КОМПЛЕКС БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 2014 года по МПК A61K35/56 B01D11/02 A61P9/00 

Изобретение относится к области фармации и медицины, а именно к новым лекарственным средствам для лечения и профилактики заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Заболевания сердечно-сосудистой системы занимают первое место в мире среди причин смерти людей трудоспособного возраста. Количество пациентов, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями, возрастает с каждым годом, а возраст таких пациентов значительно помолодел, что связано с изменением образа жизни, рациона питания, с постоянными стрессами и изменением окружающей среды. Одним из наиболее широко распространенных заболеваний сердечно-сосудистой системы и наиболее значимой медико-социальной проблемой является метаболический синдром. Одним из важнейших звеньев которого является гипертоническая болезнь, играющая центральную роль в развитии таких осложнений, как острый инфаркт миокарда, инсульт, сердечная и почечная недостаточность.

Большое распространение сердечно-сосудистых заболеваний во всем мире, а также зачастую сочетанное протекания различных нозологических форм, требует создания эффективных и малотоксичных лекарственных препаратов для их лечения и профилактики.

За рубежом разработан и успешно применяется в клинической практике целый арсенал препаратов на основе комплекса биологически активных веществ, получаемых из экстрактов, вытяжек и лизатов органов и тканей животных (раверон, румалон, солкосерил, церебролизин и т.д.). В нашей стране выпуск подобных препаратов еще только осваивается, причем для получения препаратов из животного сырья используют экстракцию измельченных органов убойного скота. Однако получаемые таким способом препараты содержат значительное количество высокомолекулярных белковых примесей, обусловливающих их высокую реактогенность.

Мировой и отечественный опыт фармации свидетельствует об огромном потенциале морских гидробионтов как сырьевых источников для создания оригинальных фармацевтических субстанций и лекарственных средств. В отличие от показателей видового обилия, филогенетическое (макротаксономическое) разнообразие в море гораздо выше. По-видимому, благодаря адаптации к разнообразным факторам окружающей среды ряд морских животных и растений выработал способность к продукции уникальных вторичных метаболитов, многие из которых обладают высокой фармакологической активностью (Bhakuni D.S., Rawat D.S. Bioactive marine natural products: Anamaya Publishers, New Delhi, India. 2005. 382 p.). Биологически активные вещества морского происхождения могут использоваться в качестве фармацевтических субстанций и служить синтонами для получения лекарств с новыми или улучшенными фармакологическими характеристиками. Эти вещества являются вторичными метаболитами, то есть природными соединениями, не имеющими всеобщего распространения и присутствующими только у представителей отдельных таксонов.

Съедобные морские ежи, помимо промыслового объекта для пищевой промышленности, являются богатым источником уникальных биологически активных веществ. Морские ежи рода Strongylocentrotus относятся к самому распространенному роду правильных морских ежей, обитающих в морях России [Бажин А.Г., 2002]. Массовые скопления промысловых видов морских ежей рода Strongylocentrotus отмечены вдоль побережья Дальнего Востока, в прибрежных водах Приморья, Сахалина, Курил, Камчатки, а также в Баренцевом море, что позволяет говорить о достаточности сырьевой базы для получения препаратов.

Гонады (икра) морских ежей представляет особый интерес с точки зрения выделения комплекса БАВ для профилактики и лечения заболеваний сердечнососудистой системы.

Гонады морских ежей является богатым источником биологически активных веществ для лечения различных патологий. Содержащиеся в икре морских ежей омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты известны своими гиполипи-демическими, антиатерогенными, гипотензивными, тромболитическими эффектами, способностью улучшать функцию эндотелия [Simopoulos A.P., 2003]. Эйкозопентаеновая кислота, содержащаяся в икре морских ежей, снижает синтез триглицеридов и холестерина в организме млекопитающих, уменьшает свертываемость крови и предотвращает образование тромбов [Юрьева М.И. и др., 2000, Крыжановский С.А., и др. 2009]. В икре морских ежей обнаружены каротиноиды [Задорожный П.А., 2003], которые защищают мембраны клеток от разрушения активными формами кислорода, свободными радикалами при оксидативном стрессе, используются для лечения и профилактики сердечнососудистых заболеваний [Шашкина М.Я. и др., 2009]. Установлено достоверное снижение общего холестерина липопротеидов низкой плотности и триглицеридов, а также увеличение относительного содержания липопротеидов высокой плотности при приеме продукта, полученного из икры морских ежей, пациентами с диагнозом ишемическая болезнь сердца, как в монотерапии, так и в сочетании с уменьшенной вдвое дозой аторвастатина [Крыжановский С.П. и др., 2011].

