лактулозой на птицах.

Исследуемый препарат предварительно разводили питьевой водой в соотношении 1:4. Цыплятам бройлерам массой 67,1±7,48 г (возраст 5 суток) задавали разведенный в воде препарат дробно с интервалом 2 часа в адекватных объемах. Контрольная группа цыплят получала чистую питьевую воду. В результате проведенных исследований установлена доза LD₅₀=833 мг/кг массы тела животного.

Пример 4. Изучение хронической токсичности оральной формы композиции доксициклина с бромгексином и лактулозой.

Опыты проводили на 18 белых нелинейных мышах-самцах с исходной массой 14-18 г. Все животные разделены на 3 группы, по 6 животных в каждой.

Животным 1 опытной группы орально ежедневно в течение месяца вводили лекарственную композицию в дозе 50 мг/кг или 5 мл/кг по действующему веществу, что соответствовало 1/10 LD₅₀.

Животным второй опытной группы - 5 мг/кг или 0,5 мл/кг по действующему веществу, что соответствовало 1/100 LD₅₀.

Животным третьей группы (контрольной) при тех же условиях содержания и кормления вводили равный объем раствора вспомогательных веществ, входящих в состав препарата, без активного вещества из расчета 5 мл/кг препарата без действующего вещества.

В течение всего опыта вели наблюдение за состоянием и поведением животных, динамикой роста массы тела, регулярно проводили исследования по оценке функционального состояния печени, почек, изучали влияние препарата на гематологические показатели. Статистическую обработку полученных данных проводили по Стьюденту-Фишеру.

Результаты исследований показали, что в течение опыта внешних признаков интоксикации у животных не отмечалось. Все животные, как опытной, так и контрольной групп, были активными, волосяной покров блестящий, приглажен. Реакция на внешние раздражители сохранена.

Признаков токсикоза и гибели животных не наблюдалось.

На основании полученных данных был сделан вывод об отсутствии у препарата в указанных дозах эффекта кумуляции по токсическому признаку.

Пример 5. Изучение переносимости и влияние на привес живой массы оральной формы фармацевтической композиции, содержащей доксициклин, бромгексин и лактулозу.

Было сформировано 3 группы цыплят-бройлеров кросс РОСС 308. Возраст цыплят составлял 10 дней. Животным 1 опытной группы однократно добавляли в воду заявляемый препарат в дозе 10 мг/кг. Животным второй группы - однократно в 5-кратно увеличенной дозе - 50 мг/кг массы тела по ДВ. Третья контрольная группа получала чистую воду в свободном доступе.

В течение всего опыта вели наблюдение за состоянием и поведением животных, динамикой роста массы тела, регулярно проводили исследования по оценке функционального состояния печени, почек, изучали влияние препарата на гематологические показатели. Статистическую обработку полученных данных проводили по Стьюденту-Фишеру.

Результаты исследований показали, что в течение опыта внешних признаков интоксикации у животных не отмечалось. Все животные как опытной, так и контрольной группы были активными. Реакция на внешние раздражители сохранена. Признаков токсикоза и гибели животных не наблюдали, что дает основание говорить о хорошей переносимости препарата даже в 5-кратной дозе.

Результаты взвешивания свидетельствуют о положительной динамике прироста живой массы животных.

Функциональное состояние печени оценивали по концентрации общего белка и его фракций, а также по концентрации глюкозы в сыворотке крови цыплят.

Ферментный спектр включал определение активности индикаторных ферментов ACT и АЛТ.

О состоянии функциональной активности почек судили по концентрации креатинина и мочевой кислоты в сыворотке крови животных. Анализ биохимических показателей крови животных разных групп в указанных выше дозах не выявил статистически значимых отличий от таковых параметров у животных контрольной группы. Эти данные косвенно свидетельствуют об отсутствии нарушений в функциональном состоянии почек и печени.

Влияние препарата на периферическую кровь оценивали по морфологическому составу клеток и уровню гемоглобина. Установлено, что введение препарата не вызывает достоверных отличий гематологических показателей у животных опытных и контрольной группы.

Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что заявленная лекарственная композиция хорошо переносится цыплятами бройлерами в дозе 10 мг/кг массы тела по ДВ, а также и в пятикратно увеличенной дозе (50 мг/кг массы тела по ДВ), и поэтому ее можно считать безопасным в применении препаратом.