Известна композиция, содержащая экстракт гонад, кишок или панцирей морских ежей (Anthocidaris crassispina, Hemicentrotus pulcherhmus, Pseudocentrotus depressus или Strongylocentrotus internmedius) для профилактики и лечения заболеваний печени, обладающая антиоксидантным и детоксифицирующим действием [Pat. Appl. KR 20110001251 A, publ. 06.01.2011].

Известна биологически активная добавка к пище, обладающая действием на сердечно-сосудистую и нервную системы организма, а также укрепляющая капилляры и стенки артерий, нормализующая давление и вес [RU 2165719 С1, 27.04.2001]. Биологически активная добавка содержит растворимые пищевые волокна, биологически активные вещества растительного и морского происхождения (в том числе содержит икру морских ежей).

Недостатком данных изобретений является сложный состав БАД, изобретения не предусматривают выделения из икры комплекса биологически активных соединений, влияющих на сердечно-сосудистую систему, икра морских ежей в предложенных композициях используется в количествах, не позволяющих проявить биологическую активность в полной мере.

Также известна биологически активная добавка к пище для профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы, содержащая компоненты растительного происхождения, икру, полостную жидкость и панцирь морского ежа, [RU 2316230 С2, 10.02.2008]. Недостатком данной биологически активной добавки является многокомпонентность состава, включающая необработанные части животного происхождения, невозможность провести идентификацию компонентов и обеспечить постоянство состава и как следствие - фармакологического действия.

Из уровня техники известны различные способы получения биологически активных веществ из икры морского ежа.

В патенте - RU 2209242 С1, 27.07.2003, раскрыт способ переработки икры морского ежа, включающий подготовку сырья, смешивание ее с водно-спиртовым раствором при объемном соотношении 1:8-25 и температуре 25-35°С, настаивание, отстаивание, отделение настойки от твердой фракции, фильтрацию. Вышеописанная настойка полезна при ишемической болезни сердца, атеросклерозе. Недостатком данного способа является использование только одного экстрагента - 28-70% водно-спиртового раствора, что не позволяет наиболее полно произвести экстракцию биологически активных компонентов из сырья, а также при этом происходит переход значительного количества белков в настойку, что затрудняет процесс фильтрации и является нежелательным фактором, способствующим микробиологической порче продукта.

Из патента - RU 2283006 С1, 10.09.2006, известен способ безотходной переработки икры морских ежей. При этом сначала замороженную икру обрабатывают 95% этиловым спиртом, настаивают в течение 6-10 суток при комнатной температуре, полученный экстракт декантируют, икру вновь обрабатывают 10% водным раствором этилового спирта и настаивают в течение 2-4 суток при температуре 4-10°С. Полученный экстракт декантируют, оба экстракта объединяют и отстаивают, а твердый остаток икры сушат и измельчают. Описанный способ позволяет наиболее полно произвести экстракцию биологически активных компонентов из сырья и использовать твердый остаток в качестве корма для животных. В результате настаивания икры морских ежей в 95% этиловом спирте в течение 6-10 суток при комнатной температуре происходит полная экстракция из сырья хиноидных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, которые выделяются из сырья только при обработке этиловым спиртом с концентрацией не менее 95%. При этом происходит обогащение экстракта каротиноидами и фосфолипидами, содержащими в своем составе полиненасыщенные жирные кислоты, которые также хорошо экстрагируются только этиловым спиртом большой концентрации. Последующее настаивание этой же икры в 10% водном растворе этилового спирта в течение 2-4 суток при температуре 4-10°С позволяет дополнительно извлечь из нее другие биологически активные вещества. Преимущественно водорастворимые, в том числе ганглиозиды. Недостатком описанного способа является то, что целевой продукт, содержит хиноидные соединения и липидные фракции, обладающие только антиоксидантной активностью, при полном отсутствии пептидных компонентов.

Известно средство, выделенное из замороженной икры морских ежей, для поддержания функции иммунной системы, сердца, головного мозга, мужской репродуктивной системы. Способ выделения включает замораживание икры морских ежей и последующую обработку его экстрагентами с последующим фильтрованием [RU 2420212 С1, 10.06.2011]. Предложенный способ позволяет получить продукт, содержащий пептиды с молекулярной массой в пределах от 300 до 3000 Да. Недостатком данного продукта является отсутствие в нем биоактивных липофильных соединений.

В патенте RU 2116039, 27.07.1998 описано, что икра (гонады) морских ежей используется в лечебно-профилактических целях. Исследованиями, проведенными в ряде институтов России, подтверждено, что икра морских ежей может быть рекомендована в качестве лечебно-профилактического препарата при онкологических заболеваниях и заболеваниях сердечно-сосудистой системы. Ученые установили, что липидные препараты из икры морского ежа обладают различным ингибирующим действием на свертывание крови. Эта икра содержит различные минеральные вещества (медь, цинк, кобальт магний и т.д.), а также жирорастворимые витамины (A, D, E) и водорастворимые витамины (С, B₆, ниацин, рибофлавин, тиамин, фолацин и др.). В данном документе раскрыт способ получения пищевого продукта с лечебно-профилактическими свойствами из гидробионтов, включающий извлечение, посол, измельчение, при этом массовая доля соли в икре составляет не более 18%, смешивают с маслом из растительных масел, содержание икры в готовом продукте составляет 15-20%.

Вышеуказанный документ выбран в качестве прототипа. Недостатком прототипа является недостаточная эффективность в лечении сердечнососудистых заболеваний.

Задачей изобретения является расширение спектра лекарственных средств для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, а также получение средства, содержащего более полный набор сконцентрированных биологически активных веществ, эффективных при лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний.

Техническим результатом является повышенная эффективность в лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний за счет синергизма действия биологически активных веществ в выделенном комплексе из гонад морского ежа Strongylocentrotus droebachiensis.

Сущность изобретения состоит в использовании нового комплексного препарата, содержащего фосфолипиды, другие сложные липиды, пептиды, аминокислоты, каротиноиды, жирные кислоты, стерины для лечения и профилактики заболеваний сердечно-сосудистой системы, оказывающее гипотензивное, антиоксидантное, противоишемическое, гипогликемическое действие, не токсичное, удобное в использовании и стабильное при хранении. Весь перечисленный комплекс веществ в составе препарата представлен природными биологически активными веществами, выделенными из гонад морских ежей Strongylocentrotus droebachiensis, очищенных от балластных веществ обработкой 4-7 объемами смеси хлороформа и этанола в соотношении 2:1 в течение 19-24 ч, путем экстракции очищенных гонад раствором 95% этилового спирта при соотношении сырье : экстрагент 1:(4-7) при комнатной температуре, отделения жидкого спиртового экстракта, высушивания. Выход сухого продукта составляет 4,5-6,5% от массы гонад.

Комплекс биологически активных веществ (БАВ), выделенных из гонад морских ежей, содержит природные биологически активные вещества в следующих количествах (масс.%):

- сложные липиды, свободные жирные кислоты и стерины - 45-70

из них фосфолипиды - 8-20, содержащие фосфатидилхолин в количестве 3-10

- пептиды и аминокислоты - 25-40

- каротиноиды 0,5-1,4

- токоферолы 0,09-1,0

Комплекс БАВ гонад морских ежей, входящих в состав средства, обеспечивает его высокую эффективность, т.к. действие сложных липидов сочетается и дополняется действием пептидов, выполняющих роль биорегуляторов, полиненасыщенные жирные кислоты, в частности эйкозопентаеновая кислота, снижают синтез триглицеридов и холестерина, аминокислоты стимулируют метаболические процессы, являясь пластическим материалом для синтеза белка, каротиноиды усиливают антиоксидантные свойства фосфолипидов и активность ферментов.

Поставленная задача решается созданием средства при следующем содержании компонентов (в мг/г):

Комплекс БАВ гонад морских ежей - 3-100;

Вспомогательные вещества - остальное.

Способ получения средства реализуется следующим образом: комплекс БАВ гонад смешивают с необходимыми фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, придают необходимую дозированную форму.

Преимущество выделенного комплекса БАВ состоит в следующем:

1. комплекс выделен из природного сырья оригинальным методом, позволяющим выделить и сконцентрировать основные биоактивные соединения (фосфолипиды, сложные липиды, пептиды, аминокислоты, каротиноиды, токоферолы и др.);

2. комплекс природных веществ, обеспечивающий синергизм их действия, выделен из одного источника сырья - гонад (икры) морских ежей;

3. процесс выделения комплекса БАВ из икры морских ежей осуществляется без высокотемпературных воздействий и приводит к получению субстанции с сохраненными ценными биологически активными веществами в нативном состоянии;

4. комплекс БАВ может быть использован в различных лекарственных формах (таблетки, мягкие капсулы, твердые капсулы, трансдермальные терапевтические системы и др.).

Осуществление изобретения иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.