Пример 6. Фармакокинетика заявленной фармацевтической композиции у птицы при оральном введении.

Исследования проводили на курах несушках живой массой 3 кг, возраст 1,5 года. Вводили разбавленный в 5 раз дистиллированной водой препарат перорально в дозировке 20 мг/кг. Отбор крови осуществляли через 0,25; 0,5; 1: 1,5; 2; 4; 6; 24; 48; 72; 96; 120 часов. В результате полученных исследований установлено, что концентрация доксициклина в крови исследуемых животных достигает максимума через 1 час после введения препарата, однако даже на 5 сутки наблюдения в крови присутствует исследуемый антибиотик. Установлено, что концентрация доксициклина в крови исследуемых животных через 1 час после введения составляет 4,19 мкг/мл с дальнейшим падением в 2 раза к 3 суткам, и далее до 5 суток сохраняется в концентрации 1 мкг/мл.

Таким образом, заявленный препарат при однократном введении интенсивно всасывается и поступает в кровь, достигая через 1 час максимальной концентрации.

Препарат длительное время находится в крови (до 5 часов). Максимальное время нахождения в крови - 120 часов - наблюдается при введении препарата в дозе 20 мг/кг.

На основании полученных данных препарат рекомендуется вводить птице орально в дозе 10 мг/кг один раз в день.

Пример 7. Клинические испытания.

Были проведены клинические испытания предложенной композиции на поголовье свиней и птиц. С лечебной и лечебно-профилактической целью данное лекарственное средство назначалось свиньям и птице при сальмонеллезе, дизентерии, энзоотической пневмонии, пастереллезе, микоплазмозе, колибактериозе. Препарат применяли перорально с водой для поения в суточной дозе 0,5 мл на 1 л питьевой воды в течение 3-5 дней. В период лечения свиньи и птицы получали только воду, содержащую лекарственный препарат. Лечебный раствор готовили ежедневно из расчета суточной потребности животных в воде.

В результате испытаний установлено, что:

- заявленная лекарственная композиция обладает высокой эффективностью при лечении и профилактике заболеваний бактериальной этиологии;

- противопоказанием к применению является повышенная индивидуальная чувствительность животного к компонентам препарата. Препарат запрещено применять курам-несушкам в виду накопления доксициклина в яйце, а также животным с выраженной почечной и печеночной недостаточностью;

- не допускается одновременное применение заявленного препарата с миорелаксантами, бактерицидными антибиотиками пенициллиновой и цефалоспориновой групп, минеральными добавками и лекарственными препаратами, содержащими соли кальция, магния, железа и алюминия, ввиду возможного снижения антибактериальной активности;

- при применении заявленного лекарственного средства с учетом указанных выше рекомендаций побочных эффектов и осложнений не наблюдается.

Доксициклина хиклат, бромгексина гидрохлорид, лактулоза и 2-пирролидон, входящие в состав заявленной композиции, образуют устойчивый комплекс именно в указанном диапазоне значений ингредиентов, что позволяет в 1,5 раза увеличить срок использования препарата.

Таким образом, поставленная задача решена - получено стабильное при хранении лекарственное средство, обладающее широким спектром антибактериального действия при пероральном введении животным, нетоксичное и не вызывающее при применении осложнений и побочных эффектов.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения инфекций бактериальной этиологии у животных. Композиция содержит, масс.%: доксициклина хиклат - 5,0-15,0, бромгексина гидрохлорид - 0,25-0,75, лактулоза - 0,5-1,5, 2-пирролидон - остальное. Заявленная композиция обладает широким спектром антибактериального действия при пероральном введении животным, нетоксична и не вызывает при применении осложнений и побочных эффектов. 7 пр.

Композиция для лечения инфекций бактериальной этиологии у животных, отличающаяся тем, что содержит доксициклина хиклат, бромгексина гидрохлорид, лактулозу и 2-пирролидон при следующем соотношении ингредиентов (масс.%):
доксициклина хиклат 5,0-15,0 бромгексина гидрохлорид 0,25-0,75 лактулоза 0,5-1,5 2-пирролидон остальное