Пример 1. Получение комплекса БАВ гонад морских ежей

200 г свежемороженых гонад морских ежей Strongylocentrotus droebachiensis очищают от балластных веществ экстракцией 1000 мл двухфазным экстрагентом хлороформ-этанол (2:1), сливают, подсушивают на воздухе и снова заливают 1000 мл спирта этилового 95%, выдерживают при периодическом перемешивании в течении 20-24 часов при комнатной температуре. Полученный спиртовой экстракт гонад морских ежей отделяют и высушивают. Выход сухого продукта составляет 5,7% от массы гонад.

Пример 2. Лекарственная форма комплекса БАВ представляющая собой масляный раствор в мягких капсулах следующего состава:

Комплекс БАВ гонад морских ежей - 1-20 мг

Масло кукурузное - до 0,3 г

Оболочка: желатин или агар-агар, пластификатор, консервант, вода.

Пример 3. Лекарственная форма комплекса БАВ представляющая собой твердую дозированную форму - таблетку следующего состава:

Комплекс БАВ - 1-20 мг

Вспомогательные вещества (наполнители, связующие вещества и др.) до массы таблетки 0,25 г

Пример 4. Лекарственная форма комплекса БАВ представляющая собой твердую дозированную форму - капсулы следующего состава:

Комплекс БАВ - 1-20 мг

Вспомогательные вещества (наполнители и др.) до массы содержимого капсулы 0,19 г.

Пример 5. Лекарственная форма комплекса БАВ представляющая собой трансдермальную терапевтическую систему следующего состава:

Комплекс БАВ - 3-20 мг

Вспомогательные вещества (пенетрант, адгезив и др.) до 1 г.

Пример 6. Применение для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Гипотензивное действие на линейных крысах с наследственной гипертензией (крысы линии SHR).

Данные, полученные в эксперименте на крысах линии SHR, позволяют судить о снижении уровня артериального давления у животных при воздействии препарата, исключая возможность влияния случайных факторов.

Исследуемый комплекс БАВ по примеру 1 вводили внутрижелудочно в течение 5 дней, предварительно растворив в кукурузном масле. Измерение систолического и диастолического артериального давления (САД и ДАД) осуществлялось до введения и через 120 минут после введения.

Контрольная группа животных получала кукурузное масло в объеме 1 мл.

Измерение артериального давления у животного проводилось с помощью системы измерения артериального давления у крыс (AD Instruments, Австралия).

Данные по изучению влияния комплекса БАВ на артериальное давление у гипертензивных крыс приведены на рисунке 1. Наибольшее снижение исходного уровня и САД, и ДАД наблюдалось в группе животных, получавших комплекс БАВ в дозе 0,1 мг/кг, на второй день введения, при этом наиболее выраженное действие он оказал на уровень диастолического давления (рис.1).

Пример 7. Применение для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Оценка специфической активности комплекса БАВ на экспериментальной модели острого ишемического инсульта.

Индукцию ишемии головного мозга проводили на крысах-самцах линии Sprague-Dawley методом перевязки обеих сонных артерий на фоне достижения гипотонии методом кровопускания. Исследуемый комплекс по примеру 1 вводили по лечебно-профилактической схеме в течение 12 дней в дозе 0,4, 1,2 и 4 мг/кг. В качестве препарата сравнения был выбран препарат актовегин в дозе 89 мг/кг.

В ходе эксперимента оценивали следующие показатели: поведение животных в открытом поле (оценивали горизонтальную и вертикальную двигательные активности, отклонения в моторной сфере) и темно-светлой камере (оценивали тревожность животных, познавательные функции и долговременную память), биохимические показатели: креатинфосфокиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и перекисное окисление липидов (ПОЛ). В основе метода определения ПОЛ лежит реакция между малоновым диальдегидом плазмы крови и тиобарбитуровой кислотой (ТБК).

Исследуемый комплекс БАВ оказал влияние на большинство исследуемых показателей. Его применение привело к улучшению когнитивных функций у экспериментальных животных, улучшению памяти и эмоционального статуса. Наибольшую эффективность в отношении физиологических параметров комплекс БАВ проявил в дозе 0,4 мг/кг, в этой дозе действие комплекса превосходило действие Актовегина - препарата сравнения.

Исследуемый комплекс БАВ снижал активность ферментов ЛДГ и КК, а также снижал ПОЛ. В отношении биохимических показателей более эффективным оказался комплекс БАВ в дозах 1,2 и 4 мг/кг (табл.1).

Таблица 1 Биохимические показатели (М±m, n=10) Описание группы КК, Е/л ЛДГ, Е/л Концентрация в плазме продуктов, реагирующих с ТБК, ммоль/л Интактная 337,8±15,8 701,6±87,7 10,1±0,9² Контрольная 1019,4±53,3¹ 900,4±63,5 15,1±0,8¹ Комплекс БАВ 0,4 мг/кг 516,4±20,9^1,2 856,8±82,0 14,6±1,1¹ Комплекс БАВ 1,2 мг/кг 428,6±56,3² 801,0±28,4 13,3±1,0¹ Комплекс БАВ 4 мг/кг 344,2±11,5² 738,7±66,5 9,2±0,5² Актовегин 263,9±28,1^1,2 778,0±56,6 14,1±0,9¹ Примечание: ¹ - различия статистически значимые по сравнению с интактной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05; ² - различия статистически значимые по сравнению с контрольной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05.

Пример 8. Изучение гипогликемической активности на экспериментальной модели сахарного диабета 2 типа.

Специфическую активность исследуемого средства по примеру 2 изучали на мышах (самцы аутбредные) на модели стрептозотоцин-индуцированного диабета 2 типа, доза вводимого стрептозотоцина составила 60 мг/кг, время развития патологии десять дней. Данная схема позволила добиться экспериментальной патологии близкой к сахарному диабету 2 типа в клинике.

На фоне сформированной патологии осуществляли внутрижелудочное введение исследуемого средства в течение 10 дней (по лечебной схеме) в дозе 1,8 мг/кг. У животных определяли концентрацию глюкозы в крови, а также показатели окислительного стресса - восстановленного глутатиона, малонового альдегида - МДА и оксида азота - NO (спустя 10 дней после введения).

Установлено, что концентрация глюкозы на фоне применения исследуемого средства была ниже значений контрольной группы на 17%.

Данные по изменению концентраций восстановленного глутатиона и малонового альдегида приведены в таблице (табл.2)

Таблица 2 Состояние антиоксидантного статуса на фоне лечения комплексом БАВ (М±m, n=8) Группа Глутатион, ммоль/мл МДА, мкмоль/л Интактная 0,60±0,04 11,1±0,4 Контроль 0,26±0,06¹ 19,0±1,3¹ Средство по прим. 2 0,51±0,05² 11,0±1,0² Примечание: ¹ - различия статистически значимые по сравнению с интактной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05; ² - различия статистически значимые по сравнению с контрольной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05.

Полученные результаты свидетельствуют о статистически значимом снижении концентрация МДА и увеличении содержания глутатиона, что говорит о наличии выраженной антиоксидантной активности изучаемого средства. В ходе эксперимента было отмечено значимое увеличение концентрации NO у животных, получавших исследуемое средство с 137,4±9,7 мкмоль/л до 458,7±29,9 мкмоль/л, что позволяет предположить его влияние на активность NO-синтазы. NO является одним из самых сильных вазодилятаторов и играет ключевую роль в регуляции сосудистого тонуса, агрегации тромбоцитов, биологического дыхания в митохондриях, нервной регуляции.

Пример 9. Изучение специфической активности на модели стрептозоцин-индуцированного метаболического синдрома у спонтанно-гипертензивных животных.

Активность исследуемого средства по примеру 2 изучали в эксперименте на линейных крысах с наследственной гипертензией (крысы линии SHR) на модели стрептозотоцин-индуцированного метаболического синдрома, доза вводимого стрептозотоцина составила 60 мг/кг, время развития патологии десять дней.

На фоне сформированной патологии осуществляли внутрижелудочное введение исследуемого средства в дозе 0,4 и 0,8 мг/кг по лечебно-профилактической схеме в течение 35 дней. В качестве препарата сравнения был использован метформин в дозе 100 мг/кг.

В ходе эксперимента была установлена эффективность средства в отношении снижения образования гликозилированного гемоглобина, которая превышала таковую препарата сравнения метформин (табл 3). Гликозилированный гемоглобин является интегральным показателем гликемии, прогностическим показателем выраженности сахарного диабета (данный показатель позволяет судить о степени компенсации заболевания) и достоверным предиктором микрососудистых и макрососудистых осложнений (чем выше уровень данного показателя, тем больше риск возникновения осложнений).

Таблица 3 Содержание гликозилированного гемоглобина (М±m, n=8) Группа Содержание гликозилированного гемоглобина, % Интактная 5,4±0,4 Контрольная 1 (изотонический раствор) 12,1±0,5¹ Контрольная 2 (масло кукурузное) 12,6±0,7¹ Средство по прим.2, 0,4 мг/кг 8,8±1,2^1,2 Средство по прим.2, 0,8 мг/кг 5,7±0,6² Метформин 100 мг/кг 11,1±1,8¹ Примечание: ¹ различия статистически значимые по сравнению с интактной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05; ² различия статистически значимые по сравнению с контрольной группой, t-тест для независимых переменных при р<0,05.

Исследуемое средство в дозе 0,8 мг/кг проявило высокую активность, превосходящую препарат сравнения метформин в дозе 100 мг/кг:

- на 20 день исследования (13 день после индукции патологии) концентрация глюкозы была ниже, чем в контрольной группе в 2 раза и составила в среднем 7,4 мМ;

- к концу исследования (34 день введения, 27 день патологии) при моделировании сахарной нагрузки наблюдали повышение толерантности к глюкозе;

- отмечено снижение в сыворотке крови активности АЛТ и увеличение активности α-амилазы, что свидетельствует о замедлении процессов деструкции поджелудочной железы и восстановлении ее физиологической активности;

- в ходе гистологического исследования поджелудочной железы установлено, что под влиянием средства происходит увеличение диаметра островков Лангерганса;

- по сравнению с контрольной группой через 30 дней введения средства показатели САД и ДАД были ниже на 30 и 20 мм рт.ст., соответственно;

Полученные данные позволяют сделать вывод об эффективности использования исследуемого средства при исследуемой патологии.

Пример 10. Установление механизма действия комплекса БАВ гонад морских ежей на тонус сосудов при моделировании вазоконстрикции.

Исследование выполнено на куриных эмбрионах (N=10) породы Хайсекс Браун в возрасте 10 дней. На ХАО эмбрионов интактной группы наносили плацебо (кукурузное масло). В качестве вазоконстриктора использовали раствор метилового эфира аргинина в дозе 12 мг/эмбрион. Тестируемый объект комплекс БАВ гонад морских ежей по примеру 1 исследовали в трех дозах - 1, 3, 4 и 12 мкг/эмбрион, препарат сравнения L-аргинина гидрохлорид в дозе 20 мг/эмбрион. Влияние препаратов на тонус сосудов 1, 2 и 3 порядка оценивали через 1, 15 и 30 минут после вазоконстрикции.

При исследовании на ХАО эмбрионов было установлено, что при нанесении комплекса БАВ гонад морских ежей происходит дозозависимое восстановление тонуса сосудов до интактного уровня, при этом эффективность комплекса БАВ в дозах 4 и 12 мкг/эмбрион сопоставима с действием препарата сравнения и продолжалась в течение 30 минут. Применение тестируемого комплекса БАВ в дозе 1,3 мкг/эмбрион приводило к незначительному снижению тонуса сосудов 1 и 2 порядка через 15 минут воздействия и восстановлению вазоконстрикции к 30 минутам. Наиболее выраженный эффект исследуемого комплекса БАВ гонад морского ежа и препарата сравнения наблюдали через 15 минут после нанесения на ХАО.

Пример 11. Объектом исследования явились экстракты, полученные из гонад морского ежа, имеющие различный набор биологически активных соединений и рассматриваемые в качестве возможных кандидатов лекарственных средств для комплексной терапии и профилактики гипертонической болезни.

Цель работы - исследование влияния новых кандидатов лекарственных средств из гонад (икры) морского ежа на уровень артериального давления (систолического и диастолического) у крыс линии SHR при однократном и курсовом введении в разных дозах с использованием разных путей введения.

В качестве модели гипертонической болезни была использована линия крыс SHR (спонтанно-гипертензивные крысы).

1. Экстракт из гонад морского ежа «ИЕ1»

Получен путем экстракции хлороформ/этанол (2/1) Представляет собой вязкую густую клейкую массу оранжево-коричневого цвета, растворимую в гидрофобных растворителях. Для получения раствора ИЕ1 было использовано кукурузное масло (Масло кукурузное «ALTERO» рафинированное, дезодорированное, марки П, ГОСТ 8808-2000). Хранение при температуре не выше +4°С.

2. Экстракт из гонад морского ежа «ИЕ2»

Получен путем очистки икры смесью хлороформа и этанола (2:1) и последующей экстракции этанолом 95% (предложенное средство). Представляет собой вязкую густую клейкую массу оранжево-коричневого цвета, растворимую в гидрофобных растворителях. Для получения раствора экстрактов ИЕ2 было использовано кукурузное масло (Масло кукурузное «ALTERO» рафинированное, дезодорированное, марки П, ГОСТ 8808-2000).

Хранение экстрактов осуществлялось при температуре не выше +4°С.

3. Экстракт из гонад морского ежа «ИЕ3»

Получен путем очистки гонад смесью хлороформа и этанола (2:1) и последующей экстракции этанолом 70%. Представляет собой порошок желтого цвета. Для получения эмульсии экстрактов ИЕ3 был использован раствор этанола 70% и кукурузное масло (Масло кукурузное «ALTERO» рафинированное, дезодорированное, марки П, ГОСТ 8808-2000).

Хранение при температуре не выше +4°С.

4. Экстракт из гонад морского ежа «ИЕ4»

Получен путем очистки гонад смесью хлороформа и этанола (2:1) и последующей экстракции этанолом 50%. Представляет собой клейкий порошок желто-оранжевого цвета. Для получения эмульсии экстрактов ИЕ4 был использован раствор этанола 50% и кукурузное масло (Масло кукурузное «ALTERO» рафинированное, дезодорированное, марки П, ГОСТ 8808-2000).

Хранение при температуре не выше +4°С.

5. Экстракт из гонад морского ежа «ИЕ5»

Получен путем очистки гонад смесью хлороформа и этанола (2:1) и последующей экстракции этанолом 20%. Представляет собой порошок светло-коричневого цвета. Для получения раствора экстрактов ИЕ5 была использована дистиллированная вода.

Хранение при температуре не выше +4°С.

Таблица 4 Значения артериального давления при однократном внутрижелудочном введении экстрактов икры морского ежа (М±m) мм. рт.ст. 0 мин 30 мин 60 мин 120 мин 240 мин ИЕ 1, 50 мг/кг, n=6 САД 177,5±4,0 171,7±9,9 183,5±7,0 170,6±7,6 164,3±13,9 ДАД 101,3±3,7 99,5±0,3 101,5±5,9 97,0±5,3 95,2±9,9 ИЕ 2, 50 мг/кг, n=6 САД 189,2±11,4 163,9±12,5 166,7±11,8 141,4±5,9* 137,6±1,7* ДАД 107,3±7,8 95,6±5,2 99,2±5,4 85,6±3,7* 85,1±0,9* ИЕ 3, 50 мг/кг, n=6 САД 181,6±8,7 173,8±7,1 161,6±9,1* 158,4±8,1* 156,0±10,9* ДАД 103,2±5,2 101,1±3,7 99,5±5,5 91,3±4,7* 90,7±7,3* ИЕ 4, 50 мг/кг, n=6 САД 173,9±5,6 166,1±6,7 158,8±8,5 164,6±15,4 169,0±15,7 ДАД 103,1±4,5 97,2±3,9 95,9±7,9 96,3±10,1 97,2±11,5 ИЕ 5, 50 мг/кг, n=6 САД 198,5±6,5 179,3±6,2* 177,3±14,9* 177,7±3,3* 181,7±13,3 ДАД 115,1±3,9 105,1±3,5* 103,2±9,1* 102,5±2,5* 107,3±9,5 Примечание: * достоверное отличие значения артериального давления от такового до введения препарата (0 минут), р<0,05 при оценке различий для зависимых переменных

Экстракт ИЕ 1 в дозе 50 мг/кг не проявил эффекта в отношении артериальной гипертензии при пероральном введении. Это выражалось в отсутствии снижения как систолического, так и диастолического давления на протяжении 240 минут после введения.

Экстракт ИЕ 2 в дозе 50 мг/кг оказал наиболее выраженное влияние на тонус сосудов. Снижение артериального давления начиналось уже через 30 минут после введения и достигало максимума к 240 минутам. При этом систолическое давление снижалось к 240 минуте в среднем на 50 мм. рт.ст. Однако основное снижение тонуса сосудов происходило с 30 по 120 минуту. После 120 минуты артериальное давление снижалось незначительно и поддерживалось на постоянном уровне.

Экстракт ИЕ 3 в дозе 50 мг/кг также оказал влияние на уровень артериального давления, снижая САД и ДАД на протяжении 240 минут. Снижение АД начиналось с 60 минут после введения. САД при применении ИЕ 3 уменьшалось в среднем на 25 мм. рт.ст. на протяжении 240 минут после введения. Максимум снижения САД (на 25 мм. рт.ст.) наблюдался через 120 минут после введения.

Экстракт ИЕ 4 в дозе 50 мг/кг не оказал выраженного влияния на артериальное давление при пероральном применении.

Экстракт ИЕ 5 в дозе 50 мг/кг обладал слабо выраженной эффективностью в отношении артериальной гипертензии, снижая САД в среднем на 7-10 мм. рт.ст. на протяжении 120 минут после введения. К 240 минуте эффективность экстрактов снижалась.

Установлено, что при пероральном введении в дозе 50 мг/кг оказались эффективность в отношении артериальной гипертензии проявляют экстракты: ИЕ 2 > ИЕ 3 > ИЕ 5. Экстракты ИЕ 1 и ИЕ 4 не влияли на уровень САД и ДАД у крыс линии SHR.

Таким образом, благодаря своему механизму действия и широкому спектру фармакологических эффектов предложенный комплекс БАВ гонад морских ежей оказывает влияние на основные звенья патогенеза дисфункции эндотелия при ишемии головного мозга, сахарном диабете и повышенном артериальном давлении, связанные с процессами свободнорадикального окисления и нарушения функционирования NO-синтазы. Перечисленные свойства комплекса БАВ гонад морских ежей способствует эффективному лечению сердечнососудистых заболеваний.

Источники информации

1. Simopoulos A.P. Essential fatty acids in health and chronic diseases // Forum Nutr. 2003. V.56. P.67-70.

2. Юрьева М.И., Викторовская Г.И., Акулин В.Н. Состав липидов гонад морского ежа strongylocentrotus pallidus из японского моря // Известия ТИНРО. 2000. 127 (1-2) С.483-489.

3. Крыжановский С.А., Вититнова М.Б. Омега-з полиненасыщенные жирные кислоты и сердечно-сосудистая система // Физиология человека. 2009. 35(4). С.110-123.

4. Задорожный П.А. Влияние среды и состояния организма на содержание каротиноидов у морских ежей. Дисс… канд. биол. наук. Владивосток 2003. 126 с.

5. Шашкина М.Я., Шашкин П.Н., Сергеев А.В. Каротиноиды как основа для создания лечебно-профилактических средств // Российский биотерапевтический журнал. 2009. Т.8., №4. С.91-98.

6. Крыжановский С.П., Яцкова М.А., Голавочева В.Д. Гиполипидемическое действие БАД из икры морских ежей в монотерапии и в комбинации с аторвастатином // Материалы VI научно-практической конференции «Фундаментальная наука - медицине». 2011. С.12.

7. Бажин А.Г. Особенности распространения морских ежей рода Strongylocentrotus у побережья восточной Камчатки // Биология моря. 2002. Т.28, №5. С.339-347.

8. Пат. RU 2316230 C2, 10.02.2008, A23/L 1/30, A61K 36/00.

9. Пат. RU 2165719 С1, 27.04.2001, A23L 1/30, A23L 1/39, A23L 1/06, A23L 2/385, C12G 3/06, A23G 3/00.

10. Пат. RU 2420212 С1, 10.06.2011, A23L 1/325.

11. Пат. RU 2209242 С1, 27.07.2003, C12G 3/06

12. Пат. RU 2283006 С1, 10.09.2006, A23L 1/325, B01D 11/00

13. Пат. RU 2116039 С1, 27.07.1998, A23L 1/33

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний. Комплекс биологически активных веществ для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, выделенный из гонад морских ежей Strongylocentrotus droebachiensis, очищенных от балластных веществ, полученный путем экстракции очищенных гонад раствором 95% этилового спирта при определенных условиях, отделения жидкого спиртового экстракта, высушивания. Средство для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, содержащее комплекс биологически активных веществ. Вышеописанные комплекс и средство эффективны для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 11 пр.

1. Комплекс биологически активных веществ для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, характеризующийся тем, что он выделен из гонад морских ежей Strongylocentrotus droebachiensis, очищенных от балластных веществ обработкой 4-7 объемами смеси хлороформа и этанола в соотношении 2:1 в течение 19-24 ч, путем экстракции очищенных гонад раствором 95% этилового спирта при соотношении сырье : экстрагент 1:(4-7) при комнатной температуре, отделения жидкого спиртового экстракта, высушивания, при этом комплекс включает, мас.%:
сложные липиды, свободные жирные кислоты и стерины - 45-70, из них фосфолипиды - 8-20, содержащие фосфатидилхолин в количестве 3-10;
пептиды и аминокислоты - 25-40;
каротиноиды 0,5-1,4;
токоферолы 0,09-1,0.

2. Комплекс по п.1, обладающий гипотензивным, противоишемическим, антидиабетическим и вазодилатирующим действием.

3. Средство для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, содержащее комплекс биологически активных веществ по п.1.

4. Средство по п.3, выполненное в форме таблеток, мягких капсул, твердых капсул, трансдермальных терапевтических систем.